L02细胞在2-乙酰氨基芴处理大鼠肝中的增殖

目的:应用2-乙酰氨基芴(2-acetaminofluorene, 2-AAF),研究L02细胞移植到具有正常免疫性的大鼠肝内的存活与增殖情况．方法:SD大鼠出生前宫内ip正常人L02肝细胞,诱导胎鼠对L02肝细胞产生免疫耐受,出生2 wk时分别ip小(1．2 mg／kg)、中(13 mg／kg)、大剂量(30 mg／kg)2-乙酰氨基芴或生理盐水,隔日行2／3肝切除术,同时经脾移植DiI染色后的人L02肝细胞,建立2-AAF／PH肝细胞增殖模型．采用免疫荧光、RT-PCR、免疫组化、DiI荧光示踪等方法,在不同时相分别检测人白蛋白、人白蛋白mRNA、增殖细胞核抗原(PCNA)以及在荧光显微镜下观察人L02肝细胞在鼠肝内的分布,并采用计算机图像分析系统分析不同时相PCNA阳性细胞的数密度和面积密度．结果:2-乙酰氨基芴实验组(小、中、大剂量)的各项检测,均与对照组无明显区别;于移植后1,2,4,6,8,10 wk在荧光显微镜下观察到人L02肝细胞在鼠肝内的动态分布;移植后2, 4,6,8 wk大鼠均检测出人白蛋白及人白蛋白mRNA;移植后2,4,6 wk检测出特异性人增殖细胞核抗原PCNA,移植后1,2,4,6,8 wk检测出非特异性PCNA．结论:2-AAF／PH模型中,2-乙酰氨基芴对移植L02细胞无明显增殖作用;L02细胞在2-乙酰氨基芴处理人鼠嵌合肝动物模型中存活10 wk,产生白蛋白功能持续8 wk．     

大肠癌C-erbB-2蛋白产物的表达

大肠癌Ｃ＿ｅｒｂＢ＿２蛋白产物的表达黄文谢宗贵王要军孙自勤济南军区总医院消化科山东省济南市２５００３１主题词癌基因结直肠肿瘤免疫组织化学Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｏｎｃｏｇｅｎｅｓｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｎｅｏｐｌａｓｍｓｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃ...     

DOC2和rasp21在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究DOC2和rasp21在大肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 选取未经过术前放化疗的大肠癌标本121例及癌旁正常黏膜组织44例,通过免疫组织化学SP法检测两组DOC2和rasp21蛋白的表达情况,分析两者的表达与大肠癌临床病理特征的关系及两者间的相互联系.结果 大肠癌组织DOC2蛋白阳性表达率低于癌旁正常黏膜组织,rasp21蛋白阳性表达率高于癌旁正常黏膜组织(P<0.01).DOC2蛋白的表达与大肠癌淋巴结及肝转移相关(P<0.05),rasp21蛋白的表达与大肠癌分化程度、淋巴结及肝转移相关(P<0.05).大肠癌组织中DOC2与rasp21蛋白的表达呈负相关(r=-0.410,P<0.01).结论 DOC2和rasp21的表达失调可能在大肠癌的发生发展过程中发挥重要作用.     

Ras p21,GST-pi在大肠腺瘤癌变中的表达

ras p21是ras癌基因共同编码的Mr21000蛋白质.ras癌基因激活致p21过量表达[1].胎盘型谷胱甘肽S转移酶(GST-pi)是一种重要的肿瘤标志酶.较多的研究表明,GST-pi在人体肝肿瘤、胃癌、子宫内膜癌组织中含量显著升高[2-4].我们检测大肠腺瘤及其在癌变中ras p21,GST-pi表达状况,观察其分布和量的变化,探讨大肠腺瘤在癌变中两种标记物复合表达的内在联系及其意义.     

肝癌中Bcl-2、Bax和C-myc基因的表达及其临床意义

目的 探讨Bcl-2、Bax和C-myc基因表达在肝细胞癌(HCC)中的临床意义.方法 采用免疫组化技术检测不同HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的Bcl-2、Bax和C-myc蛋白表达.结果 Bcl-2、Bax和C-myc在HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中均有部分阳性表达;Bcl-2和C-myc蛋白在HCC组织中呈高表达,其个体阳性率明显高于正常肝组织(P＜0.05);Bax蛋白在HCC组织中呈低表达,其个体阳性率明显低于正常肝组织(P＜0.05);Bcl-2基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小、UICC分期和转移均无关;Bax基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和转移无关(P＞0.05),而与HCC的UICC分期有关(P＜0.05);C-myc基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和UICC分期无关(P＞0.05),而与HCC的转移有关(P＜0.05).结论 Bcl-2、Bax和C-myc基因相互协调作用,促进HCC的发生和发展.     

原发性肝细胞癌中P21WAF-1、p53与nm23的表达及意义

目的 探讨p21WAF-1、p53与nm23蛋白在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及意义。方法 应用免疫组化S-P法检测72例HCC和85例非癌肝组织中p21WAF-1、p53与nm23蛋白的表达，并分析它们之间的关系及其与HCC临床、病理特征的关系。结果 HCC组织中的p21WAF-1、p53与nm23蛋白表达率均与非癌组织有显著性差异（P〈0．01）。p21WAF-1及nm23在Ⅰ、Ⅱ期HCC中表达率与Ⅲ、Ⅳ期有明显差异。p53及nm23表达率在HCC无转移组与转移组有明显差异（P〈0．05，〈0．01）。结论 p21WAF-1、p53高表达，nm23低表达均在HCC的发生发展中起作用；联合检测p21WAF-1、p53与nm23蛋白指标有助于判断HCC患者预后。     

Caspase-9和Survivin在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨Caspase-9和Survivin在肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测92例肝癌患者肝癌组织及其对应癌旁正常肝组织中Caspase-9和Survivin的表达,并分析其表达与HCC临床恶性生物学行为的相关性。组间比较采用卡方检验,相关性分析采用Spearman等级相关法。结果 Caspase-9在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织,而Survivin在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(χ2=6.48、7.05,P0.05)。在TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、门静脉癌栓、淋巴结转移的肝癌组织中Survivin的阳性表达率明显增高(χ2=5.07、6.18、8.29,P0.05),而在其他分组中比较差异无统计学意义;在病理分级Ⅲ~Ⅳ级的肝癌组织中Caspase-9的阳性表达率明显降低(χ2=7.63,P0.05),而在其他分组中比较差异无统计学意义。结论 Caspase-9低表达和Survivin异常高表达均参与肝癌的发生过程,Caspase-9低表达可能与肝癌细胞恶性分化密切相关,而Survivin高表达与肝癌的浸润或远处转移等恶性发展密切相关。     

TAP和HLA-Ⅰ类抗原在人肝细胞癌中的表达

为探明肝细胞痛(HCC)组织中抗原Ⅰ类递呈途径的存在状况,采用免疫组织化学技术对30例HCC和28例癌旁组织中TAP与 HLA-Ⅰ类抗原的表达进行了检测.结果显示,HCC和癌旁组织基本上都有较强的TAP和HLA-Ⅰ类抗原的表达,两者无明显差异(x2＜0.02,P＞0.05),这表明HCC中抗原Ⅰ类递呈途径可能基本正常,胞毒性T细胞(CTL)能够杀伤HCC细胞,这就为针对HCC的CFL表位肽疫苗的设计和构建提供了实验研究基础.     

NDRG1在原发性肝细胞癌及胎肝中的表达及意义

目的:探讨NDRG1在原发性肝细胞癌(HCC)及胎肝组织中的表达及其意义.方法:收集2002-01/2008-12广州市第一人民医院手术切除的肝细胞癌标本81例. 所有患者术前未行放疗和化疗; 25例胎肝组织, 取自不同月份流产或引产的胎儿(4、5、6、7、8 mo胎儿各5例); 另选43例癌旁组织, 10例肝硬化组织, 9例正常肝组织(移植肝), 8例原发癌转移灶组织作为对照. 观察肝脏组织病理形态特征, 并用免疫组织化学EnVison法检测NDRG1的表达.结果:NDRG1在正常肝组织中呈强阳性表达, 平均吸光度值为0.206±0.056, 随着肿瘤的发生, 在癌旁组织中有减弱(0.176±0.083),在HCC中表达明显减弱(0.128±0.096), 在转移灶中表达最低(0.059±0.051), 而在胎肝组织中表达亦较低(0.059±0.074). 各组总体差异均有统计学意义(F = 33.669, P <0.05). HCC与患者年龄、性别、肝炎病史、肝硬化、肿瘤大小、AFP值、HbsAg、淋巴结转移及有无远处转移、肿瘤分型、Child-Pugh分级、TNM分期、CLIP分期均无关(P >0.05), 但与肿瘤的Edmondson分级有关(F = 2.881, P <0.05).结论:NDRG1在HCC中低表达, 并且随着肿瘤的发生发展, 表达量逐渐降低. NDRG1可能对HCC起着抑制作用, 提示该基因可望成为早期预测肝癌转移的分子生物学标志物之一.     

实验性肝细胞癌变过程中嗜碱性小细胞病灶的癌变趋势

目的动态观察肝癌的发生、发展过程，探讨肝细胞癌前期病变的形态特点及其癌变过程。方法145只雄性SD大鼠随机分成模型组和正常对照组，模型组大鼠以质量体积分数为1％的二乙基亚硝胺60mg／kg灌胃，每周1次，第12周后改为40mg／kg至14周后停药；正常对照以等渗盐水灌胃。于实验开始后第2，3，5，8，10，12，14、18周分批处死大鼠，剩余大鼠第26周全部处死。肝组织苏木精-伊红，Masson三色，过碘酸雪夫，谷胱甘肽-S-转移酶免疫组织化学、增殖细胞核抗原免疫组织化学染色，动态观察肝组织病理形态变化，以寻找肝细胞癌前期病变的特点。结果肝癌病理变化可分为3个阶段：肝细胞损伤阶段（2～5周）：主要表现为中央静脉周围肝细胞坏死，坏死塌陷区少量细胞外基质沉积；细胞增生及肝硬化形成阶段（8～12周）：肝细胞呈结节状再生，伴肝细胞异型增生，坏死塌陷区细胞外基质沉积，并逐渐形成肝硬化。肝癌形成阶段（第14周以后）：此期有肝癌形成，18周成癌率为62．5％。从实验第10周开始，嗜碱性细胞灶明显增多，部分胞质内见苍白小体，嗜碱性小细胞改变从第12周出现，增殖细胞核抗原免疫染色呈阳性，部分小细胞改变，细胞质内含脂泡，向周围肝细胞间浸润生长。结论细胞质内含苍白小体和脂肪泡，证明嗜碱性细胞灶和小细胞改变与肝细胞癌有关，其向肝细胞间的浸润生长，进一步证明其可癌变。     

肝癌抗原肽冲击转染p53的树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的专职性抗原呈递细胞，它们能高效摄取、处理抗原，并将多肽呈递给静息型T细胞，引起针对此抗原的特异性免疫反应。我们将全长野生型p53基因（wt—p53）转染小鼠骨髓来源的DC，然后用肝癌抗原肽修饰已转染野生型p53的DC（wt—p53DC），利用这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。     

C-met-siRNA在肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和转移中的作用

目的探讨c—met-siRNA对肝细胞癌生长和侵袭的影响。方法采用脂质体法将pSuppressorRetro／c—met—siRNA导入包装细胞Phoenix A中获得含c-met-siRNA的逆转录病毒颗粒，进一步感染靶细胞MHCC97-H，Western blot检测c—Met的表达，通过生长曲线、运动试验及侵袭试验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。结果肝细胞癌MHCC97-H细胞中c—Met的表达显著降低；细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制。结论c—met—siRNA能抑制肝细胞癌细胞MHCC97-H的生长、运动及侵袭，这对肝细胞癌的生长、转移具有重要的临床意义。     

携带AFP增强子反义c-fms真核表达载体的构建及其临床意义

目的 构建人肝癌细胞中高效特异表达的反义c-fms真核表达载体,观察其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法 采用PCR法扩增人c-fms癌基因第571位酪氨酸为中心的DNA片段,将其反向克隆人pcDNA3载体（命名pAS);将扩增的人甲胎蛋白（AFP）增强子核心区克隆人pAS（命名pAEAS)。磷酸钙法将空载体pcDNA3及反义真核表达载体pAS、pAEAS分别转导入HepG2肝癌细胞及HeLa宫颈癌细胞,观察细胞生长速度及凋亡。结果 人反义c-fms基因片段及AFP增强子核心区片段,测序结果与Genbank中登录的序列一致。导入反义基因的HepG2肝癌细胞生长速度较对照细胞明显减慢（P＜0．05）,pAEAS抑制作用较pAS强（P＜0．05,pcDNA3组、pAS组、pAEAS组HepG2肝癌细胞凋亡率分别为5．25％、14．7％、31．2％（P＜0．01）,pAEAS组细胞DNA出现梯状凋亡带。在HeLa宫颈癌细胞中,pAS及pAEAS组生长速度减慢,但二者差异无显著性（P＞0．05）,pcDNA3组、pAS组、pAEAS组细胞凋亡率分别为3．99％、8．27％、8．86％（P＜0．05）,DNA均未出现梯状凋亡带。结论 携带AFP增强子的人反义c-fms真核表达载体对AFP阳性肝癌细胞生长有选择性抑制作用,可诱导凋亡,是一种新的肝癌基因治疗方法。     

大鼠肝癌发生过程中癌基因和抑癌基因的表达

目的 探讨癌基因ｒａｓ和抑制基因Ｐ５３蛋白在实验性肝癌中的表达与内在联系。方法 应用原位杂交和免疫组织化学（ＳＡＢＣ０法,在３８例化学致癌剂二乙基亚硝胺（ＤＥＮＡ）诱发大鼠原发性肝细胞癌及癌前增殖结节中。Ｐ５３蛋白和ｒａｓ家族基因蛋白表达。结果 化学诱癌生成为６８．４２％,癌前增生性病例为３１．５８％,在癌与增生性病变中ｒａｓ基因收搞表达分别为８８．４６％和７５％,两组无显著差异,但与癌的恶笥分化     

p21和增殖细胞核抗原在肝硬化组织的表达及其与肝细胞不典型增生的关系

目的探讨p21和增殖细胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen,PCNA）的相互关系及它们在肝硬化、肝细胞不典型增生（LCD）、肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法运用S-P法对60例单纯肝硬化、30例癌旁肝硬化及27例HCC的p21、PCNA及HBsAg表达情况进行实验研究。结果癌旁肝硬化、单纯肝硬化、癌组织p21阳性率分别为90%、68.33%、62.96%。癌旁肝硬化与单纯肝硬化及癌组织之间,差别有显著性意义(P＜0.05)。伴LCD改变的肝硬化,p21、PCNA及HBsAg阳性率分别为92.45%、73.59%、64.92%均高于不伴LCD改变的肝硬化组织（P＜0.05）。HBsAg阳性及PCNA表达阳性的肝硬化组织,其p21阳性表达率分别为87.32%、86.21%,均明显高于HBsAg阴性及PCNA阴性的肝硬化组织（P＜0.01）。结论(1)p21的过度表达可能与HCC的起始过程有关,在HCC形成发展的早期阶段发挥重要作用。(2)LCD是一群具有肿瘤性增殖潜能的癌前细胞群,尤其是伴有HBV感染,且有p21及PCNA共同过量表达者,有发生HCC的高度危险。(3)HBV感染及PCNA过量表达与p21表达密切相关。     

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较

目的 比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况,从中寻找特异性标志物.方法 用双向凝胶电泳分离正常人,慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质,结合质谱技术对差异点进行鉴定; Western blot检测结合珠蛋白β链以验证蛋白质水平的表达.计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析和LSD检验进行两两比较.结果 4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析,并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合,成功鉴定出结合珠蛋白,SAA1、SP40等30个差异蛋白质点,K cluster聚类分析不同的变化模式.在差异蛋白质点中,7个蛋白质点均为结合珠蛋白,呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式.Western blot证实结合珠蛋白β链的表达与双向电泳表达相一致.结论 在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式,可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据,与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物.     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在实验性肝癌中的表达

我们应用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌，研究从诱癌开始的肝组织中胎盘型谷光甘肽S-转移酶（GST-P）的动态表达，以更明确GST-P在实验性肝癌中表达的意义。     

膜-细胞骨架联接分子ezrin对肝癌细胞系生长和侵袭能力的影响

目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin在肝细胞肝癌生长和转移过程中的作用。方法分别应用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测ezrin和骨架蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达。选取高转移潜能SF7721（SMMC-7721经转基因后稳定表达肝细胞生长因子，从而获得高转移潜能的细胞系）和MHCC97-H细胞系为研究对象。通过RNA干扰技术下调SF7721和MHCC97-H细胞系中ezrin蛋白的表达，观察其运动和侵袭能力的变化：通过四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖能力变化；电子显微镜观察细胞伪足；Transwell检测细胞的运动侵袭能力。结果免疫荧光显示ezrin和骨架蛋白表达于细胞质，且双色荧光证实两者存在共表达，高转移潜能细胞系SF7721。MHCC—I、MHCC97-Hezrin和骨架蛋白的表达明显高于低转移潜能细胞系SMMC-7721、Hep3B、HepG2细胞（x^2=13．277，P=0．010；x^2=21．815，P〈0．01）。D-肌动蛋白在高低转移潜能细胞系的表达差异无统计学意义。通过RNA干扰技术抑制ezrin蛋白表达后。SF7721和MHHC97-H的细胞的增殖和侵袭能力均显著下降。结论ezrin和骨架蛋白的过表达与肝癌的转移潜能相关，通过下调ezrin的表达可明显抑制肝癌细胞系SMMC-7721和MHCC97-H细胞的增殖和运动侵袭能力。