利拉鲁肽诱导骨髓间充质干细胞定向分化及移植治疗1型糖尿病大鼠的研究

目的 体外研究利拉鲁肽诱导骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）分化为胰岛素分泌细胞（IPCs）,并在体内进一步观察IPCs移植对1型糖尿病（T1DM）大鼠的治疗作用.方法 （1）体外采用密度梯度离心联合差壁培养法分离、纯化大鼠BM-MSCs,进一步分为未诱导组、高糖＋尼克酰胺诱导组、胰高血糖素样肽1（GLP-1）诱导组和利拉鲁肽诱导组;（2）倒置显微镜下观察各组细胞形态变化,双硫腙染色鉴定诱导后细胞,荧光定量PCR检测巢蛋白（Nestin）、胰十二指肠同源盒1（PDX-1）、葡萄糖转运蛋白2（Glut-2）、葡萄糖激酶（GK）、胰岛素和胰高血糖素等基因,细胞免疫荧光检测胰岛素和胰高血糖素等蛋白;（3）将180 ～ 220 g的30只雄性SD大鼠以60 mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素制备T1DM模型,造模成功后按随机数字表法分为对照组（T1DM组,n=8）、未诱导的BM-MSCs移植组（BM-MSCs组,n=9）和经利拉鲁肽诱导的BM-MSCs移植组（LIRA＋ BM-MSCs组,n=9）,给予相应干预8周,待血糖基本稳定后,选取4只正常、同龄、雄性SD大鼠作为对照,行腹腔注射的葡萄糖耐量试验（IPGTT）进一步观察移植后细胞对高糖刺激的反应性.结果 （1）利拉鲁肽诱导后BM-MSCs形态逐渐变圆,呈明显的聚集性生长状态,双硫腙染色为阳性;与高糖＋尼克酰胺诱导组比较,利拉鲁肽诱导组细胞Nestin mRNA表达下调（0.003 8±0.000 4比0.007 5±0.003 0,P＜0.05）,胰岛素（0.000 20±0.000 03比0.000 08±0.000 02）和胰高血糖素（0.001 1±0.0004比0.000 7±0.000 1）等mRNA表达上调（F=7.26、10.06、4.92,均P＜0.05）,PDX-1、Glut-2、GK mRNA表达亦上调;利拉鲁肽诱导组和GLP-1诱导组细胞胰岛素或胰高血糖素蛋白表达均呈阳性.（2）体内实验示,与T1DM组比较,LIRA＋ BM-MSCs组和BM-MSCs组大鼠8周末血糖均明显降低[分别为（28.0±1.2）、（8.9±1.1）、（14.5±0.9）mmol/L,F=719.61,均P＜0.05];IPGTT提示移植IPCs后的大鼠血糖在30 min时升至峰值,150 min时降至空腹水平,血糖变化曲线与正常组类似.结论 体外利拉鲁肽可以在一定程度上促进BM-MSCs分化成为IPCs,且移植后的IPCs能够在体内进一步发挥降糖作用.     

藻酸钠-多聚赖氨酸-藻酸钠微囊化牛视网膜色素上皮细胞多巴胺分泌特性的研究

目的 检测体外培养的牛视网膜色素上皮（RPE）细胞多巴胺分泌特点，并观察多次传代及微囊包裹对细胞存活率和多巴胺分泌的影响。方法 酶消化法原代培养牛RPE细胞。纯化、鉴定后观察细胞的生长曲线。用高压静电成囊装置制备藻酸钠-多聚赖氨酸-藻酸钠（APA）微囊化细胞。台盼蓝染色法检测囊内细胞存活率。高效液相色谱电化学法检测多巴胺含量。结果 生长曲线显示第1～4天为其指数生长期。多巴胺分泌在2h开始检测到，48h达高峰以后缓慢下降并趋稳定。多次传代后多巴胺分泌量差异无统计学意义。微囊化细胞多巴胺分泌量在第1～4天与非微囊化组比较显著降低（P〈0．01），但在第5～8天差异无统计学意义。微囊内细胞总数在观察的21d内逐渐增加，虽然囊内存活率逐渐降低，但囊内活细胞数及多巴胺分泌量在第14、21天趋于稳定。结论 牛RPE细胞体外生长旺盛，易于纯化和传代。它能够持续分泌多巴胺且不受多次传代及微囊包裹的影响。体外培养21d后仍检测到囊内细胞的存活及多巴胺的分泌。牛RPE细胞是一种具有一定前景的帕金森病细胞移植的供体。     

胰腺侧群细胞与胰腺干细胞

胚胎干细胞、间充质干细胞和胰腺干细胞在体外培养条件下都可以被诱导为胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)并试用于实验性糖尿病的治疗,但从胰腺外组织干细胞分化来的IPCs的胰岛素分泌功能较差,使其临床运用前景受到质疑.     

利拉鲁肽在人骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞中的作用

目的 观察利拉鲁肽在入骨髓间充质干细胞( hBM-MSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)方向分化诱导中的作用.方法 采用高糖、尼克酰胺和利拉鲁肽3阶段诱导方案对hBM-MSCs进行定向诱导分化,倒置显微镜下观察诱导过程中细胞的形态学变化,双硫腙染色法鉴定诱导后细胞,Western印迹法检测细胞胰腺十二指肠同源盒基因1( PDX-1)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GK)、胰岛素的蛋白表达,ELISA检测细胞的胰岛素分泌水平.结果 添加10 nmol/L利拉鲁肽作用7d后诱导效率明显增加.诱导过程中细胞形态由长梭形逐渐变为圆形,并聚集生长,至诱导末出现大量圆形葡萄状聚集生长的胰岛样细胞团;双硫腙染色阳性细胞量、细胞PDX-1、GLUT2、GK、胰岛素的蛋白表达、细胞的基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平均逐渐增加(均P＜0.05).结论 在体外,高糖、尼克酰胺联合利拉鲁肽可使hBM -MSCs定向诱导分化为IPCs.     

兔骨髓基质细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的方法

目的 探讨将骨髓基质细胞（MSCs）诱导成为胰岛素分泌细胞（IPCs）的方法。方法 体外培养新西兰兔骨髓及胰腺基质细胞和SD大鼠胰腺基质细胞，利用含有胰腺基质细胞培养基的混合培养基诱导培养MSCs。结果 以兔及SD大鼠胰腺基质细胞培养基均可诱导兔MSCs生成IPCs。结论 兔及SD大鼠的胰腺基质细胞培养基均可将兔MSCs诱导分化为IPCs。     

胰腺干细胞诱导分化后同种移植治疗糖尿病的实验研究

目的 探讨胰腺干细胞体外定向分化潜能,评价诱导分化后细胞同种移植对糖尿病的治疗效果.方法 体外分离、纯化成体Wistar大鼠胰腺干细胞,运用荧光免疫染色法对胰腺干细胞表面进行鉴定,然后在肝细胞生长因子、尼克酰胺等共刺激下诱导细胞定向分化.双硫腙(DTZ)染色对诱导后细胞进行胰岛细胞鉴定,ELISA染色光电酶标记法检测其胰岛素分泌功能.采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立Wistar大鼠糖尿病模型,将40只造模成功的大鼠随机分为胰岛细胞移植组(移植组)和安慰剂注射组(对照组),分别于移植前1 d及移植后1、2、3、4周经尾静脉采血检测血清胰岛素和血糖水平.结果 本实验成功获取成体大鼠胰腺干细胞,细胞表面CK19、Pdx-1和Nestin表达均为阳性.诱导分化后的细胞DTZ染色呈棕红色,在高糖刺激下表达、分泌胰岛素.移植后4周内移植组血清胰岛素水平平均为(11.41±1.52)mU/L,血糖水平平均为(8.22±2.7)mmol/L,对照组分别为(9.30±1.56)mU/L和(12.23±3.8)mmol/L,两组相差显著(P＜0.05).结论 体外分离成体胰腺干细胞可被定向诱导分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛样细胞,同种移植后对糖尿病具有治疗作用.     

干细胞治疗糖尿病：未来可期

干细胞以其自我更新和多向分化的生物学优势, 通过免疫调节功能、组织修复功能及分化功能, 在糖尿病的治疗中展现出良好的应用前景。间充质干细胞移植对1型和2型糖尿病患者有一定疗效, 但临床结果不能令人满意, 需要提高间充质干细胞体内存活时间及疗效。干细胞诱导分化的胰岛素分泌细胞为胰岛衰竭型糖尿病的治疗提供了理想的胰岛细胞补充来源, 但免疫排斥及安全性问题仍是干细胞诱导分化的胰岛素分泌细胞应用中面临的主要问题, 尚需开展临床研究探索其有效性及安全性。     

胰升糖素样肽1和胃泌素协同促进胰岛素分泌细胞分化

目的胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)、胃泌素协同促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转分化的胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法(1)制备IPCs模型:胰十二指肠同源盒1(pancreatic duodenal homeobox 1,Pdx-1)、神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(V-type tendon fibrosarcoma oncogene homolog A,MafA)共转染BMSCs转分化为IPCs;(2)IPCs分为4组:A组,未诱导组;B组,GLP-1诱导组;C组,胃泌素诱导组;D组,GLP-1联合胃泌素诱导组,高糖培养基培养7 d,RT-PCR检测各组胰岛素2(insulin2)、葡萄糖激酶(GK)、巢蛋白(nestin)、胰升糖素(glucagon)及Pdx-1表达水平,ELISA检测各组胰岛素分泌情况。结果在高糖条件下培养7 d,各组IPCs形态出现明显变化,逐渐聚集并形成散在细胞团块,联合诱导组形成大型细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在诱导第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合诱导组升高最为明显(P<0.05);与A组相比,B、D组Insulin2和GK表达明显上调,D组glucagon表达下调,C组Pdx-1表达下调,glucagon表达上调,(P<0.05);与B组相比,C组insulin2表达下调,glucagon表达水平明显上调,D组insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05);与C组相比,D组Pdx-1、insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05)。结论GLP-1和胃泌素通过上调insulin2和GK,下调glucagon协同促进IPCs向胰岛β细胞分化。     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

干细胞及其治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的代谢紊乱性疾病.干细胞具有自我更新和多向分化潜能.来源于成体干细胞和胚胎干细胞的胰岛细胞移植也许是有前途的糖尿病治疗方法.干细胞体外培养时可以自发或诱导分化为胰岛素分泌细胞,部分实验证实移植后的胰岛素分泌细胞可以纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,这一研究为糖尿病细胞替代治疗带来希望.     

肝细胞生长因子及葡萄糖对人胰腺干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响

目的 探讨人胰腺干细胞体外扩增及其向胰岛素分泌细胞分化的影响因素.方法 应用剪碎消化法从孕4～6月龄引产的人胎儿胰腺中获得胰岛组织,选用差速贴壁法从胰岛中分离胰腺干细胞,经扩增后定向诱导成具有胰岛素分泌功能和胰岛样结构的胰岛样细胞团,观察肝细胞生长因子和葡萄糖对胰腺干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化以及胰岛样细胞团胰岛素分泌功能的影响.采用流式细胞仪和免疫组织化学法检测扩增前后nestin阳性细胞和ABCG2阳性细胞.行葡萄糖刺激的胰岛素释放试验,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测每1×105个扩增细胞经定向诱导后形成的胰岛样细胞团释放的胰岛素量,比较肝细胞生长因子和葡萄糖对定向分化的影响.采用单因素方差分析或多样本均数两两比较进行统计学分析.结果 经过15代连续扩增,nestin阳性细胞和ABCG2阳性细胞分别扩增了27.9倍和37.8倍.扩增后的细胞经15 d定向诱导后形成具有胰岛素分泌功能和胰岛样结构的细胞团.葡萄糖刺激的胰岛素分泌试验显示,当诱导培养基中肝细胞生长因子浓度为0、5、10、15μg/L时,5.6 mmol/L葡萄糖刺激后,胰岛素分泌量分别为5.00、12.93、14.91和11.23μU;25.0 mmol/L葡萄糖刺激后,胰岛素分泌量分别为19.91、35.53、47.43和23.33 μU.诱导培养基中的葡萄糖浓度为0、2.8、5.6和11.2 mmol/L时,5.6 mmol/L葡萄糖刺激后,胰岛素分泌量分别为9.07、14.21、6.91和3.53 μU;25.0 mmol/L葡萄糖刺激后,胰岛素分泌量分别为26.64、48.97、37.63和34.20 μU.结论 人胰腺中nestin和ABCG2阳性胰腺干细胞具有很强的体外扩增能力.扩增后的胰腺干细胞仍然具有形成胰岛素分泌细胞的功能,经体外诱导后能形成胰岛样细胞团.在胰腺干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导过程中,适当浓度的肝细胞生长因子和葡萄糖有利于胰岛样细胞团的形成和胰岛素分泌.     

胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的定向分化

在适当的条件下 ,胚胎干细胞可在体外被诱导分化为胰岛素分泌细胞。这一过程包括胚胎干细胞的诱导分化以及分化细胞的筛选和成熟。通过检测胰岛细胞的细胞标志和应用组织化学方法可鉴定胚胎干细胞是否已分化为胰岛素分泌细胞。研究显示 ,来源于小鼠胚胎干细胞的胰岛素分泌细胞可使糖尿病模型动物的血糖恢复到正常水平 ,但在胚胎干细胞进入临床应用之前 ,仍有很多问题需进一步研究加以解决。     

胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的定向分化

在适当的条件下，胚胎干细胞可在体外被诱导分化为胰岛素分泌细胞。这一过程包括胚胎干细胞的诱导分化以及分化细胞的筛选和成熟。通过检测胰岛细胞的细胞标志和应用组织化学方法可鉴定胚胎干细胞是否已分化为胰岛素分泌细胞。研究显示，来源于小鼠胚胎干细胞的胰岛素分泌细胞可使糖尿病模型动物的血糖恢复到正常水平，但在胚胎干细胞进入临床应用之前，仍有很多问题需进一步研究加以解决。     

正常大鼠胰腺上皮细胞来源类胰岛样细胞簇的实验研究

目的 观察大鼠胰腺上皮细胞来源类胰岛样细胞簇的胰岛素分泌功能及移植至糖尿病模型大鼠的效果.方法 将传代培养6个月以上的大鼠胰腺上皮细胞经高糖、10 mmol/L尼克酰胺、10 μg/L肝细胞生长因子和10 μg/L成纤维细胞生长因子分化诱导后,分化成类胰岛样细胞簇,应用双硫腙染色法进行鉴定;应用放射免疫法检测培养液中胰岛素和C肽分泌水平;收集成熟的类胰岛样细胞簇,移植到糖尿病鼠的肾被膜下,检测糖尿病鼠血糖水平.结果 诱导后1周,自单层的扁平上皮细胞以出芽的方式生长出三维的类胰岛样细胞簇,双硫腙染色后呈桔红色.随着类胰岛样细胞簇的成熟和数量的增加,培养液中的胰岛素水平逐渐升高,并对高糖刺激有反应性.移植实验表明大鼠胰腺上皮细胞来源的类胰岛样细胞簇移植可以将糖尿病鼠的血糖从(22.43±0.23)mmol/L～(28.96±1.52)mmol/L逆转至(9.60±0.34)mmol/L～(11.80±0.98)mmol/L之间.结论 大鼠胰腺上皮细胞来源的类胰岛样细胞簇具有胰岛素分泌功能,移植后可以逆转糖尿病大鼠的高血糖状态.