大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药机制检测

目的筛查大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情况,分析其与耐药的关系。方法随机抽取2008—2010年耐3代头孢菌素(头孢他啶)的大肠埃希菌72株和肺炎克雷伯菌57株,56株头孢他啶敏感的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为对照组;三维试验确定细菌头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的产生情况;超广谱β-内酰胺酶(ESBL)确证试验检测细菌产ESBL的情况;多重聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC基因和膜孔蛋白ompF、ompk35、ompk36基因;纸片扩散法检测抗菌药物的敏感性。结果 72株大肠埃希菌中,14株产AmpC酶,23株产ESBL,3株膜孔蛋白基因缺失;57株肺炎克雷伯菌中,13株产AmpC酶,19株产ESBL,5株膜孔蛋白缺失,膜孔蛋白缺失株4代头孢均出现耐药。结论我院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素的耐药机制主要是产AmpC酶和ESBLs,同时膜孔蛋白基因的缺失会造成耐药程度增高。     

大肠埃希菌质粒介导AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的 了解深圳市人民医院质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的基因型特点和耐药特性,为临床抗菌药物的合理使用提供依据.方法 收集深圳市人民医院头孢西丁耐药的大肠埃希菌临床分离株110株.提取菌株的质粒DNA,采用多重PCR法检测AmpC酶基因,并应用DNA测序确定AmpC酶的基因型;用K-B法对其进行药物敏感试验.结果 110株对头孢西丁耐药的大肠埃希菌中,13株(11.8%)AmpC酶基因扩增阳性,测序结果显示12株为DHA-1,1株为CMY-2.AmpC酶基因阳性株对亚胺培南和美罗培南100%敏感,对其它大多数药物敏感性较低.结论 该院大肠埃希菌临床分离株中质粒介导AmpC酶基因型主要为DHA-1型,对多种抗生素的耐药性高.     

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶的检测

目的了解我院大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶产生情况.方法按NCCLS推荐的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）确证试验,对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果236株大肠埃希菌和135株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs大肠埃希菌104株和产ESBLs肺炎克雷伯菌29株,其中106株耐头孢西丁菌株检到3株产AmpC酶.结论我院这两种细菌主要耐药机制仍是产生ESBLs,耐头孢西丁可能是膜孔蛋白缺失所致.     

安徽省产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及基因型分析

目的 了解2007年安徽地区产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌枪出率及产酶株基因型.方法 三维实验进行AmpC酶筛选;并行转移接合实验,PCR检测AmpC酶基因,琼脂稀释法进行药物敏感试验.结果 21株大肠埃希菌三维实验阳性,占所有临床分离菌株的5.9%(21/355),19株经PCR检测携带ampC基因,16株转移接合成功,经序列分析表明,9株CIT阳性结果,6株DHA阳性结果,3株EBC阳性结果;1株同时携带EBC及DHA基因.其中有1株EBC型新基因被枪出(序列号为FJ237369);药敏结果显示临床分离菌株及接合子对多种抗菌药物耐药,对头孢吡肟,亚胺培南,美罗培南相对较敏感.结论 安徽地区大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶以CIT型和DHA型为主,同时存在变异型,临床可选用第四代头孢菌素类抗菌药物,碳青霉烯类抗菌药物抗感染治疗.     

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及相关耐药机制

目的 了解安徽省35所医院2005年随机月份临床分离402株大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶及对常用抗菌药物的耐药情况，揭示其相关耐药机制，指导临床合理用药。方法 三维试验筛选产AmpC酶株；多重PCR检测产质粒介导AmpC酶菌株，对产质粒介导AmpC酶菌株用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶（EsBLs）基因、1类整合子基因盒插入序列和主动外排系统acrAB-tolC基因。结果检出产质粒介导AmpC酶菌株28株（7．0％），其中2株经测序证实为新的质粒ampC基因型（GenBank登录号分别为EF054895，EF417572）。产酶菌株对12种常用抗菌药物，除亚胺培南、美罗培南全部敏感外，对其他大多数抗菌药物耐药率均高于非产酶株。28株产酶菌株中有23株表现为多重耐药，20株检测出各型ESBLs基因，21株扩增出Ⅰ类整合子基因盒插入序列，20株主动外排系统acrAB-tolC基因阳性。结论产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药率均较高，多重耐药现象普遍，同时存在多种耐药机制，其中以产生灭活酶和Ⅰ类整合子介导的耐药机制为主。对产酶株临床经验用药可选用碳青霉烯类、阿米卡星及第四代头孢菌素类抗菌药物。     

碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的耐药机制探讨

目的探讨本院存在的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制。方法临床检出碳青霉烯类抗菌药物非敏感肠杆菌科细菌6株。改良Hodge实验、EDTA协同试验检、改良三维实验检测其耐药表型;引物特异性PCR法检测其碳青霉烯酶耐药基因及外膜蛋白基因存在情况。结果 1株大肠埃希菌中改良Hodge实验弱阳性,EDTA协同试验阳性,改良三维实验结果可被CLA单独抑制,PCR扩增结果IMP4碳青霉烯酶基因阳性。5株产气肠杆菌改良Hodge实验,阴性3株,阳性两株,EDTA协同试验阴性;改良三维实验中,5株均可被CLO+CLA混合液完全抑制,PCR未扩增出目的基因条带和膜蛋白基因。结论本地区大肠埃希菌的耐药机制可能与IMP4型金属碳青霉烯酶存在有关,产气肠杆菌耐药机制可能与ESBLs和AmpC酶同时存在、膜蛋白表达缺失及其他未检测到的碳青霉稀酶存在有关。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶的检测及药物敏感率分析

目的探讨大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌AmpC酶的产生情况及对临床常用抗生素的耐药特征,为临床治疗提供选药参考。方法应用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验测定ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,并用酶粗提物进行三维试验确证产AmpC酶菌株。结果 299株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率为19.73%,经三维试验确证产AmpC酶15株,阳性率5.02%,15株产AmpC酶阳性菌株均为ESBLs阳性菌株。产AmpC酶阳性菌株与AmpC酶阴性菌株药敏结果显示：前者大多对头孢西丁、头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢他啶、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟/棒酸耐药,而后者大多对上述药物敏感,两者有显著性差异（均P〈0.05）。两者大多对亚胺培南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星及阿米卡星敏感。结论台州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶菌株检出率较高。产AmpC酶细菌呈多重耐药,亚胺培南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星等是治疗产AmpC酶细菌感染的较可靠药物。     

体外诱导大肠埃希菌对厄他培南敏感性降低及机制研究

目的 体外诱导获得对厄他培南敏感性降低的大肠埃希菌,并分析可能的产生机制.方法 将厄他培南敏感大肠埃希菌经厄他培南体外诱导后分离突变株;药敏试验测定MIC(无或含PAβN); PFGE检测同源性;SDS-PAGE及Real-time PCR检测外膜蛋白表达;MALDI-TOF/TOF鉴定差异蛋白;并对外膜蛋白基因进行测序.结果 厄他培南处理得到的两个突变株(大肠埃希菌08-1E及大肠埃希菌08-3E)除对厄他培南敏感性显著降低外,对美罗培南、头孢西丁及头孢吡肟等β-内酰胺类药物敏感性也呈现不同程度的降低.PFGE显示突变株与亲本株同源,进一步的研究发现突变株对厄他培南敏感性降低与外排泵无关,而与基因的插入失活等机制引起的外膜蛋白(OmpC、NmpC、LamB、OmpF)缺失或表达降低有关.结论 体外诱导大肠埃希菌对厄他培南敏感性降低与外膜蛋白缺失或表达降低紧密相关.     

大肠埃希菌AmpC酶及ESBLs检测与耐药性分析

目的了解重庆医科大学第二临床学院2003年1～12月分离191株大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）及对常用抗生素的耐药情况，揭示其主要耐药机制，指导临床合理用药。方法采用头孢西丁和头孢曲松改良酶提取物三维试验法，对191株大肠埃希菌分别进行AmpC和ESBLs测定。结果大肠埃希菌单产AmpC酶、ESBLs、同时产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为1．1％、23．0％、2．6％。产酶菌株（单产AmpC酶、ESBLs及同时产AmpC酶＋ESBLs）对18种抗生素，除亚胺培南全部敏感外耐药率均高于平均水平。结论大肠埃希菌对头孢菌素类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药只可选用碳青霉烯类抗生素。     

大肠埃希菌AmpC酶的临床实验室检测与报告

目的探讨致病大肠埃希菌AmpC酶的临床实验室检测方法,为临床合理使用抗生素提供科学依据。方法将纸片扩散法药敏试验中对头孢西丁中介或耐药的菌株采用三维试验和聚合酶链反应(PCR)基因扩增对AmpC酶进行确证试验。结果临床分离筛选的10株耐头孢西丁大肠埃希菌中采用三维试验和PCR基因扩增后1株被确证为AmpC酶菌株。结论耐头孢西丁的革兰阴性菌需要作AmpC酶试验或PCR基因扩增进行确证,准确AmpC酶检测结果对临床合理使用抗生素具有积极意义。     

59株大肠杆菌中整合子的研究

目的:研究59株耐头孢西丁大肠杆菌整合子的分类、结构及其在介导耐药中的作用。方法:利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因(intI),对其阳性菌株可变区(Int)扩增产物进行测序分析;采用微量稀释法测定22种抗生素对试验菌株的敏感性。结果:59株大肠杆菌中,45株Ⅰ类整合酶基因阳性(76%);所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA5和dfr17;仅有2株携带β-内酰胺酶耐药基因盒;整合子阳性组抑菌浓度明显高于阴性组。结论:Ⅰ类整合子广泛地存在于耐头孢西丁大肠杆菌中;耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类药物及氯霉素耐药的主要原因,但对介导β-内酰胺类耐药方面,不起主要作用。     

产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的研究

目的:观察25株产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的分类、结构及其在介导AmpC酶基因转移中的作用。方法:采用微量稀释法测定20种抗生素对试验菌株的敏感性。利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因(intI)及其定位,对其阳性菌株可变区(Int)扩增产物进行测序分析。结果:这25株菌对多种抗生素耐药。20株Ⅰ类整合酶基因阳性(80%);所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA5和dfr17;未发现携带AmpC基因盒的整合子。结论:Ⅰ类整合子广泛地存在于产AmpC酶的大肠杆菌中;耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类药物及氯霉素耐药的主要原因,但对介导AmpC酶基因转移,不起主要作用。     

2009年10月-2012年6月我院ICU患者感染革兰阴性杆菌分布及产酶、耐药相关性分析

目的：了解重症监护病房（ICU）患者感染革兰阴性杆菌分布及产酶、耐药情况,指导临床合理用药。方法：对2009年10月-2012年6月我院ICU送检的临床标本进行培养、分离、鉴定,采用手工法及法国生物梅里埃全自动细菌鉴定系统对菌种进行鉴定,采用K-B琼脂扩散法进行药敏试验,采用改良三维试验对细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、Amp C酶进行检测,根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）2008年标准进行判读。结果：送检的临床标本中分离出194株革兰阴性杆菌,其中鲍曼不动杆菌41株、铜绿假单胞菌48株、阴沟肠杆菌29株、肺炎克雷伯菌24株、大肠埃希菌16株、枸橼酸杆菌属12株、嗜麦芽窄食单胞菌11株、粘质沙雷菌7株、产气肠杆菌6株。194株革兰阴性杆菌中共检出单产ESBLs菌株59株（30.4%）,单产Amp C酶菌株57株（29.4%）,同时产ESBLs和AmpC酶菌株11株（5.7%）。所有病原菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,对亚胺培南/西司他丁、阿米卡星的敏感性高,产酶菌株的耐药率高于不产酶菌株。讨论：ICU患者革兰阴性杆菌耐药性呈上升趋势,对亚胺培南/西司他丁、阿米卡星敏感性高;应根据药敏试验结果选择抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。     

改良三维试验与PCR法检测川东北地区产“超-超广谱”β-内酰胺酶革兰阴性杆菌

目的:调查川东北地区临床分离革兰阴性杆菌的耐药情况,建立筛选产超-超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)细菌的实验室方法。方法:收集自2008年1月-2009年6月从川北医学院附属医院临床分离的革兰阴性杆菌237株,采用琼脂二倍稀释法测定14种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)值,筛选出对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测SSBLs中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型与AmpC基因型。结果:237株革兰阴性菌对多种抗生素存在较高的耐药率。对头孢西丁与头孢他啶同时耐药的革兰阴性杆菌共105株,对这105株革兰阴性杆菌进行改良三维试验与质粒结合实验,筛选出产SSBLs菌株共2株,包括1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌,其质粒编码的ESBLs基因型为SHV、TEM、CTX-M,AmpC基因型为ACT。结论:川东北地区首次发现产SSBLs革兰阴性杆菌;改良三维试验与PCR法可以用于确证耐药菌是否产SSBLs。     

腹泻综合征致泻性大肠埃希菌血清型分布及耐药性的研究

目的探讨腹泻综合征致泻性大肠埃希菌的血清型分布及耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法选取719份未使用抗生素腹泻患者的稀便、水样便、黏脓便或脓血便标本作为研究对象,通过増菌、各种选择性培养基筛选、生化试验,对符合株进行致泻性大肠埃希菌的血清型分型,然后进行药敏试验。结果本次检测共检出65株血清凝集致泻性大肠埃希菌,分属EPEC、EIEC、ETEC,以EPEC为主,占83.08%,共8个血清型,其中血清型O55：H59、O128：H67占58.47%,药物敏感性高的抗生素为CFX（87.7%）、CTX（83.1%）和CIP（86.2%）,耐药性高的抗生素为TET（56.9%）、GEN（69.2%）和NAL（52.3%）。结论本地区腹泻综合征中血清学阳性致泻性大肠埃希菌以EPEC为主,常见血清型为O55：H59、O128：H67。腹泻综合征致泻性大肠埃希菌对抗生素的敏感性差异较大,其中检测菌株对CFX、CTX和CIP具有较高敏感性。     

我院2012年10月-2013年3月革兰阴性杆菌产ESBLs和AmpC酶检测及耐药性分析

目的:了解我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)革兰阴性杆菌的耐药性,为临床合理用药提供参考。方法:收集我院2012年10月-2013年3月临床分离出的革兰阴性杆菌。用头孢硝噻吩纸片检测革兰阴性杆菌产β-内酰胺酶情况,双纸片法检测产ESBLs情况,头孢西丁三维试验检测产AmpC酶情况,以确定产酶表型。用K-B法进行药敏检测。结果:103株革兰阴性杆菌中,单产AmpC酶菌42株(40.8%),单产ESBLs菌21株(20.4%),同时产ESBLs和AmpC酶菌12株(11.7%)。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对含酶抑制剂复方制剂如哌拉西林/他唑巴坦,以及碳青霉烯类抗生素亚胺培南和氨基糖苷类抗生素阿米卡星的耐药率均较低。非发酵菌铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对各抗生素耐药率均较高。结论:各革兰阴性杆菌产酶菌株对多种抗生素的耐药率较高,产ESBLs和AmpC酶可能是导致革兰阴性杆菌耐药的主要机制之一。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

老年患者下呼吸道感染革兰阴性杆菌分布及耐药性分析

目的:观察老年患者下呼吸道革兰阴性杆菌感染常见病原菌的分布及耐药状况.方法:对我院老年患者痰液中分离出的186株革兰阴性杆菌选用15种常用抗生索进行药敏试验.结果:分离出的186株革兰阴性杆菌,主要为:铜绿假单胞菌37株,占19.89%,肺炎克雷伯菌55株,占29.57%,鲍曼不动杆菌18株,占19.9%,阴沟肠杆菌16株,占8.60%,大肠埃希菌34株,占18.28%,嗜麦芽寡养单胞菌9株,占4.84%,其他革兰阴性杆菌17株,占9.14%;耐药性分析显示,革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的耐药率最低为亚胺培南,最高为氨苄西林,大部分细菌呈多重耐药.结论:老年患者下呼吸道革兰阴性菌耐药谱广,多重耐药严重.     

2010—2012年我院临床细菌分布及耐药性分析

目的：了解2010—2012年我院常见病原菌分布特点及对各种临床常用抗菌药物的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法：统计和整理2010—2012年我院送检细菌培养标本中分离出的病原菌,并对其耐药性进行分析。结果：2010—2012年我院共分离出病原菌5 992株,其中革兰阳性菌13 94株,占23.26%;革兰阴性菌4 691株,占78.29%。革兰阳性菌中,金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株平均占68.37%,表皮葡萄球菌中耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）菌株平均占69.51%。革兰阴性菌中,肠杆菌科细菌以大肠埃希菌最多见,非发酵菌科以铜绿假单胞菌多见。肠杆菌科细菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）大肠埃希菌的检出率为64.5%;产ESBL肺炎克雷伯菌的检出率为47.3%。结论：院内感染以革兰阴性杆菌为主,细菌耐药性呈增长趋势,需加强耐药性监测,尤其是对产酶菌和多重耐药菌的监测,应采取有效的控制措施,为临床正确使用抗菌药物提供参考。     

动物源性大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性研究

目的了解动物源性大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率和耐药特点,为其耐药性的安全评价提供依据。方法采用NCCLS推荐的表型检测法和确认试验测定大肠埃希菌ESBLs,纸片扩散法测定大肠埃希菌的耐药性。结果 222株大肠埃希菌对环丙沙星（83.78%）、诺氟沙星（92.79%）、利福平（81.08%）的耐药率很高;对阿米卡星、亚胺培南高度敏感。ESBLs检出率为12.16%（27/222）,产ESBLs菌株除对亚胺培南外其余13种抗生素的耐药率均高于非产ESBLs菌株。结论动物源性大肠埃希菌对很多抗生素具有一定的耐药性,应加强对食品中动物源性大肠埃希菌耐药性的监测。