体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子—β2

目的：了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子－β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)，以确定TGF-β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法：一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA，利用RT－PCR检测TGF－β2的m RNA, 用双链测序鉴定PCR产物，并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF－β2蛋白的表达。结果：RT－PCR扩增得到的单一产物，其序列与已知序列完全一致。TGF－β2免疫组化染色呈阳性。结论：小梁细胞自身产生的TGF－β2，是小梁网局部微环境和房水中TGF－β2的来源之一，TGF－β2不仅通过旁分泌式，也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF－β2的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关，值得进一步研究。     

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β2表达的抑制作用

目的　观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法　体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果　 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论　曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β的影响

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1mg/mLVerapamil对BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA。结果　 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/mLVerapamil可质量浓度依赖性抑制BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA(P <0 0 5 ) ,且 0 0 1mg/mLVerapamil可完全抑制TGF β1的蛋白合成 ,同样质量浓度的Verapamil对TGF β1的抑制程度要大于TGF β2 (P <0 0 5 )。结论　Verapamil抑制BTMC合成ECM的机制可能为抑制TGF β表达 ,这种抑制是在转录水平上 ,且对TGF β1的抑制可能在其中起主要作用。此外 ,TGF β可通过自分泌方式作用BTMC ,促进ECM的合成 ,进一步为Verapamil在发病学环节上防治原发性开角型青光眼提供实验依据。     

CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响

目的观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼发病过程中可能的作用。方法采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞。MTT法观察CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生的影响。流式细胞仪检测CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞凋亡的影响。结果3种浓度的CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞的增生起抑制作用且呈浓度依赖性,浓度越高抑制作用越强,但对小梁细胞的凋亡起促进作用,浓度越高促凋亡作用越明显。结论CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞增生作用受到抑制,小梁细胞的凋亡增加。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞的增生与凋亡过程参与了原发性开角型青光眼发病过程。     

转化生长因子β2诱导人小梁细胞凋亡的体外研究

目的　观察转化生长因子 β2 (transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 )是否能诱导体外培养人眼小梁细胞 (humantrabecularmeshworkcells,HTMC)发生凋亡。方法　将体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞分为对照组和实验组 ,实验各组分别经 0 .32、1.0 0、3.2μg·L-1TGF β2 作用 4 8h后 ,分别用透射电镜、TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡的诱导情况。结果　透射电镜观察发现凋亡细胞典型的形态学变化———核染色质凝集边集 ,凋亡小体形成等。TUNEL法检出发生DNA片段化的HTMC。经流式细胞术定量分析 ,不同浓度TGF β2 处理的HTMC凋亡细胞百分数分别为 ( 2 .79± 0 .4 4 ) %、( 4 .4 3±1.17) %、( 9.6 0± 2 .0 5 ) % ,其中 1、3.2 μg·L-1TGF β2 处理组与对照组 ( 1.4 1± 0 .34) %相比分别有显著差异和极显著差异。结论　TGF β2 能诱导体外培养HTMC发生凋亡 ,推测其可能参与了原发性开角型青光眼患者和正常人衰老过程中HTMC数目的减少。     

Tranilast对TGF-β2抑制人眼小梁细胞生长作用的影响

目的 :观察tranilast对转化生长因子 β2 (transform inggrowthfactor β2 ,TGF β2 )抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。方法 :采用MTT法观察 0 μg/ml、12 .5 μg/ml、2 5μg/ml和 5 0 μg/mltranilast对 3.2ng/mlTGF β2 抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。结果 :2 5 μg/ml和 5 0 μg/ml收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -2 7;修回日期 :2 0 0 2 -0 4-15基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (3 8970 75 8)。作者简介 :曹阳 (1972 -) ,男 ,湖北武汉人 ,医学博士 ,主治医师 ,研究方向 :青光眼。通信作者 :曹阳 (E -mail:ytsao @sohu .com)。tranilast处理组人眼小梁细胞的光密度A值分别为 (1.136±0 .135 )和 (1.2 4 6± 0 .15 2 ) ,与对照组的 (0 .896± 0 .190 )比较 ,差异分别有显著性 (q =3.2 3,P <0 .0 5 )和非常显著性 (q =4 .70 ,P <0 .0 1)。结论 :Tranilast可明显拮抗TGF β2 对体外培养人眼小梁细胞抑制生长的作用。利用Tranilast在发病学环节防治原发性开角型青光眼的可能性 ,值得进一步研究     

人眼小梁细胞体外培养及传代实验

目的探索体外培养人眼小梁细胞的方法,为进一步研究原发性开角型青光眼的发病机理提供实验的依据。方法用器官培养及组织块培养两种方法,进行人眼小梁细胞的原代培养和传代实验,并同时对照培养人眼巩膜成纤维细胞,对二者从形态学上进行比较。结果（１）器官培养较单纯组织块培养更易获得原代小梁细胞;（２）传３～５代人眼小梁细胞处于最稳定阶段,可利用此阶段细胞进行多种体外实验。结论体外培养人眼小梁细胞可获得生长形态及特征稳定的小梁细胞。     

microRNA-155在原发性开角型青光眼发病机制中的作用

microRNA在眼部组织有特定表达,对眼部组织发挥独特作用。microRNA-155可调控多种信号通路,影响相应蛋白的表达,导致细胞、组织的形态和功能等异常。原发性开角型青光眼的产生机制尚不完全明确,现认为小梁网的形态功能异常是引起眼内压升高的主要原因。研究microRNA-155对原发性开角型青光眼发生发展的影响,可以为原发性开角型青光眼的发病机制和诊治提供新的思路。     

体外培养人眼小梁细胞吞噬乳胶微粒的研究

原发性开角型青光眼及某些继发性开角型青光眼的病理改变与覆盖在小梁柱表面的小梁细胞功能改变有关［１］；小梁细胞具有增殖、移行、吞噬及合成分泌细胞外基质、激素或酶的功能。其中小梁细胞的吞噬功能在清除异物、保持房水滤道通畅方面具有重要作用［２，３］。我们采用体外培养的人眼小梁细胞，观察其吞噬乳胶微粒的过程。一、资料和方法１小梁细胞原代和传代培养：取各种原因死亡８ｈ的新生儿眼球，按王林等［４］报道的方法进行组织块培养。无菌显微镜下操作，取出小梁组织，剪成１ｍｍ×２ｍｍ组织块，置入培养瓶内，待贴壁后加入…     

转化生长因子-β与原发性开角型青光眼

转化生长因子 β(TGF β)在人类几乎所有的细胞中均可发现 ,通过与受体结合 ,在细胞增殖、免疫、细胞外基质合成中 ,发挥着重要的生物学效应。本文就TGF β在原发性开角型青光眼的发病机制、滤过性手术术后瘢痕形成中所起作用的进展进行综述     

小梁细胞的培养与原发性开角型青光眼的病因研究

原发性开角型青光眼（ＰＯＡＧ）是青光眼主要致盲性眼病之一，其发病机制尚不清楚。近年来许多研究已表明，ＰＯＡＧ眼压升高是由于房水排出道的病变，使房水排出阻力增加所致。阻力的部位主要在小梁网，特别是近管组织。阻力的形成与衬覆在小梁柱表面的小梁细胞形态与功能有关。由于直接研究体内小梁细胞非常困难，国外许多学者用小梁细胞体外培养的方法，研究小梁细胞的形态结构与功能活动，发现ＰＯＡＧ的发生与小梁细胞的异常密切相关，小梁细胞体外培养是探索ＰＯＡＧ病因和发病机制的有效途径。     

反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的：观察反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma, POAG)发病过程中可能的作用。 方法：采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞,免疫组织化学染色观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白的影响,放射免疫法观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成透明质酸的影响。 结果：CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白起促进作用,且呈浓度依赖性,浓度越高促分泌作用越强,但对小梁细胞合成透明质酸起抑制作用,浓度越高抑制作用越明显。 结论：CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白增加而合成透明质酸减少。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞合成细胞外基质功能参与了POAG发病过程。     

国人蒙古族原发性闭角型青光眼发病机制的研究

目的 探讨国人蒙古族原发性闭角型青光眼的发病机制,为治疗蒙古族原发性闭角型青光眼提供临床依据.方法 采用病例对照研究方法.研究分为蒙古族正常人组,蒙古族青光眼组,汉族正常人组,汉族青光眼组.应用亚硝酸还原酶法测房水及血清一氧化氮浓度;应用流式细胞仪测定小梁细胞的凋亡率;利用透射电镜观察小梁组织的超微结构;利用UBM观察测量眼前段生物学指标;并对四组数据进行统计学处理.结果 四组房水及血清一氧化氮浓度性差异无统计学意义.蒙古族和汉族眼小梁细胞凋亡率比较,有种族差异,小梁网的超微结构亦有差异.蒙古族与汉族比较正常人眼前段结构有角膜小、前房浅、晶状体厚且相对位置偏前,统计学处理有显著差异.结论 蒙古族闭角型青光眼的高发病率与蒙古族人眼前段的结构异常、小梁细胞凋亡率高、小梁网的超微结构异常等因素有关,其中眼前段的结构异常是发病的高危因素.     

小梁细胞的培养与原发性开角型青光眼的病因研究

原发性开角型青光眼（ＰＯＡＧ）是青光眼主要致盲性眼病之一，其发病机制尚不清楚。近年来许多研究表明，ＰＯＡＧ眼压升高是由于房水排道的病变，使房水排出阻力增加所致，阻力的部位主要在小梁网，特别是近管组织，阻力的形成与衬覆在小梁柱表面的小梁细胞形态与功能有关。由于直接研究体内小梁细胞非常困难，国外许多学用小梁细胞体外培养的方法，研究小梁细胞的形态结构与功能活动，发现ＰＯＡＧ的发生与小梁细胞的异常密度相     

肿瘤坏死因子-α对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3,MMP9和TIMP-2表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3,MMP9和TIMP-2表达的影响,探讨原发性开角型青光眼的发病机制。方法:对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法(NSE,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,化学及电子透射电镜对细胞进行形态学及生长特性的观察;对传3代的小梁细胞分别施加含TNF-α终浓度为0,12.5,25,50μg/L的培养液,48h后行MMP3和MMP9免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。分组提取细胞培养液用ELASA检测TIMP-2量的变化。结果:体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3及MMP9,TNF-α可增加MMP3及MMP9的表达,并且抑制TIMP-2的表达。结论:TNF-α在一定范围内可以增加MMP3及MMP9的表达(P<0.05),并抑制TIMP-2的表达(P<0.01),故TNF-α可以减少小梁细胞细胞外基质的堆积,使房水引流通畅,对激光小梁成形术的手术原理有一定的说明意义。     

兔转化生长因子-β2基因的克隆及其表达的检测

目的　克隆兔转化生长因子 β2 (TGF β2 )基因 ,并获得其在兔重要脏器及角膜中的表达。方法　利用不同物种的相似序列设计相关引物 ,制备兔肝组织的RNA并逆转录 ,RT PCR技术获得TGF β2 基因蛋白编码区序列后克隆 ,RT PCR半定量及荧光定量PCR检测TGF β2 在兔重要脏器及角膜中的表达。结果　成功地克隆了兔TGF β2 的蛋白编码区序列 ,测序证实和人、大鼠及小鼠具有高度的同源性 ,含有TGF β2 的保守结构域 ,TGF β2 基因在兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺和角膜组织中均有不同程度表达。结论　利用同源序列克隆进化上保守的基因是简捷快速的方法。获得兔TGF β2 的基因有助于进一步研究其在机体重要脏器纤维化、肿瘤以及角膜疾病中的作用     

透明质酸与原发性开角型青光眼

随着对原发性开角型青光眼研究的深入和进展,许多研究结果表明人眼中透明质酸的含量失衡,可使房水滤过阻力增加,眼压升高;CD44分子与透明质酸之间相互作用的失调,可引起小梁网细胞丢失、死亡,影响小梁网细胞内环境的稳定,并且与视网膜神经节细胞的数量减少、活性下降以及视野缺损存在一定关联.透明质酸还可能通过影响基质金属蛋白酶的分泌,参与原发性开角型青光眼的发病.