古抑菌素对人肝癌细胞作用的研究

目的:通过组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACS)抑制剂古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对人肝癌细胞HepG2(以下简称HepG2)和正常肝细胞LO2(以下简称LO2)增殖与凋亡作用的比较,探讨TSA对肝癌的作用机制.方法:应用光学显微镜、透射电镜、四氮唑蓝(MTT)法、免疫细胞化学法观察经不同浓度TSA处理后的HepG2和LO2的增殖、凋亡与凋亡相关蛋白的改变.结果:HepG2细胞经TSA处理后,电镜下超微结构发生了凋亡早期改变;小剂量TSA对HepG2细胞具有较强的抑制作用,对LO2细胞影响不明显,当TSA浓度达到1000 nmol/L以上时,对LO2表现出明显的细胞毒性作用;TSA可诱导HeptG2细胞凋亡,并增加凋亡相关蛋白Bax的表达.结论:TSA可明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其机制可能与上调Bax的表达,诱导细胞凋亡有关.     

丹酚酸A诱导HepG2细胞凋亡及抑制c-Met表达

目的通过研究丹酚酸A（salvianol acid A,SalA）对肝癌HepG2细胞株c-Met蛋白表达的影响,探讨SalA抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的可能作用机制。方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,采用MTT法及流式细胞术检测SalA作用后细胞存活、增殖及凋亡情况;同时运用Westernblot法及PCR法检测HepG2细胞c-Met及其下游信号通路中关键蛋白和基因表达的改变。结果肝癌HepG2细胞经SalA处理后,其细胞增殖显著抑制,细胞凋亡比例亦升高,且呈浓度依赖性;同时HepG2细胞中c-Met及其下游信号分子AKT的磷酸化水平显著下调,凋亡相关蛋白Bax、caspase-3和caspase-9的表达亦明显上调。结论SalA能有效抑制肝癌HepG2细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制HepG2细胞中c-Met蛋白及其下游信号通路中AKT蛋白的磷酸化水平有关。     

乳腺癌组织中脆性组氨酸三联体基因的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学酶联免疫sP法,检测FHIT在41例乳腺癌组织及11例癌旁组织中的表达。结果乳腺癌组FHIT蛋白阳性表达率46．3％（19／41）显著低于正常乳腺组90．9％（10／11）（P〈0．05）。中／高分化组FHIT蛋白阳性表达率显著高于低分化组（53．8％vs33．3％）（P〈0．05）;淋巴结转移组FHIT蛋白阳性率低于,无淋巴结转移组（42．9％vs53．8％）（P〈0．05）;Ⅰ＋Ⅱ期组与Ⅲ＋Ⅳ期组之间FHIT蛋白阳性表达率（56．3％ vs 40．0％）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FHIT基因在乳腺癌的发生、发展中起重要作用,对其蛋白的检测可作为判定乳腺癌发生及转移能力的一项客观指标。     

脆性组氨酸三联体和p16基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

为探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）和抑癌基因p16在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义，采用免疫组化SP法观察69例膀胱癌石蜡标本中FHIT和p16的表达情况。结果表明，FHIT和p16的阳性表达率分别为47．8％和40．6％，其阳性表达率随病理分级、临床分期升高而下降，复发肿瘤阳性表达率显著低于未复发病例。结论：FHIT和p16表达可能成为判断膀胱癌恶性程度和分化状态有参考意义的重要指标。     

冬凌草甲素上调人肝癌HepG2细胞 PTEN基因表达与诱导凋亡作用

［摘要］目的研究冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定冬凌草甲素诱导HepG2细胞的增长抑制；流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片；逆转录 聚合酶链式反应（RT PCR）半定量分析冬凌草甲素诱导人肝细胞癌HepG2细胞后PTEN mRNA的表达情况。结果MTT比色法测得冬凌草甲素对HepG2细胞增殖具有明显抑制作用，并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强；流式细胞术分析HepG2细胞经冬凌草甲素诱导后，细胞凋亡率随作用时间延长而增加；DNA电泳呈梯状条带。RT PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡增加而逐渐增高。 结论冬凌草甲素能够明显抑制HepG2细胞增殖，并诱导肝癌细胞凋亡， 其作用途径可能与上调PTEN mRNA表达有关。     

大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用

目的 观察大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用.方法 用不同浓度大蒜素处理对数生长期的人肝癌细胞HepG2.比色还原法检查4、8、16 h时HepG2细胞生长的抑制率;Hoechest荧光染色观察8 h时细胞形态的变化;JC-1检测40 mg/L大蒜素作用4 h后细胞线粒体跨膜电位的变化;免疫组化法检测经浓度为40 mg/L大蒜素作用4 h后其对细胞色素C的影响.结果 与无药阴性对照组比较,大蒜素能明显抑制HepG2细胞的增殖,且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高(P<0.01).Hoechst 33258荧光染色观察到细胞凋亡形态学特征.结论 大蒜素对人肝癌细胞株HepG2有明显的生长抑制作用,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡.这可能与其通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放有关.     

6'-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制

目的探讨6'-羟基爵床素A(JR6)对人肝癌Hep G2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用MTT法观察不同浓度的JR6和5-氟尿嘧啶(5-FU)对Hep G2细胞存活的作用,荧光显微镜观察Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染后Hep G2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素c、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 JR6 6.1~196μmol·L-1和5-FU 3.4~192μmol·L-1分别作用Hep G2细胞48 h,对Hep G2细胞存活具有抑制作用,IC50分别为74.90和49.75μmol·L-1。JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的(6.9±2.0)%增加至(13.8±2.0)%,(18.6±4.3)%和(32.4±3.2)%(P<0.05,P<0.01)。Hoechst33258染色结果显示,JR6 49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR6 49和196μmol·L-1作用48 h能使Hep G2细胞线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,胞浆细胞色素c表达增加,促凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且Bax/Bcl-2比值增加(P<0.05,P<0.01)。JR6 49μmol·L-1和5-FU组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素c释放、打破Bcl-2/Bax平衡诱导Hep G2细胞凋亡。     

马钱子碱经JNK-Fas途径诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨马钱子碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法通过CCK-8法检测马钱子碱对HepG2细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术检测马钱子碱对HepG2细胞凋亡的影响以及Ca^(2+)的含量、激光共聚焦法观察Ca^(2+)的形态学分布情况、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测基因的表达情况。结果马钱子碱可以有效抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在一定范围内,随着时间的推移和浓度的增加,抑制率和凋亡率明显增加。马钱子碱作用于HepG2细胞后引起MKK7、JNK、Fas、FADD基因的变化,并最终引起Ca^(2+)的释放导致细胞溶解。结论马钱子碱对HepG2细胞有抑制生长的作用,并能诱导HepG2细胞发生凋亡。此过程通过JNKFas通路作用,最终引起细胞内Ca^(2+)的变化,诱导细胞发生凋亡。     

地塞米松对顺铂诱导的HepG2细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨地塞米松对顺铂诱导HepG2细胞凋亡的影响,并观察Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。方法:HepG2细胞与顺铂及不同浓度的地塞米松共培养,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3的mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,流式细胞术(FACS)检测各组HepG2细胞的凋亡情况。结果:随着地塞米松浓度的增加,HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Caspase-3蛋白表达量下降。同时细胞凋亡率降低。结论:地塞米松部分通过Bcl-2途径抑制肝癌细胞的凋亡,而Caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG 2 的影响

目的观察曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度的曲马多（0．1,1,10,100,1000,10000,100000,um01．L^-1）,对照组RPMI-1640培养液中不加曲马多,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测曲马多对HepG2细胞增殖活性的影响,采用流式细胞技术检测曲马多对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst3328染色方法分析鉴定曲马多对HepG2细胞凋亡的影响。结果曲马多浓度≥1000μmol．L^-1时。细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0．05）;随着曲马多浓度的增加,G0／G1期比例逐渐增高,（S＋G2）／M期逐渐降低;用Hoechst33258染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,曲马多浓度≥10000μmol．L^-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞数占细胞总数的比例较对照组显著增加（P〈0．05）。结论曲马多在临床常用剂量范围内对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,浓度≥1000μmol．L^-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,浓度≥10000μmol．L^-1时可引起人肝癌细胞株HepG2凋亡。     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中生存素表达的影响

目的：观察沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中生存素（Survivin）表达的影响。方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2随机分成4组：空白对照组；多柔比星组（1．0mg／L）；沙立度胺组（50、100、200、400mg／mL，4个对半稀释质量浓度）；联合用药组：沙立度胺（200mg／mL）＋多柔比星（1．0mg／L）。分别对HepG2细胞作用12、24、48、72h后，应用免疫组织化学法观察对Survivin表达的影响。结果：沙立度胺单独及联合多柔比星作用于HepG2细胞可下调Survivin表达，单药沙立度胺以200mg／L作用48h效果最为明显，联合用药组下调Survivin表达优于其余各组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：沙立度胺可下调人肝癌细胞株HepG2Survivin的表达，且与多柔比星有协同作用，可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一。     

曲古抑菌素A对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制药曲古抑菌素A(TSA)对肾癌GRC-1细胞生长的影响及其作用机制. 方法使用TSA处理GRC-1细胞. 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western blot免疫印迹分析p53,p21和bcl-2表达. 结果 TSA能明显抑制GRC-1细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的GRC-1细胞早期凋亡率明显提高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低. TSA能够明显下调bcl-2的表达,上调p21的表达,而对p53的没有显著影响. 结论TSA可以通过诱导肾肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21的表达有关,TSA可能依赖非p53途径调控p21的表达.     

杨梅素诱导人肝癌HepG2凋亡机制研究

目的对杨梅素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制进行研究。方法采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化。用Western印迹法分析相关蛋白的变化。结果杨梅素明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞调亡。Caspase-3,caspase-9抑制剂可明显抑制100μg/ml杨梅素诱导的凋亡。Western印迹结果显示100μg／ml杨梅素作用于细胞后,细胞色素c水平明显升高。结论杨梅素（100μg／ml）通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长及其尿型纤溶酶受体表达的体外研究

目的:体外研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长及其表达尿型纤溶酶受体(uPAR)的影响。方法:SMMC-7721在不同浓度的As2O3作用不同时间后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析As2O3对uPARmRNA表达的影响,并设立不加As2O3的对照组。结果:As2O3对SMMC-7721细胞的生长呈明显的抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;与对照组比较,As2O3实验组G0/G1期细胞比例明显降低,G2/M期细胞比例提高(P<0.05),uPARmRNA表达量明显减少(P<0.01)。结论:As2O3能有效抑制肝癌细胞株SMMC-7721的生长,下调uPARmRNA的表达可能是其作用机制之一。     

甲基莲心碱对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

摘 要 目的：研究甲基莲心碱对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法: 采用CCK 8法观察甲基莲心碱对人肝癌细胞HepG2细胞生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察甲基莲心碱作用HepG2细胞后细胞形态的变化;测定乳酸脱氢酶 (LDH)释放率观察HepG2细胞受损程度;Annexin V PI双染测定甲基莲心碱对HepG2细胞凋亡率的影响;PI/RNase单染检测不同浓度的甲基莲心碱对其凋亡周期的影响。结果: 甲基莲心碱对体外培养的人肝癌HepG2细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;细胞膜的受损程度随着药物剂量的增大逐步提高;Hoechst33258及流式结果表示,甲基莲心碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势。结论: 甲基莲心碱可显著抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性,诱导其阻滞于G0/G1期,发生晚期凋亡。     

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞体外放射治疗的影响

目的：探讨白藜芦醇（ Res）联合体外放射治疗（放疗）对肝癌Bel-7404细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法25μmol·L-1 Res联合放疗处理肝癌Bel-7404细胞,并将细胞分为4组：对照组,2 Gy放疗组,4 Gy放疗组,6 Gy放疗组,噻唑蓝（ MTT）法检测肿瘤细胞的增殖及运动侵袭能力,荧光显微镜检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况。结果与对照组比较,2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、6 Gy放疗组肝癌Bel-7404细胞增殖能力及侵袭能力均下降,凋亡细胞增多（ P〈0.05）。结论 Res能增强肝癌Bel-7404细胞对放疗的敏感性,放疗联合Res可使肝癌细胞增殖受抑,侵袭减弱,凋亡增加,其原因与降低MMP-2、VEGF蛋白表达有关。     

沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2中VEGFmRNA表达的影响

目的:观察沙立度胺单独及联合多柔比星对人肝癌细胞株HepG2血管内皮生长因子信使核糖核酸(VEGFmRNA)表达的影响.方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2并随机分成5组;空白对照组,多柔比星组(1.0 mg/L),沙立度胺100 mg/L组,沙立度胺200 mg/L组,联合用药组:沙立度胺(200 mg/L)+多柔比星(1.0 mg/L),分别作用于HepG2细胞48 h后,应用半定量RT-PCR法观察对VEGFmRNA表达的影响.结果:沙立度胺单独及联合多柔比星作用于HepG2细胞均可下调VEGFmRNA表达.沙立度胺以100 mg/L作用效果较为明显.联合用药组下调VEGFmRNA表达,与沙立度胺100 mg/L组比较差异无显著性(P=0.225),与其余各组比较差异具有显著性(P<0.05).结论:沙立度胺可下调人肝癌细胞株VEGFmRNA的表达,但与多柔比星无明显协同作用,可能是沙立度胺抗肿瘤机制之一.