细胞膜表面蛋白系统与肺癌多药耐药基因研究进展

本文综述了多药耐药（MDR1）、基因、多药耐药相关蛋白（MRP）基因和肺耐药蛋白（LRP）基因在肺癌中的变化。在不同类型肺癌中这三种基因均可表达，但水平不同。MDR1在耐药中的作用尚有质疑，而MRP，LRP与非小细胞肺癌（NSCLC）的耐药明显相关，且LRP是一种更好的耐药预警指标。     

22株肠球菌耐药性及8种耐药基因研究

我们收集了2003年12月至2004年5月分离自解放军98医院(湖州)的22株肠球菌，对其进行了耐药性和8内酰胺类耐药相关基因(TEM)、氨基糖苷类耐药相关基因[aac(6′／aph(2″)，aph(3′)Ⅲ，ant(6Ⅰ)]、四环素耐药相关基因(terM)、红霉素耐药相关基因(ermB)、万古霉素耐药相关基因(vanA、vanB)检测。     

金黄色葡萄球菌抗菌药物耐药分子机制的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起人类感染的重要病原菌之一，也是临床常见的多重耐药细菌之一。金黄色葡萄球菌具有多种固有耐药基因，同时亦易获得外来耐药基因。本文就导致金黄色葡萄球菌对临床常用抗菌药物产生抗性的耐药基因及其耐药机制的研究进展进行综述。     

两例产NDM肺炎克雷伯菌耐药基因分析及治疗方案

目的 对某三甲医院临床分离的肺炎克雷伯菌进行耐药基因及表型分析，为临床治疗和预防耐药菌感染提供参考。方法 对某三甲医院临床分离的两株产NDM型金属β-内酰胺酶(new delhi metallo-beta-lactamase, NDM)进行全基因组检测。结果 两分离菌株含有多种质粒，在质粒上有NDM的耐药基因位点。结论 产NDM耐药菌的基因主要在质粒上，应加强抗生素的合理使用和感染控制措施，以减缓耐药基因的播散，预防耐药菌的产生。     

肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测

目的 研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测：E-test、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性。PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mef/A，四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn。结果185株肺炎链球菌的药敏结果显示，对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异嗯唑的耐药率较高，分别为78．9％、76．2％、86．0％和78．7％，对阿莫西林，克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低，分别为2．2％、15．5％、2．8％和14．1％。所有红霉素耐药株均检出ermB和／或mefA，其中79．5％为ermB阳性，17．8％为ermB和mefA同时阳性，2．7％为mefA阳性。tetM基因在分离株中的阳性率是87％，四环素耐药组的tetM基因携带率是96．9％，高于敏感组（26．9％）。四环素耐药株的红霉素耐药率（90．0％）亦高于敏感株组（11．5％）。87．6％的肺炎链球菌存在intTn基因，intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异嗯唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高。分离株最常见的基因组合是intTn＋terM＋ermB，占58．4％。结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23S rRNA甲基化酶致靶位改变。tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用，是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制。接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切，可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一。     

阴沟肠杆菌喹诺酮类耐药qnr基因的发现

细菌对喹诺酮类药物的耐药机制主要是药物作用靶位的变异、细菌细胞膜通透性改变和／或主动外排系统过度表达导致药物在细菌体内浓度降低，这两种耐药机制由染色体介导引起，不具有水平传播性。最近Martine-Martinez L等发现了一个可编码喹诺酮耐药的多重耐药基因咿，qnr,qnr基因是由可接合质粒介导的喹诺酮类耐药基因，作用机制是其编码的蛋白质对喹诺酮类药物靶位点的保护，从而导致药物治疗失败。本文对2003年9月—2005年6月解放军98医院分离的44株阴沟肠杆菌中qnr基因进行筛查。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因型及耐药谱研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus ，MRSA）常引起医院感染的暴发流行。MRSA由于获得了外源性甲氧西林耐药决定子A（methicillin resistance determinant A，mecA），该基因编码青霉素结合蛋白2a，造成对所有β内酰胺类药物耐药。mec基因存在于葡萄球菌盒式染色体（Staphylococcal cassene chromosome mec，SCCmec）中，SCCmec是一种新型的可移动元件，不同于噬菌体和转座子，而且该元件还携带除mecA基因外的其他抗生素耐药基因，造成多重耐药。     

表遗传修饰对多药耐药基因1调控的研究进展

多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1，MDR1)的耐药机制与药物的泵出有关。过去的十年里，在有关耐药基因的调控方面已经做了大量的研究。MDR1基因表达受许多因素的影响。最近研究证实，表遗传修饰在调控MDR1基因表达中起重要作用。表遗传通过对DNA的甲基化和组蛋白脱乙酰化的修饰来调节MDR1基因的表达。应用化学物质可以逆转MDR1基因依赖性多药耐药，提高化疗敏感性，这将为癌症治疗提供新策略。     

脑膜炎奈瑟氏菌对青霉素耐药性监测及其机理的初步研究

对１９６６年～１９９３年２１个省分离的２１８株Ａ、Ｂ和Ｃ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）检查对青霉素的耐药情况及其机理，耐药菌株和敏感菌株的ｐｅｎＡ基因扩增后经ＨｐａⅡ消化并比较了它们的酶切图谱。１０８株Ａ群Ｎｍ中有２株耐药，它们是１９８７年和１９８８年分离的；１０１株Ｂ群Ｎｍ中有６株耐药，１９８３年以前仅１株，其余５株是以后的，耐药菌株从３．８％上升到６．７％；９株Ｃ群Ｎｍ中分离出１株耐药菌株，为７０年代分离的。上述耐药菌株中，１株Ａ群和５株Ｂ群为病人菌株，其余皆为携带者菌株。耐药的Ａ群和Ｃ群Ｎｍ与其敏感菌株ｐｅｎＡ基因的ＨｐａⅡ酶切图谱相同，但耐药的Ｂ群Ｎｍ的ｐｅｎＡ基因酶切图谱显出５种谱型，它们与敏感菌株的图谱明显不同。实验结果初步表明我国所分离的少数Ｎｍ对青霉素耐药，Ｂ群Ｎｍ较Ａ群耐药明显些，前者对青霉素耐药可能是ｐｅｎＡ基因的改变所致，关于Ａ群和Ｃ群Ｎｍ对青霉素的耐药机理尚需进一步探讨。     

宏基因组测序在微生物耐药研究中的应用进展

伴随广谱抗生素的过度使用，临床上多重耐药病原菌和超级细菌不断出现，为临床抗感染治疗带来了严峻挑战，传统微生物培养后药敏实验以及针对于特定耐药基因的基因扩增等方法已经无法满足现有需要，因而迫切需要新的研究方法的出现。宏基因组测序技术以其无偏差、高覆盖为微生物耐药研究提供了又一有利工具，本文对宏基因组测序在肠道、皮肤、组织和重症下呼吸道感染中微生物耐药研究的最新应用做一综述，以期为临床微生物耐药研究提供帮助。     

革兰阴性菌qnrA基因介导的喹诺酮耐药分子机制研究

目的了解革兰阴性菌质粒介导qmA耐药基因的发生率、分子遗传学背景及其阳性株的耐药谱。方法收集2004年4月-2006年4月对萘啶酸耐药的临床分离无重复株共629株，采用特异引物PCR结合测序进行qnrA阳性株的识别，表型确认试验结合PCR检测识别产ESBL或AmpC酶的qnrA阳性株，Kirby-Bauer法和Etest法进行qnrA阳性株的药敏检测，质粒接合转移及Southem杂交检测进行qmA基因的质粒定位，PCR策略克隆携带qnrA基因整合子基因结构并进行引物步移测序。结果qnrA阳性株的总检出率为1.9％（12／629）。菌种分布为肺炎克雷伯菌2．2％（3／138），阴沟肠杆菌17．1％（6／35），产气肠杆菌9．1％（1／11），枸橼酸杆菌属12．5％（1／8），沙门菌属14．3％（1／7）。qnrA基因定位在80～180kb大小质粒上的su／1型Ⅰ类整合子基因结构中。其中4株菌qnrA基因定位在整合子In37上，另外8株菌qnrA基因定位在一种新型的整合子InX上。所有qnrA阳性株均产ESBL，并具有可转移多重耐药的特征。结论广东地区喹诺酮抗菌药耐药株中存在着质粒介导的耐药机制，但发生率较低；其耐药基因qnrA的水平传播能力有可能导致细菌耐药性的播散。     

脆弱拟杆菌耐药谱分析及耐药基因的检测

脆弱拟杆菌耐药谱分析及耐药基因的检测王海意吴洪范单志英脆弱拟杆菌是厌氧菌感染中最常见的机会致病菌，对多种抗生素耐药。国外报道对克林霉素的耐药性是由质粒或染色体介导的，为了解国内临床分离的脆弱拟杆菌对抗生素的敏感性，对克林霉素的耐药基因进行了分析。采用...     

苯妥英钠耐药鼠神经元保护基因的表达

目的：探索神经元自身保护基因在苯妥英钠耐药鼠和非耐药鼠中的差异表达。方法：选择成年Wistar大鼠用电刺激杏仁核方法建立耐PHT和非耐药癫痢大鼠模型，应用含有4096条人类全长基因的cDNA表达谱芯片，检测耐药与非耐药组神经元保护基因表达谱的差异。结果：发现10条神经元自身保护基因的表达在两组间存在差异。结论：神经元自我保护机制的降低可能是难治性癫痫形成的原因之一。     

幽门螺杆菌耐甲硝唑基因分型与序列分析

目的 探讨幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp)rdxA基因型及其与甲硝唑耐药性的关系及耐药的分子机制。方法 对54例包括胃炎、消化性溃疡、胃癌患者的Hp分离株进行甲硝唑敏感实验，得到敏感株和耐药株；提取Hp基因组DNA，PCR扩增rdxA基因，并进行限制性片段长度多态性（RFLP）分型；统计学分析基因型和耐药性关系；对1株敏感株和2株耐药株rdxA基因测序分析突变情况。结果 rdxA基因可分为两型：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型中的敏感株和耐药株所占比例为56%和44%，Ⅱ型中的敏感株占16％，耐药株占84％。经统计学分析，rdxA基因Ⅱ型与耐药性有相关性。rdxA基因测序分析显示耐药株存在编码区碱基置换及插入造成的移码突变；非编码区亦存在单个碱基缺失及置换突变。结论 rdxA基因Ⅱ型与Hp的甲硝唑耐药性密切相关，耐甲硝唑株主要表现为Ⅱ型。rdxA基因突变是耐甲硝唑的主要原因。     

杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL的构建及其功能鉴定

目的：构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。 方法： 制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA，PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因，构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rpsL，重组穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株及其鉴定。 结果： 成功地构建了重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL；重组大肠杆菌－结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株获得成功，并且重组质粒PMV261/rpsL电转化后的结核杆菌H37Rv株对链霉素耐药。 结论： 该临床分离株多耐药结核分支杆菌对链霉素耐药的机制仅仅是由于rpsL基因的93 bp、94 bp处碱基突变所致，耐药性是一个基因突变的结果，是单基因型。     

我国HIV-1感染者耐药突变的流行性研究

目的 掌握我国大规模用药前耐药突变在我国HIV-1感染者中流行情况的本底资料。方法 在第二次全国HIV流行病调查2002年样本中随机选取20％，对于蛋白酶(PR)基因区全长和逆转录酶(RT)20～230氨基酸位点进行PCR扩增、测序并使用HIVdb-Drug Resistance Algorithm软件进行分析，检测耐药相关突变。结果 分别得到164份PR基因区样本和138份RT基因区样本。PR基因区样本中发现1份(0．61％)样本存在蛋白酶抑制剂(PI)主要相关突变，163份(99．39％)样本存在P1次要耐药相关突变。RT基因区样本中发现8份(5．80％)具有核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变，2份(1．45％)存在非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关突变。结论 我国未用药HIV感染者中耐药相关突变尚处于低流行状态，应当在用药过程中定期监控以减少耐药突变的产生与传播。     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与AmpC耐药基因的研究

目的了解我院临床分离的60株多重耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant Acinetobater baumannii,MDRAB）的耐药性和AmpC耐药基因的存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果,对该细菌进行总DNA的提取,用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因,结合药物敏感试验分析菌株的耐药特征。结果检出结构基因ampC型49株,占81.7%;blaADC基因型50株,占83%;ACT基因型2株;41株菌同时携带blaADC和ampC结构基因,占68%;2株同时携带blaADC、ACT和ampC结构基因;未检测到其它AmpC耐药基因（MOX、CIT、FOX、DHA）。携带AmpC耐药基因的菌株耐药率高,特别是对头孢曲松、氨苄西林、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因的耐药率已接近或达到100%,而对于丁胺卡那霉素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为5%和20%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌的blaADC耐药基因和ampC结构基因同时携带率高,并且是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

红霉素耐药肠球菌ermB基因与转座子Tn1545和Tn917的关系

目的研究158株儿童临床标本中分离的肠球菌对红霉素耐药性及其转座子Tn1545和Tn917介导的耐大环内酯类抗生素eFmB基因的特点。方法采用琼脂稀释法对红霉素进行最小抑菌浓度（MIC）测定，用PCR检测肠球菌ermB、，蝴基因、Tn1545和Tn917。结果158株红霉素MICC50和MIC90都为256μg／ml，红霉素耐药率为94．9％（150株／158株）。在150株红霉素耐药株中，ermB基因的总携带率为70．7％，其中粪肠球菌、屎肠球菌、坚韧肠球菌、鸟肠球菌和海氏肠球菌其ermB基因的携带率分别为：78．3％、58．1％、100％、100％、100％，粪肠球菌eFmB基因的携带率高于屎肠球菌（f=6．884，P=0．009）；粪肠球菌未检测到，啪基因，只有1株屎肠球菌检测到，卿基因。106株ermB基因阳性红霉素耐药株中，46．2％的菌株eFmB基因同时存在于转座子吼1545和Tn917：ermB基因单纯存在于转座子Tn1545的43株，占40．6％；ermB基因单纯存在于转座子Tn917的1株，占0．9％。结论儿童临床标本中分离出的肠球菌耐大环内酯类抗生素的主要耐药基因为ermB基因．并且ermB基因主要是通过转座子Tn1545来携带其对大环内酯类抗生素的耐药。     

住院患者肠道宏基因组中β-内酰胺酶基因分布的调查

目的通过检测住院患者肠道宏基因组中β-内酰胺酶耐药基因分布情况,分析耐药基因的发生与演化机制。方法提取50例住院患者大便的宏基因组DNA,应用多重PCR及核酸电泳的方法进行检测,统计β-内酰胺酶耐药基因的分布情况。结果 50例患者中共有26例存在β-内酰胺酶耐药基因,包括TEM、SHV、OXA-1、CTX-M-G1、CTX-M-G2、CTX-M-G9、CTX-M-G8/25、LAT/CMY基因等,而VEB、PER、GES、OXA-48、IMP、VIM和KPC基因均未检测到。另外,某些患者的宏基因组DNA样品中还检测到多个耐药基因共同存在。结论住院患者肠道宏基因组中存在多种β-内酰胺酶耐药基因,这些基因可能是临床分离菌株中耐药基因的来源之一。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对消毒剂和常用抗菌药物的耐药性及相关基因的研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus ，MRSA）已成为医院感染的重要病原菌，流行、暴发常有报道，同时社区获得性感染亦逐年增多。金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药是由于获得了携带mec基因的葡萄球菌盒式染色体（staphylococcal cassette chromosome mec，SCCmec），并通过SCCmec不断积累抗生素耐药基因。近年来国内外学者已从金黄色葡萄球菌中检出耐消毒剂基因的菌株。因此，控制MRSA特别是对常用消毒剂如季铵盐类等消毒剂耐药菌株的传播具有实际意义。