上皮性卵巢癌HIC1基因异常甲基化的检测及其临床意义的研究

目的 探讨HICI基因异常甲基化在上皮性卵巢癌发生及发展中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR法检测63例上皮性卵巢癌、相应的盆腹腔转移灶41例及癌旁卵巢组织10例中HIC1基因甲基化状态.结果 上皮性卵巢癌原发灶及转移灶中存在HIC1基因异常甲基化,发生率分别为33.3%及34.1%,显著高于正常卵巢组织(P＜0.05).HIC1基因甲基化在不同临床分期、分化程度及病理类型上皮性卵巢癌中无统计学差异(P＞0.05).结论 HIC1基因异常甲基化与上皮性卵巢癌发生及发展相关.     

卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白表达检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白的表达。方法:应用甲基化特异性PCR法和免疫组织化学SP法分别检测20例正常卵巢上皮组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织以及40例卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化状态以及β-catenin蛋白的表达。结果:在正常卵巢上皮、卵巢交界性上皮性肿瘤以及卵巢上皮性癌组织中,SFRP5基因启动子区甲基化率分别为0.0%、10.0%、67.5%,差异有统计学意义(P<0.001);β-catenin蛋白的异常表达率分别为5.0%、40.0%、72.5%,差异有统计学意义(χ2=24.962,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织中β-catenin蛋白的异常表达与SFRP5基因启动子区甲基化有关联(rP=0.468,P<0.001)。结论:SFRP5基因启动子区甲基化可能导致β-catenin蛋白异常表达,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

RASSF 1A基因在卵巢癌组织及腹腔冲洗液中甲基化的研究

目的:探讨卵巢癌组织和腹腔冲洗液中Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1A,RASSF 1A)基因启动子异常甲基化状况及其在卵巢癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测42例卵巢癌组织、腹腔冲洗液或腹腔积液、11例正常卵巢组织和19例良性病变卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化状态。结果:42例卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为38.1%,11例正常卵巢组织和19例良性卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区无甲基化,差异有统计学意义(P<0.01)。临床分期Ⅲ期和Ⅳ期的卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为54.2%,高于临床Ⅰ期和Ⅱ期者16.6%(P<0.05)。淋巴结阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率56.5%,高于淋巴结阴性者15.8%。腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为74.1%,高于腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阴性者33.3%(P<0.01)。结论:RASSF 1A基因甲基化在卵巢癌患者中具有较高的发生率,检测卵巢癌组织和腹腔冲洗液或腹腔积液中RASSF 1A基因的甲基化状态对卵巢癌的诊断和判断预后具有一定的价值。     

肝癌病人癌组织与血浆p16及APC基因甲基化检测及意义

目的检测肝细胞性肝癌(HCC)病人癌组织及血浆中多肿瘤抑制因子p16和结肠腺瘤样息肉基因(APC)的基因启动子区异常甲基化状态,并探讨其临床意义。方法应用实时荧光PCR技术,检测86例HCC病人癌组织、癌旁正常组织及血浆标本中p16、APC基因启动子区异常甲基化状态,以24例正常肝组织作为对照。结果 24例正常肝组织未检出p16和APC基因的异常甲基化。癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=67.48、6.72,P<0.05)。癌组织中APC基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=18.03、29.16,P<0.05)。肝癌组织及对应血浆标本p16、APC基因甲基化的一致率分别为65.4%、43.3%。HBsAg阳性组肝癌组织及其对应血浆标本p16基因甲基化率显著高于HBsAg阴性组,差异有统计学意义(χ2=5.60、5.67,P<0.05)。结论 p16、APC基因启动子区异常甲基化导致的基因沉默可能与HCC的发生和发展密切相关。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

上皮性卵巢癌PTEN启动子CpG岛甲基化研究

目的探讨上皮性卵巢癌中抑癌基因PTEN启动子CpG岛的甲基化情况。方法选用甲基化敏感性核酸内切酶HpaⅡ酶切-PCR法,检测64例上皮性卵巢癌组织(浆液性卵巢襄47例,粘液性卵巢癌17例)以及12例正常卵巢组织中PTEN启动子CpG岛甲基化情况。结果正常卵巢组织、浆液性卵巢癌组织和粘液性卵巢癌组织中PTEN启动子甲基化阳性率分别为8.33％(1/12)、57.45％(27/47)和47.06％(8/17),浆液性和粘液性这两种不同组织学类型的上皮性卵巢癌之间的差异无显著性(P<0.05),但均与正常组织间有显著性差异(P分别<0.01,0.05)。结论 PTEN启动子CpG岛甲基化在浆液性卵巢癌和粘液性卵巢癌中均有很高的发生率,提示PTEN基因启动子异常甲基化可能是其在卵巢癌中主要灭活机制之一。     

COX-2、Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及与临床病理因素的关系

目的探讨卵巢上皮性癌组织中环氧合酶2（COX-2）与Survivin的表达以及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化Elivision染色法检测COX-2、Survivin蛋白在60例卵巢上皮性癌组织、20例正常卵巢、20例良性卵巢上皮性肿瘤及20例交界性卵巢上皮性肿瘤中的表达。结果COX-2、Survivin蛋白在正常卵巢、良性卵巢上皮性肿瘤、交界性卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织中的表达差异有高度显著性（P〈O．05）。COX-2表达与卵巢上皮性癌患者盆腹腔淋巴结有无转移呈显著相关性（P〈O．05）。Survivin基因表达与卵巢上皮性癌的病理类型有相关性（P〈O．05）、Survivin基因表达与淋巴结转移有显著相关性（P〈O．05）。结论COX-2、Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中高表达，并在卵巢上皮性癌的发生、发展中起着重要作用，说明卵巢上皮性癌的发生非单一基因作用，而是多基因协同作用。     

上皮性钙粘附素、β-连环素在上皮性卵巢癌及其转移灶的表达及意义

目的研究上皮性钙粘附素、β-连环素在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达情况,探讨其表达与上皮性卵巢癌各项临床病理指标、肿瘤转移的关系。方法采用免疫组织化学法检测正常卵巢,良性、交界性卵巢上皮性肿瘤,上皮性卵巢癌及其转移灶组织中上皮性钙粘附素、β-连环素的表达。结果上皮性钙粘附素在正常卵巢组织表达缺失,在上皮性卵巢癌的表达明显低于良性、交界性卵巢上皮性肿瘤（P〈0.05）,上皮性钙粘附素在上皮性卵巢癌的表达随组织学分化的降低而减少（P〈0.05）,随临床分期的增加而降低（P〈0.05）,术后残留癌〉2cm则上皮性钙粘附素的表达明显降低（P〈0.05）。β-连环素在上皮性卵巢癌组织中的表达较正常卵巢及良性、交界性卵巢上皮性肿瘤明显升高（均P〈0.05）,在交界性卵巢上皮性肿瘤中的表达亦高于正常卵巢组织与卵巢良性上皮性肿瘤（均P〈0.05）;β-连环素在卵巢浆液性囊腺癌的表达明显高于卵巢黏液性囊腺癌及卵巢内膜样癌（均P〉0.05）,并随组织学分化的降低而升高（P〈0.05）。上皮性钙粘附素、β-连环素在上皮性卵巢癌转移灶的表达较原发灶明显增强（均P〈0.05）。结论上皮性钙粘附素、β-连环素在上皮性卵巢癌的发生、发展中起重要作用,两者可随肿瘤的转移而发生改变,两者联合检测可更好地评价上皮性卵巢癌的预后,为临床治疗方案提供理论依据。     

肝细胞癌P14^ARF基因启动子甲基化及其临床特征探讨

目的：探讨P14^ARF基因启动子甲基化与肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）及其临床病理特征的关系。方法：通过甲基化特异性PCR（MSP）方法检测50例HCC组织和癌旁肝组织中P14^ARF基因启动子甲基化状况。结果：癌组织及癌旁组织中P14^ARF基因启动子甲基化阳性率分别为28．0％（12／50）和4.0％（2／50）（P=0．004）。P14^ARF基因启动子甲基化与HCC的临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤个数及肿瘤分化无关（P〉0．05）,但在HBV阳性的HCC组织中甲基化阳性率显著高于HBV阴性的HCC组织（P=0．044）。结论：启动子区甲基化是P14^ARF基因失活的重要机制,P14^ARF启动子区异常甲基化可能参与了肝细胞的癌性转变。     

上皮性卵巢癌中雌激素受体β甲基化水平检测

目的检测上皮性卵巢癌中雌激素受体β（ERβ）基因启动子CpG岛甲基化状况,探讨ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及其临床意义。方法收集石蜡包埋上皮性卵巢癌标本47例,卵巢良性肿瘤标本5例,正常卵巢组织5例。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术对ERβ基因CpG岛甲基化进行检测。并采用免疫组织化学技术检测上皮性卵巢癌中ERβ的表达。结果ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌中的发生率为40.4%（19/47）,在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中均未检测到ERβ基因甲基化。ERβ基因甲基化在上皮性卵巢癌中的发生与之病理分期分级、肿瘤盆腔淋巴结转移有关,ERβ基因甲基化与其蛋白表达之间存在相关性。结论上皮性卵巢癌的发生发展与ERβ基因甲基化有关,检测甲基化状况对卵巢良恶性肿瘤的鉴别诊断可能有辅助作用。ERβ可能成为卵巢癌治疗的新的靶点。     

卵巢癌组织和血清中RASSF1A基因甲基化的检测及临床意义

目的：检测卵巢肿瘤组织和血清中Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因启动子区异常甲基化,并探讨其与卵巢癌的关系。方法：收集新鲜的卵巢癌组织及其对应的血清标本67例,采用半巢式甲基化特异性PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中RASSF1A基因启动子异常甲基化情况。结果：卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因甲基化的检出率分别为28.4%和40.3%。卵巢良性肿瘤组织和血清以及健康志愿者血清中均未发生RASSF1A基因甲基化。癌组织中RASSF1A基因的甲基化状况与血清中出现RASSF1A基因甲基化关系密切（P＜0.01）;卵巢癌患者血清和癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变与肿瘤的临床分期、细胞分化程度、组织学类型无明显相关性（P＞0.05）;与淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。结论：检测血清DNA 的RASSF1A基因异常甲基化有可能成为辅助卵巢癌诊断的有效方法之一。     

卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子甲基化及VEGF检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子的甲基化状态及VEGF的表达,探讨二者的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法(MSP)和免疫组化SP法分别检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织及30例卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子的甲基化状态及VEGF蛋白的表达。结果:3种组织中TGFBI基因启动子的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率差异均有统计学意义(χ2=34.886和26.298,P<0.001),卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因的甲基化率及VEGF蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织。卵巢上皮性癌组织中TGFBI基因启动子甲基化与VEGF的表达有关联(χ2=13.976,rP=0.516,P<0.001)。结论:TGFBI基因启动子在卵巢上皮性癌组织中发生超甲基化,可能诱导血管生成,促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

分泌型卷曲相关蛋白2基因超甲基化与大肠癌的研究

目的:研究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因启动子超甲基化与大肠癌的关系.方法:用甲基化荧光定量PCR(MethyLight)技术检测44例散发型大肠癌和20例癌旁组织中SFRP2基因的启动子甲基化状况,20例健康志愿者大肠组织作为对照组.同时分析SFRP2基因超甲基化与临床病理特征的关系.结果:44例大肠癌组织中检出SFRP2基因超甲基化36例(36/44,81.8%),20例大肠癌旁组织中检出SFRP2基因超甲基化8例(8/20,40%),20例正常大肠黏膜组织中没有显示SFRP2基因任何甲基化条带.大肠癌中SFRP2基因甲基化较正常黏膜和邻近的正常黏膜更频繁.并且SFRP2基因超甲基化与任何包括性别、年龄、肿瘤分期、位置、组织学分级等临床病理特征之间没有显著的关联.结论:SFRP2基因超甲基化与大肠癌的发生有关,SFRP2基因超甲基化可以作为大肠癌筛检的高潜力标记.     

卵泡刺激素受体与COX-2在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及相互关系

目的探讨卵泡刺激素受体(FSHR)与环氧化酶2(COX-2)在卵巢上皮性肿瘤的表达情况及相互关系。方法采用免疫组织化学方法检测卵巢上皮性癌、良性卵巢上皮性肿瘤、正常卵巢组织中的FSHR与COX-2的表达,及其相互关系。结果FSHR在卵巢上皮性癌组织的表达显著高于良性上皮性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织(P<0.01)。COX-2在卵巢上皮性癌组织中的表达高于良性上皮性卵巢肿瘤组织但无统计学意义,明显高于正常卵巢组织有统计学意义(P<0.01)。FSHR、COX-2在卵巢上皮性癌组织中的表达有相关性(r=0.729,P<0.01)。结论FSH和COX-2在卵巢上皮性癌组织高表达,且两者表达有相关性。     

转化生长因子TGF—β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的：研究转化生长因子TGF－β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法：通过免疫组织化学SABC法，用抗TGF－β1抗体检测77例卵巢上皮性肿瘤（其中良性21例，交界性7例，恶性49例）中TGF－β1的表达及定位，并以正常卵巢组织14例作对照。结果：正常卵巢组织和良性肿瘤组织中TGF－β1表达明显高于交界性和恶性肿瘤组织；TGF－β1的表达，粘液性癌高于浆液性癌，病理分级1级高于3级，临床分期Ⅰ-Ⅱ期高于Ⅲ－Ⅳ期（均P＜0.05）。结论：TGF－β1在卵巢上皮性癌的发生发展过程中起着一定作用；TGF－β1可能与卵巢上皮性癌的预后有关。     

Expression of MTA2 Gene in Ovarian Epithelial Cancer and Its Clinical Implication

Most members of metastasis-associated geneshave been identified since1994.Alot of evidenceshowed that the expression of MTA1were elevatedin human metastatic breast cell lines and metastaticcancer tissues,such as breast,colorectal,gastric,and esophageal carcinomas.MTA2,which is ho-mologous to MTA1,is a component of the NuRDATP-dependent chromatin remodeling and histonedeacetylase complex.Specifically,MTA2modu-lates the enzymatic activity of the histone deacety-lase core complext[1].Altho…     

ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中高表达:基于Oncomine数据库及生物信息学方法

目的 探讨ENTPD5在上皮性卵巢癌中的表达及临床价值。方法 通过Oncomine、TCGA数据库对ENTPD5在上皮性卵巢癌中的表达水平进行分析,UALCAN数据库分析ENTPD5表达水平与上皮性卵巢癌患者临床性状的相关性,基因富集分析（GSEA）软件分析ENTPD5在上皮性卵巢癌中的可能作用机制,CIBERSORT包探讨ENTPD5的表达量与免疫浸润的相关性。为进一步验证生物信息挖掘结果,RT-qPCR及Western blot检测23例上皮性卵巢癌组织和15例正常卵巢组织中ENTPD5的表达水平,免疫组化法检测50例上皮性卵巢癌石蜡样本和6例正常卵巢石蜡样本中ENTPD5的表达水平。结果 Oncomine、TCGA数据库发现与正常卵巢组织相比,ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中表达显著增高（P<0.05）,ENTPD5表达水平与上皮性卵巢癌患者生存呈负相关（P<0.05）。UALCAN数据库发现ENTPD5表达水平与患者年龄相关。GSEA软件分析发现ENTPD5参与ABC转运蛋白、WNT信号通路、胰岛素信号通路以及糖降解等过程,并在其中高度富集。CIBERSORT包分析显示 ENTPD5表达水平与NK细胞、肥大细胞及嗜酸性粒细胞的含量呈负相关（P<0.05）。RT-qPCR结果提示ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中的表达水平（2.592±0.339）显著高于其在正常卵巢组织表达水平（1.00±0.123）（t=4.312,P<0.01）。Western blot结果提示上皮性卵巢癌组织中的ENTPD5表达显著高于正常卵巢组织（P<0.05）。免疫组化结果提示ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中高表达。结论 ENTPD5在上皮性卵巢癌中高表达,其可能通过参与细胞多种功能过程以及细胞免疫浸润,参与上皮性卵巢 癌的发生发展。     

骨桥蛋白和趋化因子受体4在卵巢肿瘤组织中的表达及其意义

目的:分析骨桥蛋白(OPN)和趋化因子受体4(CXCR4)在不同卵巢组织中的表达,探讨二者在卵巢癌的发生、发展和转移过程中的作用。方法:选取正常卵巢组织(20例)、卵巢良性上皮性肿瘤组织(20例)和上皮性卵巢癌组织(40例),采用免疫组织化学SP法检测不同卵巢组织中OPN和CXCR4表达,分析不同临床特征上皮性卵巢癌组织中OPN蛋白和CXCR4蛋白表达率。结果: OPN在上皮性卵巢癌组织的阳性表达率高于在正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织表达率,不同分化程度(G₁、G₂和G₃期)上皮性卵巢癌组织阳性表达率组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),Ⅲ-Ⅳ期上皮性卵巢癌组织中OPN阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期组(P<0.05),在不同组织学分型上皮性卵巢癌组织(卵巢浆液性囊腺癌、卵巢黏液性囊腺癌和卵巢子宫内膜样癌)中OPN阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。CXCR4在正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤组织中均无阳性表达,在上皮性卵巢癌组织中呈阳性表达。CXCR4在上皮性卵巢癌不同病理分级(高分化G₁、中分化G₂和低分化G₃)、不同临床分期(Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期)、不同组织学分型(浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌和子宫内膜样癌)组织中阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:OPN和CXCR4在卵巢肿瘤 细胞中表达水平与肿瘤细胞的恶性程度具有一定关联,提示OPN和CXCR4表达通路可能成为卵巢癌治疗的一个新靶点。     

卵巢粘液性肿瘤hMLHl启动子甲基化及微卫星不稳定性

目的 观察卵巢粘液性肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化,及与微卫星不稳定性(MSI)间的关系。方法 1995～2001年浙江大学医学院附属妇产科医院卵巢粘液性肿瘤组织块共：107例(恶性49例,交界性35例和良性23例)。选取BAT-25、BAT-26、BAT-40、D5S346、D17S250和D2S123 6个位点用PCR法进行MSI分析;限制性内切酶聚合酶链反应(PCR)法分析hMLHl启动子甲基化。结果 良性、交界性和恶性肿瘤的hMLHl启动子甲基化阳性率分别为4．3％(1／23)、14．3％(5／35)和36．7％(18／49)。其中恶性组与交界性、良性组之间存在显著性差异(P=0．023和P=0．004),交界性和良性组之间无显著性差异(P=0．438);良性、交界性和恶性肿瘤的MSI表型阳性率分别为4．3％(1／23)、8．6％(3／35)和16．3％(8／49),有上升趋势,但无统计学意义;75％(9／12)MSI表型阳性的肿瘤存在hMLHl启动子甲基化,MSI表型阴性的肿瘤中84．2％(80／95)不存在hMLHl启动子甲基化,MSI表型阳性和hMLH1启动子甲基化之间显著相关(P=0．000),在恶性组和交界性组中两者均存在相关性(P=0．004,P=0．047)。结论 卵巢粘液性肿瘤存在hMLH1启动子甲基化,且可能是造成MSI表型阳性的主要因素,两者可能在卵巢粘液性囊腺癌发生过程中起关键作用。