Egr-1调控元件启动的造血因子基因转移对辐射损伤的骨髓基质细胞的保护作用

目的：观察基因修饰的骨髓基质细胞对辐射的耐受作用。方法：通过辐射对CFU－F形成的影响制作细胞存活曲线分析造血因子双顺反子基因修饰的基质细胞（HFCL／FG和HFCL／EFG）的对辐射的耐受，采用3H－TdR掺入法验证上述结果，观察转染细胞对粒系祖细胞生长的影响，结果：HFCL／FG和HFCL／EFG细胞生存曲线的肩明显增宽，D0值增大，N和Dq值增大，3H－TdR掺入实验也验证了该结果，这种细胞对粒系祖细胞的扩增作用明显增强。结论：造血因子基因修饰的骨髓基质细胞具有抗辐射和支持造血作用。     

川芎嗪对小鼠骨髓基质细胞内皮抑素表达的影响

目的探讨同基因骨髓移植(BMT)小鼠骨髓基质细胞内皮抑素(endostatin,ES)的表达及川芎嗪对其影响。方法取健康BALBc小鼠,随机分为3组正常组(不做处理),骨髓移植对照组(BMT组)和骨髓移植川芎嗪治疗组(川芎嗪组)。BMT组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水02ml只和川芎嗪注射液每次2mg只,2次d。在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠,采用免疫组化、Westernblot方法检测骨髓基质细胞中ES蛋白表达水平,RTPCR检测骨髓基质细胞中ESmRNA表达水平。结果BMT后第7、14、21、28天川芎嗪组和BMT组ESmRNA和蛋白表达水平均显著低于正常组(P<005或P<001),随着时间延长其表达逐渐增高。BMT后第14、21、28天川芎嗪组ES表达水平始终低于BMT组(P<005);但骨髓有核细胞计数高于BMT组(P<005或P<001)。结论川芎嗪能反馈调节BMT小鼠骨髓基质细胞新血管生成抑制因子的表达,促进骨髓微环境的修复,加速移植后骨髓的造血重建。     

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2对小鼠调节性T细胞免疫调节功能的影响

目的 观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(tumor necrosis factor -αinduced protein 8 like -2,TIPE2)在CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25 +Treg细胞)中的表达,并进一步分析其对CD4+ CD25+ Treg细胞免疫抑制活性的影响. 方法 免疫磁珠法分选正常BALB/c小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞.采用RT - PCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测CD4+ CD25+ Treg细胞细胞内TIPE2表达.进一步应用小RNA干扰技术(siRNA)沉默TIPE2表达,流式细胞术观察TIPE2对T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA) -4及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,ELISA法检测CD4+ CD25+ Treg细胞分泌IL - 10和转化生长因子(TGF)-β水平,并通过MTT比色试验观察效应T细胞增殖活性的改变. 结果 RT - PCR分析在CD4+CD25+ Treg细胞中检测到147 bp大小的特异性TIPE2目的基因条带.Western blot检测证实CD4+CD25+ Treg细胞中存在清楚的TIPE2条带,相对分子质量为21 000.siRNA处理CD4+ CD25+ Treg细胞后,经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+ CD25+ Treg细胞培养24h时CTLA -4和Foxp3表达明显下降(P＜0.01),同时IL - 10和TGF -β生成量显著减少(P＜0.01);此外,CD4+ CD25+Treg细胞对CD4+ CD25 -T细胞的抑制功能明显减弱(P＜0.05). 结论 TIPE2作为一种重要的负向调控分子,在CD4+ CD25+ Treg细胞中表达并影响CD4+ CD25+ Treg细胞的免疫抑制功能.