补肾解毒方与健脾解毒方含药血浆对慢性乙肝病毒感染不同免疫状态患者外周血T细胞功能的影响

目的:比较补肾解毒方和健脾解毒方对慢性乙肝病毒(HBV)感染不同免疫状态患者外周血T淋巴细胞(Ts)功能的影响。方法:36例门诊慢性HBV感染患者,根据患者免疫状态分为免疫耐受组(18例)、免疫清除组(18例),另选择10名健康人作健康组。分别采集抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养T细胞,采用大鼠补肾解毒和健脾解毒药物血浆进行干预。检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+以及CD28+分子的表达,观察T细胞培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)的水平。结果:健脾解毒药物血浆与补肾解毒药物血浆干预后CD3+、CD4+、CD8+以及CD28+分子表达率升高,且补肾解毒药物血浆提高CD28+表达率优于健脾解毒药物血浆(P<0.05)。两种含药血浆干预后T细胞分泌的IFN-γ水平较干预前升高,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:补肾解毒方和健脾解毒方都能促进慢性HBV感染患者T细胞功能的恢复,且两种含药血浆对慢性HBV感染免疫耐受期患者T细胞功能的影响更为显著。     

逆转MDR—l基因相关的消化系统肿瘤多药耐药

消化系统恶性肿瘤细胞多药耐药是导致化疗失败的重要原因。多药耐药基因(MDR—1)过度表达P—糖蛋白(p-gp)是产生耐药的主要机制。逆转MDR—l基因相关的消化系统肿瘤多药耐药，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的方式有两类：一是直接抑制p-gp的药泵功能；二是干扰MDR—l基因的表达。     

携多药耐药基因1反义RNA重组腺病毒逆转肝癌多药耐药细胞的实验研究

目的探讨携带多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)反义RNA重组腺病毒载体在裸鼠体内逆转肝癌多药耐药细胞HepG2/阿霉素(adriamycin,ADM)的疗效及作用机制。方法构建携带AFP和asmdr1的重组腺病毒载体Adeno-asmdr1,ADM分级诱导肝癌细胞HepG2为多药耐药细胞HepG2/ADM,建立HepG2/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,Adeno asmdr1局部注射,观察移植瘤的体积、透射电镜检测移植瘤组织细胞凋亡、RT-PCR检测MDR1转录水平,评价Adeno-asmdr1的抗肿瘤活性。结果在Adeno-asmdr1 ADM组,移植瘤体积无增大,而PBS组、ADM组体积明显增大;RT-PCR检测移植瘤细胞1周和4周MDR1 mRNA水平, ADM组无明显变化,Adeno-amdr1 ADM组在4周时MDR1转录水平仅为单纯ADM组的20%,经ADM Adeno-asmdr1处理组,可见凋亡增加,ADM组和PBS处理组的裸鼠移植瘤组织中出现少量或没有凋亡。结论携带MDR1反义RNA重组腺病毒部分逆转HepG2/ADM的多药耐药,阻止肿瘤生长,下调MDR1转录水平,导致肿瘤细胞凋亡。     

疏肝健脾化瘀解毒方治疗肝硬化活动期30例

慢性肝病是临床常见病,约有2 0 %～40 %最终将发展为肝硬化或肝癌。及时阻断肝纤维化的进程是目前研究的热点之一。疏肝健脾化瘀解毒方是我们既往治疗慢性肝病的有效方剂,本研究旨在通过本方对肝硬化活动期患者的治疗,观察评价其在抗肝纤维化方面的作用。1　资料与方法1 .1　病例选择:所选择的5 0例肝硬化活动期患者均符合2 0 0 0年中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学会联合制定的诊断标准。男32例,女1 8例;年龄1 8～67岁,平均( 32 .4±1 3.2 )岁。随机分为治疗组30例,对照组2 0例,两组在性别、年龄、病程及病情等方面差异均无显著性意…     

健脾理气方对小鼠HAC肝癌细胞凋亡和bax基因蛋白表达影响的实验研究

目的探讨健脾理气方对HAC肝癌细胞凋亡及bax基因蛋白表达的影响.方法建立小鼠HAC肝癌荷瘤模型,随机分3组,称瘤重,计算抑瘤率.用TUNEL法和电镜检测肿瘤细胞凋亡,用免疫组化法检测bax基因蛋白表达水平.结果中药组和化疗组瘤重均低于对照组(P＜0.01),抑瘤率分别为41.6%和43.0%.其凋亡指数较对照组明显升高(P＜0.01).电镜检测发现凋亡细胞发生特征性形态学改变.对照组bax基因蛋白无强阳性表达,中药组和化疗组均强阳性.结论健脾理气方能诱导HAC肝癌细胞凋亡并上调肿瘤细胞bax基因蛋白表达,可能是该方抗癌机制之一.     

多药耐药基因与溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(UC) 的病因和发病机制尚不明确. 针对MDR1 基因敲除小鼠易发UC;MDR1 发生C3435T 基因变异在UC 患者的发生率显著高于正常人;C3435T 基因变异可导致P糖蛋白(P-gp) 表达下降;而在激素耐药的UC 患者其外周血淋巴细胞及肠黏膜上皮细胞P-gp 的表达量较药物敏感者及正常对照组高等现象,提出MDR1 基因多态性可能和UC 的发生、发展以及激素的治疗反应有关的假说,但也有不同的结论.     

化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗乙型肝炎肝硬化结节的临床观察

目的:观察化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗乙型肝炎肝硬化结节(脾虚血瘀兼湿热证)的有效性及安全性。方法:将82例符合脾虚血瘀兼湿热证的乙型肝炎肝硬化结节患者随机分为治疗组和对照组,每组41例。对照组患者采用基础治疗(保肝、抗病毒等);治疗组患者在对照组治疗的基础上加用中药(化瘀解毒健脾方)内服及外敷(穴位贴敷)治疗,疗程6个月。观察治疗前后患者肝脏结节的MR影像学表现、中医症状评分、肝功能、T细胞亚群等指标的变化。结果:治疗后,治疗组及对照组患者的有效加稳定率分别为88.6%、68.03%,差异有统计学意义(χ^2=4.471,P=0.034),两组患者肝硬化结节最大直径治疗后均无明显变化。治疗后两组患者的CD4^+及CD8^+T淋巴细胞水平均较前提高,且治疗组患者改善更明显(P<0.05)。治疗后两组患者的TBil、ALT及AST水平下降,Alb水平较前上升(P<0.05),除ALT、AST两项指标外,治疗组患者肝功能改善情况更佳(P<0.05)。两组患者治疗后4项中医症状均较前下降;除胁肋疼痛治疗组患者无明显优势外(P>0.05),余3项均优于对照组(P<0.05)。治疗组及对照组患者总有效率分别为85.70%、65.90%,治疗组患者疗效更显著(χ^2=3.972,P=0.045)。结论:化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗能延缓或部分逆转乙型肝炎肝硬化结节的进展,改善中医症状和肝功能,调节患者免疫功能,无明显不良反应。     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肝癌细胞耐药的研究

目的 观察反义硫代磷酸酯寡核昔酸(AsODN)联合逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的作用。 方法 用人工合成互补于MDR1基因及MRP基因的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以脂质体作载体,转染入耐阿霉素(ADM)肝癌细胞SMMC-7721/ADM,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞对化学疗法药物的敏感性,流式细胞仪分析细胞相对荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rhdaming123(Rh123)及柔红霉素(DNR)潴留以反映蛋白质p170和p190功能。 结果 ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度增加细胞对ADM(47.8倍)和DNR(21.6倍)的敏感性。ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,与单独任一种ASODN转染相比,对p170或p190表达的抑制并不增加(q值分别为3.23、3.24,P>0.05)。 结论 针对MDR1 MRP的ASODN联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度逆转肝癌细胞的耐药性。     

解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生Thbs1基因甲基化的作用

目的:观察解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠血小板反应蛋白1基因(thrombospondin 1,Thbs1)甲基化状态的影响,并探讨解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生的可能机制.方法:将实验性胃黏膜异型增生病变模型大鼠分为:模型对照组(model control group,M G)、阳性对照组(positive control group,PCG)-西药维甲酸治疗组、解毒化瘀健脾方治疗组(Jiedu Huayu Jianpi Fang treatment group,A),并以健康大鼠为对照组(control group,CG),进行相应的药物干预;取胃黏膜组织,应用甲基化特异PCR技术检测Thbs1基因甲基化状态;HE染色观察各处理组胃黏膜组织结构变化差异.结果:CG组10只健康大鼠胃黏膜经检测Thbs1基因均未发生甲基化,胃黏膜异型增生MG组大鼠T h b s1基因的甲基化阳性检出率为33.33%(6/18);PCG组-西药维甲酸组同正常大鼠相同,Thbs1基因甲基化检出率为0.00%;A组治疗大鼠Thbs1基因甲基化比率(20.00%),相比MG组显著降低(P=0.0198).HE染色结果显示MG、PCG、A组呈现中轻度胃黏膜异型增生症状,经治疗后PCG、A组异型增生趋于正常.结论:解毒化瘀健脾方对发生异型增生的胃黏膜组织Thbs1基因具有显著地去甲基化作用.解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生可能与该药物使Thbs1基因甲基化程度显著降低有关.     

大肠癌多药耐药性的逆转

大肠癌化疗失败的主要原因是肿瘤细胞对分子结构不同、作用机制各异的抗肿瘤药物产生交叉耐药,即多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的产生。其形成机制复杂,主要包括多药耐药基因(mdrl基因)及其编码的P-糖蛋白过度表达;谷胱甘肽及相关酶的改变;拓扑异构酶II(TopoII)的改变;DNA损伤修复能力增强;多药耐药相关蛋白(multidrug     

缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的研究缺氧对化疗药物敏感性的影响及药物转运蛋白和凋亡相关蛋白的变化,探讨缺氧条件下胃癌细胞发生多药耐药的机制。方法通过MTT比色法检测胃癌细胞SGC7901在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;利用Annexin V/PI染色法检测缺氧对化疗药物诱导的凋亡的影响;利用阿霉素的蓄积和潴留实验检测缺氧与常氧条件下胃癌细胞SGC7901阿霉素的潴留和蓄积的差异;利用Western blot和RT-PCR方法检测不同时间缺氧处理胃癌细胞SGC7901中药物转运蛋白p-gp和MRP的变化以及凋亡相关分子Bcl-2和Bax的变化。结果缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,并能够降低化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调MDR1和MRP1基因的表达以及增加其产物p-gp和MRP的蛋白水平;缺氧能够显著增加抗凋亡分子Bcl-2 mRNA和蛋白水平以及降低促凋亡分子Bax的表达。结论缺氧加剧胃癌细胞的多药耐药表型,其主要是通过上调药物转运蛋白的表达及增加抗凋亡分子Bcl-2/Bax的比例实现的。     

多药耐药基因在进展期大肠癌中检测及意义

大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在消化道较高．进展期大肠癌根治性效果差,手术切除率只有５０％左右,大部分进展期大肠癌术后发生腹腔内复发转移,５ａ生存率只有２３％～３０％．近年腹腔热灌注化疗［１３］引起国内外学者广泛的关注,对术后腹腔内...     

结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr的建立及其耐药相关基因的表达

目的 建立结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr并研究其耐药机制。方法 采用阿霉素浓度递增法，建立人结肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr，观察其生长规律；用MTT法鉴定耐药细胞株的耐药性；以流式细胞检测其周围分布；用RT－PCR方法检测耐药相关基因mdr1,MRP,GST-π及TopoⅡmRNA水平在诱导耐药过程中的变化；采用免疫组化法检测P-gp的表达。结果 LoVo/Adr细胞与LoVo细胞相比，生长缓慢，倍增时间延长，细胞形态较不规则，S期细胞减少，而G1，G24期增多P－gp染色阳性。LoVo/Adr对阿霉素，长春新碱，丝裂霉素，环磷酰胺和5－FU耐药倍数分别是61倍，14倍，3倍，9倍和1倍。亲本LoVo细胞mdr1不表达随着阿霉素诱导mdr1 mRNA水平逐渐增高，GST－πmRNA在诱导初期显著增高，但不随着对阿霉素耐受浓度增加而升高；ToopⅡmRNA水平一直无显著变化；未测到MRP的表达。结论 耐药株LoVo/Adr是一个表达MDR表型的多药耐药模型，主要由mdr1和GST－π基因介导耐药，与TopoⅡ和MRP基因无关。     

丁硫氨酸硫酸亚胺逆转人结肠癌细胞多药耐药的机制

目的探讨丁硫氨酸硫酸亚胺(BSO)逆转人结肠癌LoVo／Adr细胞多药耐药性的可行性,并初步探讨其逆转机制。方法MTT法检测BSO对多药耐药LoVo／Adr细胞抗癌药物敏感性的影响; RT-PCR法检测细胞中多药耐药1(mdr1)基因及谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-πmRNA水平;免疫组化染色检测GST-π蛋白水平;1氯-2,4-二硝基苯法测定GST活性。结果BSO作用后亲本LoVo细胞中阿霉素、丝裂霉素的IC50无显著变化,而在LoVo／Adr细胞中,阿霉素的IC50由(3．08±0．84)mg／L降至(1.31±0．53)mg／L(t=3．09,P<0．05),丝裂霉素的IC50由(1．24±0．45)mg／L降至(0．54±0．32)mg/L(t=165．50,P<0.01);BSO对mdr1基因mRNA水平无影响,BSO作用前后GST-πmRNA表达量分别为1．75±0.24和0．84±0．19(t=5．11,P<0．05),BSO作用后LoVo／Adr细胞GST-π蛋白表达显著低于处理前;BSO处理前后LoVo／Adr细胞GST活性分别为(144．26±50．13)和(129.58±41．36)U／mg(t=0,57,P>0．05)。结论BSO可有效增强人结肠癌耐药细胞LoVo／Adr对阿霉素、丝裂霉素的敏感性,具有逆转作用,其机制与mdr1基因无关,但与GST-π基因下调有关,可能是通过降低细胞内GST-π含量,增强对化疗药物的敏感性。     

耐药细胞中的超氧化物歧化酶及其作用

目的 搪塞二乙基二硫代氨基钠（ＤＤＣ０对耐药胃癌细胞的作用及可能的机理。方法 应用ＭＴＴ方法,化学发光法测定ＳＯＤ活性以及流式细胞仪检测细胞内药物浓度。结果 ＤＤＣ与阿霉素共同应用可明显抑制耐药细胞及药敏肿瘤细胞的生长。在ＤＤＣ组,ａｄｒ对ＳＧＣ７９０／ＷＴ的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为０．７９μｇ／ｍｌ,在同 组中,ａｄｒ对ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ的ＩＣ５０为０．３２μｇ／ｍｌ。流式细胞不证实     

Retrovirus-mediated transfer of the multidrug resistance gene into human haemopoietic progenitor cells

Summary. We report the utilization of cord blood (CB) or bone marrow (BM) derived low density or purified CD34⁺ cells as a target for human multidrug resistance (MDR1) gene transfer, Cells were cocultivated for 48 h with an irradiated MDR1 retroviral producer line. Since some degree of MDR1 gene expression has been reported to occur in haemopoietic progenitor cells and in peripheral blood cells, effciency of MDR1 gene transfer was assessed by: (1) Drug selection and culture in presence of 50 ng/ml doxorubicin, 10 ng/ml colchicine and 0.85 μg/ml taxol. In uninfected control, 1–2% of CFU-GM and CFU-GEMM were found to be drug-resistant, while 14–31% of original clonogenic activity was found after 2 weeks of culture of transduced cells. Efficiency of MDR1 transfer was significantly enhanced by prestimulation with cytokines, and found to be significantly superior in CB-derived compared to BM-derived progenitors. (2) Analysis of MDR1 gene expression by evaluating MDR1 mRNA through polymerase chain reaction. MDR1 expression was very low in cultures of uninfected controls, whereas, after drug selection, MDR1 mRNA levels in transduced cells was as high as in the MDR1 retroviral producer line (positive controls). (3) Flow cytometiric analysis of the expression of CD34 and P-glycoprotein, the product of the MDR1 gene. After MDR1 transduction and 2 weeks of culture, membrane expression of P-glycoprotien, was found on 17–25% of viable CD34⁺ cells. (4) Cytochemical localization by APAAP staining of P-glycoprotein. No specific localization was found in untransduced controls, whereas transduced and cultured CB-cells expressed P-glycoprotein on plasma and nuclei membrane. In conclusion, MDR1 gene transfer into CB- and BM-derived progenitor cells seems a feasible and attractive approach to generate a drug-resistant haemopoiesis.     

Reversing multidrug resistance by RNA interference through the suppression of MDR1 gene in human hepatoma cells

AIM: To reverse the multidrug resistance (MDR) by RNA interference (RNAi)-mediated MDR1 suppression in hep-atoma cells. METHODS: For reversing MDR by RNAi technology, two different short hairpin RNAs (shRNAs) were designed and constructed into pGenSil-1 plasmid, respectively. They were then transfected into a highly adriamycin-resistant HepG2 hepatoma cell line (HepG2/ADM). The RNAi effect on MDR was evaluated by real-time PCR, cell cytotoxicity assay and rhodamine 123 (Rhl23) efflux assy. RESULTS: The stably-transfected clones showed various degrees of reversal of MDR phenotype. Surprisingly, the MDR phenotype was completely reversed in two transfected clones. CONCLUSION: MDR can be reversed by the shRNA-mediated MDRI suppression in HepG2/ADM cells, which provides a valuable clue to make multidrug-resistant hepatoma cells sensitive to anti-cancer drugs.     

肺癌多药耐药机制的研究进展

肺癌化疗失败的主要原因是肿瘤细胞多药耐药（MDR）的产生。肺癌MDR的机制十分广泛,其中以ATP结合盒结构超家族成员参与耐药机制的研究较多。本文重点综述目前研究较多的P一糖蛋白、多药耐药相关蛋白、肺耐药相关蛋白和乳腺癌耐药蛋白与肺癌MDR的关系,并对其他肺癌MDR的发生机制如肿瘤细胞内解毒物质作用增强、药物作用靶点减少、DNA损伤修复功能增强及凋亡与抗凋亡机制的失衡作一简要介绍。