相思子蛋白P2抗肝癌作用及对端粒酶活性影响

目的研究相思子蛋白P2对肝癌细胞生长的抑制作用及机制。方法体外实验:MTT法检测相思子蛋白P2对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。TRAP-SYBR-Green染色法检测相思子蛋白P2作用前后细胞端粒酶活性的改变。体内实验:相思子蛋白P2 50、75、100μg.kg-1连续灌胃给药10 d,观察对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的生长抑制作用。小鼠口服给药急性毒性观察。结果相思子蛋白P2可明显抑制HepG2细胞增殖,IC50值为5.172×10-3 mg.L-1。在5×10-5～1×10-3 mg.L-1剂量作用下,可引起HepG2细胞凋亡。相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,从而抑制了肿瘤细胞增殖。同时可使细胞端粒酶活性明显降低,其下调端粒酶活性的作用随药物浓度的增加而明显增强。相思子蛋白P2对小鼠H22肝癌细胞生长有明显抑制作用,100μg.kg-1抑瘤率达62.47%,且对胸腺和脾脏指数的影响较环磷酰胺小。小鼠口服给药LD50值为6.77 mg.kg-1。结论相思子蛋白P2体内外均可明显抑制肝癌细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与下调细胞端粒酶活性、改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡有关。     

黄芩苷的抗肿瘤作用及对肿瘤细胞端粒酶的影响

目的 探讨黄芩苷的抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞端粒酶的影响.方法 采用四氮唑盐法(MTT法)检测黄芩苷对体外培养的3种人肿瘤细胞增殖的抑制作用,计算抑瘤率;体内试验检测黄芩苷对2种肿瘤的生长抑制作用;采用端粒重复序列扩增-聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定法(TRAP-PCR-ELISA)方法检测Eca-109细胞在黄芩苷作用后端粒酶活性.结果 黄芩苷在20～100μg/ml剂量范围内对3种肿瘤细胞均有剂量依赖性抑制作用(P＜0.01);体内试验结果显示黄芩苷对接种的实体瘤S180、肝癌H22细胞株的抑瘤率分别为29.95～71.5%和35.1%～80.6%;黄芩苷作用后,Eca-109细胞端粒酶活性明显抑制(P＜O.01).结论 黄芩苷对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用,黄芩苷对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用.     

绵毛胡桐内酯对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶的影响

目的:探讨绵毛胡桐内酯(Calanolide)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Calanolide对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测在Calanolide作用后KB细胞端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:Calanolide在10~50mg/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);Calanolide作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随Calanolide浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:Calanolide对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。     

奈韦拉平对HeLa细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的研究奈韦拉平(nevirapine,NVP)对HeLa细胞端粒酶活性和细胞周期的影响.方法采用TRAP-PCR-ELISA方法检测HeLa细胞在奈韦拉平作用后端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变.结果NVP作用后,HeLa细胞端粒酶活性明显抑制(P＜0.05),并且HeLa细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P＜0.01).结论NVP对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用.     

冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控及细胞周期的影响

目的研究冬凌草甲素(ORI)对K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法免疫细胞化学法测定K562细胞中hTERT和C-myc蛋白的表达；TRAP-PCR-ELISA法检测了端粒酶活性变化；流式细胞仪测定细胞周期各时相百分比。结果用3.43 μmol·L^-1 ORI作用于Ｋ562细胞48 h后，hTERT和C-myc蛋白的表达降低；在一定的浓度范围内，ORI可下调K562细胞端粒酶活性。同时细胞周期各时相分布发生变化，G₀/G₁期或G₂/M期细胞增多，S期细胞减少。结论ORI可下调K562细胞的端粒酶活性，其机制可能与其细胞周期阻滞作用及抑制hTERT和C-myc蛋白的表达有关。     

雄黄注射液体内外抗肿瘤作用研究

目的:初步探讨雄黄注射液的体内外抗肿瘤作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法观察雄黄注射液对培养的人白血病细胞株K562,人肝癌细胞株HepG-2,人胃癌细胞株MGC-803,和小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用;建立小鼠S180腹水型肉瘤模型,采用1、2、3mg/kg剂量雄黄注射液作用于小鼠模型,观察雄黄注射液体内抗肿瘤作用。结果:MTT法显示雄黄注射液对人白血病细胞株K562,人肝癌细胞株HepG-2,人胃癌细胞株MGC-803,和小鼠Lewis肺癌细胞增殖有一定的抑制作用;灌胃给予雄黄注射液对小鼠S180腹水型肉瘤生长有一定抑制作用。结论:雄黄注射液能够抑制培养的肿瘤细胞生长,灌胃给药对S180腹水型肉瘤细胞移植的模型小鼠肿瘤增殖有明显的抑制作用。     

干扰素α下调白血病细胞株K 562端粒酶活性

目的：研究基因重组人干扰素α—2b(rhIFNα—2b)对人白血病细胞株K562端粒酶活性及相应增殖能力的影响，以探讨其抗肿瘤机制。方法：以rhIFNα—2b处理K562细胞，用TRAP—ELISA法测定rhIFNα—2b作用前后细胞端粒酶活性，并用血球计数板直接计数法结合台盼蓝染色测定rhIFNα—2b对K562细胞增殖的影响。结果：rhIFNα—2b下调K562细胞端粒酶活性并抑制其增殖。结论：rhIFNα—2b抑制细胞端粒酶活性可能是其抗肿瘤机制     

青蒿素对K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨青蒿素对急性白血病K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的青蒿素作用于体外培养的K562细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果:青蒿素可显著降低K562细胞端粒酶活性,抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.结论:青蒿素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

脐血浆体外对肿瘤细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的：探讨脐血浆对K562、SMC细胞的生长及端粒酶活性的影响。方法：采用MTT法检测脐血浆对K562、SMC细胞生长的影响；采用PCR－ELISA检测脐血浆及AFP对K562、SMC细胞端粒酶活性的影响。结果：脐血浆对K562、SMC细胞有促生长作用，脐血浆及AFP能增中K562、SM细胞的端粒酶活性。结论：脐血浆能促进K562、SMC细胞的生长及增强这两种细胞的端粒酶活性。脐血浆对K562、SMC细胞的促生长作用可能与AFP对端粒酶活性显著增强作用有关。     

硫酸长春新碱控释膜药效学实验研究

目的 :观察硫酸长春新碱 (VCR)控释药膜对动物实验中肿瘤的抑制作用及其急性毒性。方法 :VCR控释膜埋植入荷瘤小鼠体内 ,观察对小鼠艾氏实体瘤的抑制作用以及对血清SOD的影响 ;药膜于体外细胞培养液中进行释放 ,释放液同K562细胞共同培养 ,MTT法观察对K562细胞的抑制率 ,通过透射电子显微镜观察对K562细胞凋亡的影响。与静脉给药方式相比较 ,通过血液指标和病理组织切片观察其急性毒性。结果 :VCR控释药膜在体内、外均显著抑制肿瘤细胞的生长 ,增加SOD活性 ,并可诱导肿瘤细胞的凋亡发生 ,且毒性较静脉给药明显降低。结论 :VCR控释药膜可以有效地抑制肿瘤生长 ,并且毒性较低。     

二甲氧雌二醇对白血病细胞K562增殖、凋亡的作用及其机制

目的：研究二甲氧雌二醇（2-ME）对人白血病细胞l（562细胞的增殖、凋亡的作用及其机制。方法：分别以不同浓度的2-ME处理白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinV和PI双染的流式细胞术检测K562细胞凋亡率,应用凝胶蛋白电泳迁移率分析法EMSA检测K562细胞核内NF．KB蛋白的结合活性变化情况。结果：随着2-ME浓度的升高,各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义（P〈0．01）;K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当2·ME浓度为8μmol·L-1时,细胞凋亡率达64．3％;同时K562细胞核内NF—kappaB的DNA结合活性明显降低。结论：2-ME可显著抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其凋亡;2-ME诱导K562细胞凋亡的机制与NF—kappaB蛋白信号通路有关。     

千金子提取物体外抗肿瘤作用的实验研究

目的：观察千金子提取物的体外抗肿瘤作用。方法：采用噻唑蓝染色法（MTT）,选用人宫颈癌（Hela）细胞和人白血病（K562）细胞株,镜下观察细胞生长状况、密度、形态,检测吸光度（A）,计算抑瘤率。结果：千金子提取物组瘤细胞明显少于溶剂组,尤其以大剂量组更为突出,边缘见有少许细胞与结晶体,并可见许多细胞残片,与溶剂组比较,组间具有显著性的差异（P〈0．05）;且抑瘤率与给药剂量呈正相关。结论：千金子提取物对肿瘤细胞Hela、K562在体外有显著的抗肿瘤作用。     

复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞体外生长抑制作用的观察

目的研究复方木鸡冲剂在体外对不同组织来源肿瘤细胞的生长抑制作用。方法应用MTT法观察复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞的生长抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态的变化，流式细胞术分析细胞凋亡。结果复方木鸡冲剂对不同组织来源的多种肿瘤细胞有明显的生长抑制作用，并能使HL-60和HepG2细胞的凋亡率增加。结论复方木鸡冲剂在体外对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用，初步认为是通过诱导细胞凋亡实现的。     

长春瑞滨长循环热敏脂质体的抗肿瘤活性实验研究

目的:研究长春瑞滨长循环热敏脂质体(V-LCTL)体内、外抗肿瘤活性。方法:用MTT法检测浓度为1、0.1、0.01、0.001mg·mL-1的V-LCTL和长春瑞滨注射液(V-I)对Lewis肺癌细胞的生长抑制作用,并与生理盐水对照组进行比较;将肿瘤小鼠随机分为V-LCTL组(10mg·kg-1)、V-I组(10mg·kg-1)和对照组(生理盐水),尾静脉给药后,立即对肿瘤局部加温每次30min,3d1次共3次,于第10天测定各组小鼠瘤体积、瘤重,并计算抑瘤率。结果:V-LCTL和V-I在浓度为1mg·mL-1时对体外肺癌细胞的抑制率分别为95.7%、48.7%(P<0.01);体内试验中,与对照组比较,V-LCTL、V-I组小鼠瘤体积和瘤重均减少,抑瘤率分别为53.5%、29.1%(P<0.05)。结论:V-LCTL具有抗肿瘤作用,且抗肿瘤活性较V-I更强。     

热化疗对K562细胞体外增敏作用的实验研究

目的观察热疗联合阿霉素对人慢性白血病细胞株K562细胞内的药物浓度变化及凋亡的影响。方法MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40、41、42℃,体外作用于K562细胞。作用前及作用48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及细胞内药物浓度的变化。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果作用48h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度。热化疗组对K562细胞有明显的抑制作用(P<0.01),随着温度的增高而增强;热化疗组细胞内的药物浓度明显增加(P<0.01)。结论热疗联合阿霉素能增加K562细胞内的药物浓度,提高肿瘤细胞的凋亡率。     

木犀草素对肝星状细胞迁移和增殖的影响

目的:研究木犀草素对肝星状细胞迁移的影响。方法:体外培养肝星状T6(HSC-T6)细胞,细胞计数Kit8(CCK-8)法检测0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞增殖的影响;通过划痕实验、Transwell实验观察0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法检测木犀草素对细胞外信号调节激酶(ERK)5蛋白磷酸化水平的影响。结果:20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞划痕的修复(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞穿膜(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制细胞中由血清诱导的去磷酸化(p)-ERK5表达(P<0.05)。结论:木犀草素呈浓度依赖性抑制HSC-T6细胞的增殖和迁移,其机制可能与抑制ERK5蛋白磷酸化水平有关。     

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G2 / M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO／EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果1．DADS在10-80mg-L。范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量一时间依赖效应。2．DADS浓度在10-80mg．L-1。时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义（p〈0．05或P〈0．01）。3．不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G2／M期。结论DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G2／M期有关。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素C和肿瘤可溶性抗原诱导的细胞毒性T淋巴细胞的杀瘤效应

目的 探讨肿瘤可溶性抗原(TSA)联合超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 实验分为对照组(淋巴细胞)和实验组(SEC+ TSA+淋巴细胞).分离肿瘤患者外周血淋巴细胞,经TSA、超抗原SEC联合作用诱导产生CTLs,对其增殖、细胞表型、杀瘤活性进行观察和测定.结果 经TSA、SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性明显增强.实验组和对照组CD3均阳性表达,实验组CD8+明显高于对照组(49.07％比27.52％,P＜0.05).经肺癌TSA、超抗原SEC联合刺激淋巴细胞组培养诱导的CTLs,当效靶比为20∶1时对CALU-6、自体肺癌细胞、Hela细胞杀伤活性明显高于效靶比为10∶1[分别(89.6±3.7)％比(51.5±4.0)％,(92.0±4.0)％比(54.5±4.0)％,(65.0±3.8)％比(35.3±2.4)％,均P＜0.05];效应细胞对人肺癌细胞株CALU-6、自体肺癌细胞的杀伤活性明显高于Hela细胞(P＜0.05).结论 经肿瘤抗原和超抗原SEC诱导的CTL能够产生高效特异性的杀瘤效应.     

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN）组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态：PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P〈0.0l）,并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著（P〈0.01）;在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。     

魟鱼软骨多糖抗血管形成的实验研究

目的:探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对血管形成的作用。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法检测不同浓度RCG对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;缝线诱导大鼠角膜新生血管,通过计算新生血管面积评价不同浓度RCG对大鼠角膜新生血管的作用;建立小鼠Lewis肺癌模型,观察不同浓度RCG作用后肿瘤生长情况,计算原发瘤抑制率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:RCG可明显抑制人脐静脉内皮细胞的体外增殖,IC50为62.93mg.mL-1;与生理盐水组比较,应用不同浓度RCG后新生血管面积明显减少(P<0.01),原发瘤抑制率呈浓度依赖性,MVD值降低(P<0.01)。结论:RCG对实验动物具有良好的抗血管生成活性。