脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

脂多糖诱导地鼠肺泡巨噬细胞中一氧化氮对TNF—α的调节作用

对地鼠肺进行灌洗,利用灌洗液分离纯化出肺泡巨噬细胞（ＡＭ）,并进行培养。脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,分 别加入一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂和一氧化氮（ＮＯ）供体,观察ＮＯ和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨ＮＯ 对ＴＮＦ－α的作用关系。结果显示：ＬＰＳ刺激ＡＭ使ＮＯ和ＴＮＦ－α含量均增加（Ｐ＜０．０１）,特异性ｉＮＯＳ抑制剂使活化 的ＡＭ分泌产生ＴＮＦ－α上调,ＮＯ供体可显著抑制ＴＮＦ－α的释放。不同的ＮＯ抑制剂和ＮＯ供体使ＮＯ和ＴＮＦ－α含 量变化不同。提示 ＮＯ和 ＴＮＦ－α是 ＡＭ分泌的炎症细胞因子, ＮＯ对 ＴＮＦ－α存在着调节作用。     

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的: 观察脂多糖（LPS）致大鼠肺泡巨噬细胞（AMs）中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的作用。 方法: LPS作用大鼠AMs后，用电泳迁移率改变分析法（EMSA）测NF-κB活性；用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）后，Western blotting检测p65表达变化；ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。 结果: 于LPS作用AMs后4 h，NF-κB活性达到峰值，24 h仍维持在高水平；作用后4 h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）表达后，LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组（P<0.01）。结论: LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。     

罗红霉素对小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α的影响

罗红霉素(Roxithromycin，Rox)是常用的抗生素。20世纪70年代,Itkin等在临床观察中发现红霉素等大环内酯类抗生素可能具有糖皮质激素相近的作用。近年来，发现以红霉素、罗红霉素、克拉霉素为代表的大环内酯类抗生素具有免疫调节和抗炎作用。一种新型大环内酯类抗生素——他克莫司(tacrolimus)，可作为免疫抑制药物，其免疫抑制作用比环抱菌素A(CyA)强数十倍，对排斥反应有预防和治疗作用．临床应用于器官移植和自身免疫性疾病。     

蓝玉簪颗粒抑制脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生及相关机制研究

目的:探讨蓝玉簪颗粒对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AM)内TNFα-表达及可能作用机制。方法:分离纯化AM,应用ELISA法检测蓝玉簪颗粒对LPS诱导的大鼠AM培养上清中的TNFα-水平的影响,应用Western blot方法检测大鼠AM内TNFα-及pERK蛋白表达水平,同时应用ERK拮抗剂(PD98059)观察AM内TNFα-蛋白表达。结果:蓝玉簪颗粒可剂量依赖的降低由于LPS刺激导致的AM培养上清内TNFα-含量升高;蓝玉簪(100 mg/L)颗粒可显著降低由于LPS刺激导致的AM细胞内pERK及TNFα-蛋白表达升高;ERK特异性抑制剂(PD98059 30 mol/L)及蓝玉簪颗粒干预,蓝玉簪颗粒+PD98059干预后,我们发现与LPS刺激组相比,大鼠AM中TNFα-表达显著降低。结论:蓝玉簪颗粒可以抑制LPS诱导AM TNFα-表达,其作用的机制之一可能与蓝玉簪抑制细胞外信号转导通路有关。     

ox-LDL诱导巨噬细胞TNF-α的时序表达

目的 :细胞因子在动脉粥样硬化发生发展过程中扮演重要角色。本课题旨在研究氧化型低密度脂蛋白 (ox -LDL)致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactor,TNF -α)的表达时序 ,以探讨TNF -α可能在动脉粥样硬化发生过程中的作用。方法 :人巨噬细胞株 2 8SC(由ATCC提供 )。用含有 10 0mg/L青霉素、10 0mg/L链霉素和 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养基于37℃ ,5 %的CO2 中培养。在培养基中加入终浓度为 15 0mg/L的ox-LDL ,37℃共育后 ,分别于 0h、3h、6h、12h、2 4h、36h收集细胞 ,分别为对照组、ox -LDL 3、ox -LDL 6、ox …     

p38蛋白激酶对大鼠肺泡巨噬细胞活化机制的调控

目的:探讨p38蛋白激酶对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞激活机制的作用。方法:提取细胞核蛋白,采用Western印迹分析p38蛋白激酶水平。用放射免疫法检测细胞上清TNF-α、IL-8的含量。结果:LPS显著增加肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-8的合成,呈剂量依赖性诱导p38的活化。特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580能显著降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞核蛋白p38的含量及细胞上清TNF-α、IL-8水平。结论:LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子TNF-α、IL-8受p38蛋白激酶调控。     

实验性肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞脂质过氧化先于其细胞因子的释放

目的:动态观察博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化过程中肺泡巨噬细胞(AM)脂质过氧化损伤和抗氧化损伤指标的变化,探讨与其释放肿瘤坏死因子(TNF-α)和血小板源生长因子(PDGF)的关系。方法:分离AM测定其中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;行体外AM纯培养,测定其培养上清中上述两种细胞因子含量。结果:(1)AM中MDA第1d即明显升高,第3d至高峰,急性期过后则逐渐降至正常;而GSH-Px则早期处于极低状态,14d后逐渐恢复近于正常。(2)AM释放上述两种细胞因子于第3d开始明显增高,并呈动态变化。(3)AM脂质过氧化损伤先于其释放TNF-α和PDGF。结论:推测AM脂质过氧化损伤所导致的抗氧化物质缺乏可能对其激活发挥重要作用。     

TNF-α参与消炎痛诱导大鼠胃粘膜损伤机制的探讨

目的：探讨消炎痛诱导大鼠胃粘膜损伤与血浆TNF－α活性的关系。方法与结果：随着消炎痛灌胃剂量的加大,胃粘膜损伤程度、中性粒细胞浸润程度、脂质过氧化程度加重,血浆TNF-α活性升高。预先给予对TNF－α单克隆抗体在抑制20mg/kg消炎痛诱导的血浆TNF－α活性升高,同时胃粘膜损伤程度及中性粒细胞浸润程度下降,但粘膜脂质过氧化改变不明显。结论：在消炎痛损伤胃粘膜过程中血浆TNF－α活性升高,INF－α可能与中性粒细胞的激活、促进其浸润至冒粘膜组织有关。拮抗TNF－α可减轻由消炎痛诱导的实验性胃粘膜损伤。     

高糖及高胰岛素对肺泡巨噬细胞吞噬功能和超微结构的影响

目的和方法:选用正常大鼠肺泡巨噬细胞(AM),在高糖及高糖+高胰岛素环境下培养,用卡介苗(BCG)、干扰素α－2b(IFNα－2b)或两者联合活化,检测其贴壁率、四唑氮兰(NBT)还原功能、NO和TNF-α释放量并观察其超微结构改变。结果:高糖及高糖+高胰岛素环境下活化AM贴壁延迟(P＜0.01),NBT还原功能明显被抑制(P＜0.01);BCG和IFNα-2b+BCG活化AM时,其NO和TNFα释放量均明显低于对照组(P＜0.01);IFNα-2b活化AM时,其NO和TNF-α释放量与对照组无明显差别(P＞0.05);细胞表面伪足减少、变短,胞质内高尔基氏体、粗面内质网减少。结论:在短期内高糖及高糖+高胰岛素环境均抑制AM吞噬功能及改变超微结构,从而使糖尿病个体易发生肺部感染。     

GM-CSF对TNF-α诱导白血病细胞凋亡的抑制作用

通过TNFα以及TNFα+GM-CSF对18例白血病患者髓性白血病细胞凋亡的影响研究,发现加TNFα组凋亡细胞数明显高于TNFα+GM-CSF组,两者比较有显著性差异（P<0.01）。本结果提示TNFα有捉进肿瘤细胞凋亡作用,而 GM-CSF则可抑制这种作用。     

严重烧伤大鼠在体肺泡巨噬细胞CD14的表达调控对内毒素和细胞因子的影响

目的 探讨严重烧伤和内毒素(LPS)对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(CD14)和mRNA基因表达变化的影响,以及抗CD14抗体拮抗前后AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响及调控作用.方法 (1)体内部分:取成年SD大鼠96只,随机分为烧伤组、烧伤对照组、LPS组和LPS对照组,烧伤组和LPS组各42只,两组各分为1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h共7个时相点,每时相点6只大鼠.烧伤对照组和LPS对照组各6只大鼠,只检测一个时相点.烧伤组和LPS组分别在大鼠20%Ⅲ度烧伤和LPS注射后各时相点抽取外周血后立即处死行全肺在体支气管肺泡灌洗(BAL)分离提取相应各组AM.外周血检测外周血LPS浓度,各时相点灌洗提取的AM分别用RT-PCR方法观察相同时相点CD14 mRNA表达、免疫组织化学方法观察蛋白含量变化;(2)体外部分:取成年SD大鼠168只,随机分为烧伤血清组、血清抗体组、LPS组、LPS抗体组,每组42只,每组再分为1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h共7个时相点,每时相点6只大鼠.另设烧伤对照组和LPS对照组,各6只成年SD大鼠.各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗分离AM,并按时相点分别进行体外培养,前四组分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、LPS、LPS+抗体,在以上相同时相点终止培养,RT-PCR、免疫组化及ELISA方法分别检测四组肺泡巨噬细胞在各时相点CD14mRNA表达、蛋白表达及分泌TNF-α和IL-6的变化.结果 (1)体内部分:烧伤组及LPS组注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于相应对照组(P<0.01).在体大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达与烧伤对照组比较均明显增高(P<0.01);(2)体外部分:烧伤血清组与烧伤对照组比较,LPS组和LPS对照组比较发现,烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达均明显增高,AM培养上清中TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P<0.01).以烧伤血清与AM培养1 h后,烧伤血清组培养上清中TNF-α和IL-6浓度即显著增加.与烧伤血清组比较,血清抗体组肺泡巨噬细胞在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).与LPS组比较,LPS抗体组肺泡巨噬细胞在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).结论 严重烧伤后外周血LPS浓度增加,在体肺泡巨噬细胞CD14 mRNA表达显著增加,离体肺泡巨噬细胞CD14 mRNA表达和蛋白表达均显著增加,使LPS对免疫系统的激活作用显著增大,AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,而抗CD14抗体可以明显拮抗AM合成和分泌炎性介质.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

核因子-KB“decoy”寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的：研究核因子-kB“decoy”寡核苷(decoy ODNs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774．1细胞TNF-α和IL-6表达的影响。方法：酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中TNF-α、IL-6含量，半定量盯-PCR观察细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达变化。结果：核因子-KB“decoy”ODNs可降低LPS诱导的J774．1细胞TNF-α和IL-6含量，减少TNF-α及IL-6的表达；对照序列的ODNs和转染剂对TNFα、IL-6无明显影响。结论：核因子-kB“decoy”ODNs可抑制TNF-α和IL-6生成，为急性失控性炎性疾病的防治提供了新思路。     

白藜芦醇甙对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生TNFα和NAG的影响

收集小鼠腹腔巨噬细胞，调整细胞浓度为５×１０￣５／ｍｌ，加入２４孔培养板每孔１ｍｌ，内毒素刺激前后不同时间加入白藜芦醇甙培养，检测上清中肿瘤坏死因子，溶酶体酶（Ｎ－乙酰－β－Ｄ氨基葡萄糖苷酶ＮＡＧ）的变化，结果说明：白藜芦醇甙可减少上清中ＴＮＦ＿α和ＮＡＧ的量，通过此可减少内毒素刺激产生的由ＴＮＦ＿α和ＮＡＧ介导的组织损伤。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549的B细胞淋巴瘤-2相关基因(Bax),探讨Bax在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的Bax小干扰RNA(siRNA)转染入A549细胞,给予10μg/LTNF-α刺激24h,RT-PCR检测bax mRNA的表达,Western blotting和免疫组化检测Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:化学合成的Bax siRNA抑制了A549细胞Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),流式细胞术显示BaxsiRNA组的细胞凋亡率明显低于TNF-α组和阴性对照siRNA组(P0.05)。结论:体外实验证明Bax的高表达在TNF-α诱导A549细胞凋亡中发挥了重要的促凋亡作用,利用RNAi技术沉默Bax基因可以有效抑制由TNF-α介导的A549细胞凋亡。