某些致病真菌的聚合酶链反应检测

分子生物学技术的发展为深部真菌感染的诊断提供了新的手段.我们建立一种比其它常规方法更为快速、稳定的体系,以协助临床的早期诊断和治疗.     

聚合酶链反应快速检测念珠菌属

病原真菌因具有特殊的细胞壁结构,故聚合酶链反应(PCR)检测方法自建立以来一直需要经过反复的真菌破壁和DNA抽提过程才能获取提纯的DNA,以进行下一步的PCR检测^[1-3].近来有学者已使用基因释放剂、CTAB及异硫氰酸胍等^[4-6]对真菌菌株或临床标本进行前期处理,然后进行PCR检测,但这仍需要配制复杂的原生质体形成缓冲液、原生质体裂解缓冲液^[6]等,或者高额购买商品化的基因释放剂^[4,5],这不仅需要较高的技术要求、较大的实验成本、经过一定训练的技术人员,还要历经较长的实验时间,严重限制了真菌病PCR检测方法在临床的应用和普及.     

聚合酶链反应检测深部致病真菌的实验研究

目的 建立能用于临床实践的检测常见致病真菌的聚合酶链反应(PCR)方法.方法 设计了以热启动PCR为基础的实验方法,首先用真菌通用引物对标本进行单重PCR,若阳性,再用白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的种特异性引物进行三重PCR来检测这3种常见致病真菌.结果 对9属55种78株常见深部真菌均扩增出260bp的DNA片段,而对细菌和人DNA均未扩增出目的 片段,具有高度特异性和敏感性,该方法操作简便且成本低.结论 以热启动PCR为基础的单重PCR和三重PCR方法可能成为临床上深部真菌感染理想的快速诊断工具.     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体

聚合酶链反应检测沙眼衣原体王宏伟综述王家璧审校北京协和医院（邮政编码１００７３０）衣原体属由肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和沙眼衣原体三种衣原体组成，其共同的特征是有一脂多糖抗原决定簇。沙眼衣原体按血清型分为１５型，Ａ、Ｂ、Ｂａ、Ｃ四型引起沙眼，血清型Ｄ、...     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体

聚合酶链反应检测沙眼衣原体孔繁荣，朱学骏，张耕耘，周骏马，陈受宜北京医科大学第一医院皮肤科（邮政编码１０００３４）我们建立了聚合酶链反应检测沙眼衣原体的方法，对１００例ＳＴＤ门诊患者进行了检测。材料与方法１．临床标本来源１９９３年２月～３月在北京市某...     

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体的临床应用

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体的临床应用朱美玲，李俊杰，陈汝光广东深圳市宝安西乡医院（邮政编码５１８１０２）临床资料与方法一、标本来源为１９９４年７月～１９９５年３月本院皮肤科和东莞市人民医院皮肤科疑为梅毒感染的２０例病人血清和分泌物标本。二、ＰＣＲ扩增...     

真菌特异性通用引物的聚合酶链反应系统的实验与临床研究

目的　为了判断临床和实验室标本中是否存在病原性真菌。方法　设计了一个以热启动聚合酶链反应 (PCR)为基础的实验方法 ,以一段真菌特异性DNA序列作为通用引物进行检测。引物序列为 :①AACTTAAAGGAATTGACGGAAG ;②GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC。结果　该法能在 3小时之内对所用的全部 2 3种共 42株重要病原性真菌及经培养证实有真菌的 2 2份临床标本成功地扩增出一条310bp的DNA片段 ,但对其它微生物和人体细胞均未扩增出类似片段。该法敏感性高 ,特异性强。结论　采用通用性强的引物系统配合特异性高的热启动PCR技术检测临床和实验室标本中是否存在病原性真菌的方法有重要的应用潜力。     

1759例应用聚合酶链反应检测性病病原体的结果分析

本文对从１９９５年８月至１９９６年１２月１７５９例在我站基因诊断室应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测性病病原体的结果进行总结分析，以了解我市性病的流行情况，现报告如下资料与方法：１、标本来源和资料：标本来自本站性病科门诊、市人民医院妇产科以及其他医疗单位...     

PCR方法快速检测一些常见医学真菌

目的 为选择一种快速、敏感和特异的方法来检测临床感染的真菌。方法 选取真菌１８ＳｒＤＮＡ序列中两个片段设计引物,对１２种菌株进行ＰＣＲ扩增,均扩增出长约３１０ｂｐ产物。对一些临床常见细菌扩增均无反应。对酶母相真菌白念珠菌、新生隐球菌进行敏感性实验检测。结果 发现二者ＰＣＲ最小检出量均为菌体数达每个反应体系１０＾３。本实验过程总耗时３６ｈ以内。结论 本实验方法可快速特异性检测一些常见医学真菌。     

聚合酶链反应快速诊断浅部真菌病

目的评价聚合酶链反应（PCR）技术直接从临床标本中检测浅部真菌病病原真菌的方法.方法采用蛋白酶K消化法和煮沸法处理临床标本,从中提取致病菌DNA,然后用真菌通用引物ITS1进行PCR扩增检测,并与直接镜检和培养法作对比.结果共收集112例临床标本,PCR检测、直接镜检和培养的敏感性分别为80.7%、96.5%和70.2%,特异性分别为100%、89.1%和100%,阳性预测值分别为100%、90.2%和100%,阴性预测值分别为83.3%、96.1%和76.4%.PCR方法在24 h内即可完成从标本处理至结果判读的全过程.结论PCR检测具有较好的特异性和准确性,且比培养缩短了近2周的时间,为临床快速诊断和及时、合理地治疗浅部真菌病提供参考.     

聚合酶链反应检测解脲支原体

我们根据已知的解脲支原体尿素酶基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物，该组引物对解脲支原体１４个血清型均能扩增出２８６ｂｐ片段，但对实验所用的其它支原体或细菌不能扩增出任何片段，该２８３ｂｐ片段能被限制性内切酶ＨｉｎｃⅡ降解为１５１，１３２ｂｐ两条片段，使用３５个ＰＣＲ循环，可检测出１０＾－１４ｇ的模板ＮＤＡ，约相当于２０个解脲支原体。通过梯度稀释试验证明４０个ＰＣＲ循环时，ＰＣＲ的敏感性与培养法的     

聚合酶链反应检测生殖支原体的研究

具有致病性的生殖支原体（Ｍｇ）生长缓慢，不易培养，而血清学诊断与肺炎支原体又有交叉反应，这给Ｍｇ的临床诊断带来困难。为了进一步解决Ｍｇ的临床检测问题，本研究采用Ｍｇ粘附因子基因序列合成一对引物ＭｇＰａ１和ＭｇＰａ３，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测Ｍｇ。结果表明，对Ｍｇ能产生特异性扩增，片段大小为２８１ｂｐ，而对肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体及淋球菌等则不能扩增出任何片段。作者认为，ＰＣＲ为一种高度特异和敏感性的方法，它为Ｍｇ的临床检测提供了重要的手段。我们还对引物浓度、退火温度及模板量对ＰＣＲ扩增结果的影响进行了初步探讨。     

鸟分支杆菌聚合酶链反应检测的研究

目的 建立敏感性高、特异性强的快速检测鸟分支杆菌的方法.方法 用特异性引物对连续稀释的鸟分支杆菌菌悬液DNA进行PCR扩增,验证其敏感性;并用该引物对除鸟分支杆菌外的其他17株分支杆菌DNA进行扩增,验证其特异性;将正常皮肤组织与鸟分支杆菌的菌悬液混合以模拟临床皮肤感染标本,初步探讨适宜的临床标本前处理的方法,以提高PCR方法在检测临床皮肤组织感染中的敏感性.结果 PCR方法可扩增427bp的鸟分支杆菌DNA片段,敏感性达1×10²个菌细胞/mL,对其他分支杆菌进行扩增,结果均为阴性.对模拟临床皮肤感染标本进行PCR检测,敏感性降低为1×10⁴个菌细胞/mL;将组织匀浆连续倍比稀释后,再加入细菌悬液,结果当组织匀浆稀释度≥1:4时,PCR的敏感性提高到1×10²个菌细胞/mL.结论 PCR方法能敏感、特异地快速检测鸟分支杆菌.     

竞争性聚合酶链反应定量检测沙眼衣原体

为了便于研究沙眼衣原体(CT)感染的致病机理,我们建立了一种竞争性聚合酶链反应(PCR)定量检测CT的方法。合成、克隆并定量了一与CT主要外膜蛋白基因(ompl)靶序列具有相同引物位点的内参标(IS),通过共同扩增已知数量克隆的CTompl野生型模板和IS,构建竞争性PCR标准曲线。恒定拷贝数(1000个分子)的IS与每一待测模板共同扩增,用靶序列与IS的PCR产物的密度比值定量标本中的CT.对11份培养阳性的泌尿生殖道标本进行了CT的定量检测。结果发现,一个培养包涵体形成单位大约相当于75个DNA分子。研究表明:竞争性PCR提供了一种可靠且敏感、可定量临床标本中CT的方法。     

细胞培养、连接酶链反应和六种聚合酶链反应试剂盒检测沙眼衣原体的比较研究

目的 与细胞培养和连接酶链反应（LCR）比较考察6种国产聚合酶链反应（PCR）试剂盒在检测性传播疾病门诊患者标本沙眼衣原体的诊断价值。方法 在北京、上海、南京、天津5家临床医院性病门诊收集到673份尿道／宫颈拭子标本,分别进行沙眼衣原体培养和PCR检测,对结果不相符合的标本采用LCR复检,将各种PCR检测结果分别与培养、LCR以及综合结果进行比较分析。结果 合格病例616例,培养法检测阳性率6．3％,PCR检测阳性率分别为23．5％－28．7％。与培养结果比较,各种PCR检测的敏感性均在90％以上,其中PCR1、PCR2和PCR5均达到100％。LCR复核标本200份,与之相比,PCR检测的敏感性为83．9％－98．6％,特异性66．7％－94．7％,YI指数0．523－0．881。其中PCR2结果符合性最好,其它依次为PCR4、PCR1、PCR5、PCR3及PCR6。综合分析证明国产PCR检测沙眼衣原体的敏感性增在85％以上,特异性均在95％以上。YI指数由高到低分别为PCR2、PCR1、PCR3、PCR5、PCR4、PCR6。结论 国产PCR检测尿道／宫颈拭子沙眼衣原体具有较高的敏感性与特异性,可以用于临床检验,实验室质控与监督是本方法得以正确应用的关键。     

PCR检测石蜡包埋尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒

应用ＰＣＲ从１００％（４０／４０）石蜡包埋尖锐湿疣组织中检测出ＨＰＶＤＮＡ。扩增ＨＰＶＤＮＡ显著地提高了检测速度及敏感性，以致从数张５～１０μｍ厚的石蜡切片中３～４ｈ即能得到结果；且ＰＣＲ扩增产物具有高度的特异性。因此，ＰＣＲ不失为检测ＨＰＶ简便、快速、敏感、特异的方法。     

聚合酶链反应检测生殖器疣与癌中人乳头瘤病毒

一种新建立的总引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）可用以检测多种人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）基因型别。结果： ＨＰＶ ＤＮＡ片段检出率：生殖器疣９８％（９８／１００）、阴茎表皮肉瘤Ⅲ级８０％（１０／１２）、宫颈上皮内启 ８０％（１２／１５）、阴茎鳞癌８０％（１６／２０）及宫颈鳞癌９０％（２７／３０）；其中，９５％（９３／９８）的生殖器疣中检出ⅢＨＰＶ６、１１，而生殖器癌中ＨＰＶ１６伴同率为８８％（３８／４３）。上述结果提示； ＰＣＲ技术系检测病因疑为ＨＰＶ的非典型增生及癌中ＨＰＶ病原的有效方法，ＨＰＶ６、１１和ＨＰＶ１６分别为本地区生殖器ＨＰＶ感染良、恶性病变中之流行型别。     

PCR法诊断性联隐性鱼鳞病的基因缺失及基因携带者

性联隐性鱼鳞病的发病理是X染色体短臂末端的类固醉硫酸脂酶(STS)墓因缺失.此病携带者的STS基因量是正常人的一半.用PCR法检测了19例性联隐性鱼鳞病和11例常显鱼麟病患者.发现16例性联隐性鱼麟病(占84%)有STS基因缺失.与Southaru杂交结果一致.在此基础上.应用Southern杂交及基因的剂量分析检测了4个性联隐性鱼鳞病患者的家系.发现2例患者母亲为基因携带者.为鱼鳞病的产前诊断莫定了基础.