瘦素对血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响及阿托伐他汀对其的干预简

目的 探讨瘦素对血管内皮细胞（vascular endothelial cells,VECs）肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达的影响及阿托伐他汀对其的干预作用.方法 采用原代细胞培养方法建立大鼠VECs细胞模型;100 ng/mL瘦素刺激内皮细胞0、1、3、6、12 h;10 μmol/L阿托伐他汀干预细胞0、1、3、6、12、24 h,再用100 ng/mL瘦素干预细胞6h.运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定各组细胞上清液TNF-α表达浓度.结果 瘦素刺激组TNF-α表达高于对照组,且随着瘦素作用时间延长,TNF-α表达也随之增加.阿托伐他汀组TNF-α的表达低于对照组,且随着阿托伐他汀作用时间的延长,TNF-α表达也随之降低,24 h抑制作用最明显.结论 瘦素时间依赖性诱导血管内皮细胞TNF-α的表达,阿托伐他汀可以减弱瘦素诱导的TNF-α的表达.     

黄芩苷对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞的保护作用。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(EAhy926)分成对照组、ox-LDL组、黄芩苷组和不同浓度的黄芩苷(25、50和100 mg/L)+ox-LDL组,培养24 h。采用CCK-8检测细胞活力,ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果与ox-LDL组相比,50、100 mg/L黄芩苷+ox-LDL组细胞存活率明显升高(P0.05),细胞培养上清中TNF-α和IL-6水平均明显下降(P0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P0.05)。结论黄芩苷对预防内皮细胞损伤的保护功能可能是通过抑制炎症因子,减少细胞凋亡,增强细胞活性实现的。     

TNF-α对培养的人肝星状细胞表达MMPs和IL-8的影响

了解TNF-α对人肝星状细胞表达MMPs和IL-8的影响。用TNF-α刺激培养的hHSC,用ELISA检测不同时间培养上清中的MMPs和IL-8的浓度。结果显示受TNF-α刺激后,MMP-1、MMP-2和IL-8水平为28h>24h>20h>4h—16h(P<0.05~0.001);MMP-3为28h>24h(P<0.01),24h>20h>4h—16h(P<0.05)。TNF-α刺激后MMP-1和MMP-2产生较早,从8h起已高于对照组(P<0.05),而MMP-3的平均浓度,从20h起才高于对照组(P<0.01)。提示TNF-α可刺激hHSC表达MMP-1、MMP-2、MMP-3和IL-8,其表达水平随刺激时间的延长而逐渐增加;未受TNF-α刺激的hHSC可表达一定量的MMPs,基本不表达IL-8。     

LncRNA TUG1在血管内皮细胞功能紊乱中的作用研究

目的探讨lncRNA TUG1(taurine up-regulated 1)与冠心病的关系,研究TUG1对脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能的影响。方法采用real-time PCR检测冠心病病例对照外周血单个核细胞(PBMCs)中TUG1的表达。利用siRNA敲低HUVECs内TUG1表达水平,并检测对细胞凋亡及IL-8表达水平的影响。建立并应用低氧和TNF-α刺激的内皮细胞损伤模型,探讨TUG1在内皮细胞功能紊乱中的作用。结果冠心病患者PBMCs样本中TUG1表达显著高于对照组(P0.001)。敲低TUG1显著抑制正常培养及低氧或TNF-α刺激诱导的内皮细胞凋亡(P0.05)。敲低TUG1并予以低氧或TNF-α刺激,IL-8的表达明显下降(P0.001)。结论 LncRNA TUG1在冠心病患者中出现异常高表达。体外实验结果显示,敲低TUG1能抑制内皮细胞凋亡,降低IL-8的表达水平。提示TUG1可能影响血管内皮细胞功能,参与冠心病的发生发展过程。     

TLR4介导汉滩病毒引起血管内皮细胞分泌IL-6和TNF-α

目的检测汉滩病毒感染血管内皮细胞后IL-6,IL-8和TNF-α的分泌变化及其与TLR4的关系。方法用5LgTCID50/mL的HTNV76-1180.2mL感染EVC-304细胞(TLR4+)和EVC-304TS4(TLR4-)分别为实验组,以病毒未感染为阴性对照组,以LPS(2μg/mL)刺激作为阳性对照。48h后取细胞培养上清,用人IL-6,IL-8和TNF-α定量EIA试剂盒分别检测IL-6,IL-8和TNF-α在两个细胞系感染前后的分泌水平。结果IL-8在两个细胞系中感染前后的变化不明显,IL-6和TNF-α在EVC-304细胞系中,HTNV感染后升高,而在TLR4表达阴性的EVC-304细胞中,感染前后变化不明显。结论在TLR4表达阳性的EVC-304细胞中IL-6和TNF-α分泌增加,血管内皮细胞EVC-304在HTNV感染后的IL-6和TNF-α分泌可能是TLR4介导的。     

沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响

目的探讨沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并分为对照组、ox-LDL组、沙格列汀组、沙格列汀+miR-590抑制物组、NC模拟物组、miR-590模拟物组、NC抑制物组、miR-590抑制物组。检测细胞的增殖活力、细胞中miR-590/TLR4/NF-κB表达量及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量。结果 ox-LDL组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于对照组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于对照组;沙格列汀组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于ox-LDL组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显高于ox-LDL组;沙格列汀+miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于沙格列汀组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于沙格列汀组;miR-590模拟物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于NC模拟物组,miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于NC抑制物组。结论沙格列汀能够通过miR-590/TLR4/NF-κB通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。     

P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞株进行复苏及传代培养,分为空白对照组、低氧组(低氧6 h、12 h、24 h)、肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激组(用10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的TNF-α进行刺激)、模型组(低氧24 h+TNF-α100 ng/ml联合刺激)及通路阻断剂组(加入通路阻断剂SB203580进行干预)。Western-blot法分析各组细胞中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达,流式细胞术分析各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活力,流式细胞术和TUNEL法联合检测细胞凋亡。结果与空白对照组相比,模型组p-P38MAPK表达升高(P0.05)。与低氧组(24 h)、TNF-α刺激组(100 ng/ml)相比,模型组(低氧24 h+TNF-α100ng/ml联合刺激)细胞活力均下降(P均0.01);与模型组相比,通路阻断剂组细胞Caspase-3活力下降(P0.01)。与模型组相比,通路阻断剂组细胞凋亡率及凋亡指数均下降(P0.01)。结论 P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导的人肺微血管内皮细胞中具有促凋亡作用,P38MAPK通路阻断剂对低氧及炎症联合刺激损伤的人肺微血管内皮细胞具有保护作用。     

血肿穿刺清除术对大鼠脑出血灶周组织中IL-6、TNF-α表达的影响

目的观察血肿穿刺清除术对大鼠脑出血灶周组织中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法将90只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和手术组各30只,模型组和手术组采用自体不凝血注入大鼠尾状核的方法制备大鼠脑出血模型,对照组注射等量生理盐水;在建模后6、12、24、48、72 h,手术组行血肿穿刺清除术(每次6只)。手术组在术后4 h、对照组和模型组在建模后6、12、24、48、72 h断头处死大鼠各6只,取尾状核平面切片,采用免疫组化SP法测定脑出血灶周组织中的IL-6、TNF-α。结果与对照组比较,模型组和手术组脑出血后6 h,大鼠脑出血灶周组织中TNF-α、IL-6阳性表达细胞数增加,分别于24、72 h达高峰(P均<0.05)。手术组大鼠脑出血灶周组织中IL-6、TNF-α阳性表达细胞数少于同时点的模型组、多于同时点的对照组(P均<0.05),且造模后6 h手术的大鼠脑出血灶周组织中TNF-α、IL-6阳性表达细胞数均较其他时点手术的大鼠少(P均<0.05)。结论血肿穿刺清除术可减少大鼠脑出血灶周组织中IL-6、TNF-α的表达,其中出血后6 h行血肿清除术的大鼠脑出血灶周组织中IL-6、TNF-α的表达最少。     

丹参对兔重症急性胰腺炎早期中性粒细胞与内皮细胞粘附机制的研究

目的:研究丹参对兔重症急性胰腺炎(SAP)早期中性粒细胞(PMN)与内皮细胞(EC)粘附作用及对血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:将日本大耳兔24只建立兔SAP模型,随机分为丹参治疗组和对照组.分别于术前,术后即刻、2、4、8、16 h,取血分离获得PMN.与体外培养的兔血管EC作用测定PMN-EC粘附率,并测定各时点血浆TNF-α值.结果:两组术后即刻粘附率均升高,对照组术后2 h TNF-α开始升高,8 h达高峰,16 h仍高于正常;治疗组2、4、8、16 h各时点的TNF-α的值小于对照组(P<0.05).结论:丹参能降低SAP血浆TNF-α的水平,进而抑制PMN-EC粘附,改善微循环及减轻组织病理损伤.     

微小RNA-126模拟物对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探究微小RNA(miR)-126模拟物在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机进行如下处理:无特殊处理(对照组);加100μg/L TNF-α(TNF-α组);转染Lipofectamine 2000+100μg/L TNF-α(miR-126阴性组);转染miR-126模拟物+100μg/L TNF-α(miR-126模拟物组),每组设置6个重复样品。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-126表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附试验法检测细胞中白细胞介素(IL)6、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测细胞中内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达;双荧光霉素活性实验检测miR-126、HMGB1间的靶向关系。结果与对照组相比,TNF-α组、miR-126阴性组miR-126表达降低,细胞增殖率降低,IL-6、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达升高(均P0.05);与TNF-α组、miR-126阴性组相比,miR-126模拟组miR-126表达升高,细胞增殖率升高,IL-6、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达降低(均P0.05)。与miR-126阴性组+HMGB1 3’非编码区(UTR)-携带野生型(Wt)组相比,miR-126模拟物+HMGB1 3’UTR-Wt组荧光素酶活性降低(0.43±0.05比1.06±0.15,P0.05)。结论 miR-126模拟物可能通过降低炎症反应缓解TNF-α诱导的细胞损伤,实现对血管内皮细胞损伤的保护。     

培菲康对实验性溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、IL-10水平的影响

目的阐明培菲康对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)TNF-α、IL-10水平的影响,寻求UC治疗的有效新途径。方法成年雌性SD大鼠50只,随机分成5组(n=10):正常对照组(G1)、模型对照组(G2)、培菲康治疗组(G3)、奥沙拉嗪治疗组(G4)、培菲康和奥沙拉嗪联合治疗组(G5),经不同处理和治疗后,通过免疫组化染色观测各组大鼠结肠组织中TNF-α(两步法)、IL-10(S-P法)表达情况,通过实时荧光定量PCR分析结肠组织中TNF-α、IL-10mRNA的表达水平。结果G1组各指标显著低于G2组(P0.001),肠组织结构正常;与G2组相比,G3、G4、G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平显著降低(P0.001);与G3或G4组相比,G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平也显著降低(P0.001);G3或G4组之间,TNF-α、IL-10细胞阳性率及TNF-αmRNA水平无差别(P0.05),而G4组IL-10mRNA水平明显低于G3组(P0.001)。结论TNF-α、IL-10在溃疡性结肠炎(UC)的发生、发展过程中起重要作用,培菲康能明显降低该过程中肠组织TNF-α、IL-10的表达水平,可能通过调控这两个细胞因子的表达而发挥疗效。     

重症心脏瓣膜置换术炎性因子改变的临床研究

目的:探讨重症心脏瓣膜病置换术的炎性因子改变和对器官功能的影响。方法:60例首次重症心脏瓣膜病置换术者随机分为乌司他汀组(A组),乌司他汀和抑肽酶组(B组),对照组(C组),各20例。于麻醉诱导前、体外循环(CPB)开始后30min、CPB结束30min及术后24h从中心静脉插管采集血标本,各时点分别测定,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB),并用放免法检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-10(IL-10)血浆水平。结果:乌司他汀组(A组)、乌司他汀和抑肽酶组(B组)、对照组(C组),3组术后ALT、AST、BUN、CR及CK-MB均有升高,但是对照组升高显著,A组和B组比较差异有显著性(P<0.05),A组、B组和对照组比较差异有显著性(P<0.01),TNF-α、IL-6和IL-8水平均比术前明显升高(P<0.05),开放升主动脉后1h达高峰,之后逐渐下降。对照组TNF-α、IL-6及IL-8明显高于诱导前以及相同时点治疗组的水平(P<0.01);CPB结束后30min及24h,3组IL-10水平均明显增高,但治疗组明显高于对照组(P<0.01)。结论:乌司他汀和抑肽酶联合应用能明显降低重症心脏瓣膜病置换术患者血浆TNF-α、IL-6和IL-8水平,同时可促进抑制炎细胞因子(IL-10)的分泌,从而有效降低由CPB引发的炎症反应,促进器官功能的恢复,其保护作用有待进一步研究。     

LPS对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞炎症因子表达的影响——对建立支架内再狭窄炎症细胞模型的探索

目的探索LPS作用不同时间对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)炎症因子表达的影响,为支架置入术后再狭窄炎症细胞活化模型的建立提供实验数据支持。方法体外培养的HCASMC 3~5代,接种于6孔细胞培养板,用不同浓度(0.01,0.1,0.5,1.0,10)μg/ml的LPS作用不同时间(6 h,24 h,48 h),通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中炎症因子白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化。结果对照组只有少量的IL-1β分泌。加入不同浓度LPS刺激后,与对照组比较,干预6 h的各LPS浓度组IL-1β表达量无明显变化,差异无统计学意义(P均0.05)。而干预24 h或48 h的各LPS浓度组与对照组相比IL-1β表达量明显增加,差异有统计学意义(P均0.05)。对照组有少量IL-6分泌。加入不同浓度LPS刺激后,与对照组比较,0.5μg/ml浓度组LPS干预6 h、24 h、48 h均可显著诱导IL-6的表达增加,1μg/ml浓度组则在24 h、48 h刺激条件下表达增加,差异有统计学意义(P均0.05)。对照组有少量TNF-α的分泌,加入LPS干预后,TNF-α的变化趋势与IL-6相一致。结论 0.5μg/ml和1μg/ml浓度的LPS刺激24 h或48 h使HCASMC的IL-6、IL-1β和TNF-α表达增加,可作为构建HCASMC炎症活化模型的参考。     

高渗盐水在颅脑损伤患者手术治疗中的应用

目的：观察高渗盐水（ HS）在颅脑损伤患者手术治疗中的应用效果。方法将20例拟行手术的颅脑损伤患者随机分为观察组和对照组各10例,分别静滴7．5％的HS和甘露醇。记录两组给药前（ T0）、给药后0．5 h （T1）、术毕（T2）的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均动脉压（MAP）、红细胞压积（HCT）、血乳酸（Lac）、血Na^＋、血K^＋及尿量,并采用ELISA法检测两组T0、T1、T2、术后24 h（T3）、术后48 h（T4）的血清白细胞介素-6（IL-6）、IL-8和肿瘤坏死因子α（ TNF-α）。结果两组各时点SBP、DBP、MAP及血Na^＋、K^＋、Lac比较,P均＞0．05。与T0时比较,观察组T1、T2时点及对照组T1时点的HCT降低,P均＜0．05;与观察组比较,对照组T1时点的HCT明显升高,T1、T2时点的尿量增加,P均＜0．05。观察组T1～T4时点血清IL-6、IL-8、TNF-α均低于T0时点,T3、T4时点血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均低于对照组,P均＜0．05。对照组血清IL-6、TNF-α均先降低,后升高。结论颅脑损伤患者术中应用HS可降低血液黏度和炎性因子水平,且无明显利尿作用。     

川芎嗪对缺血性脑损伤大鼠脑匀浆、血清中TNF-α、IL-10水平的影响

目的探讨川芎嗪（TMP）对缺血性脑损伤（HIBD）大鼠的脑保护作用及机制。方法将135只HIBD大鼠随机分为TMP组、生理盐水组、对照组各45只,TMP组腹腔注射30mg／kg的TMP,生理盐水组注射相同剂量生理盐水,对照组不干预。采用ELISA法检测三组0、6、12、24、48h脑匀浆、血清中TNF-α、IL-10水平。结果TMP组、生理盐水组各时点脑匀浆、血清TNF-α、IL-10水平均高于对照组,TMP组均低于生理盐水组,P均〈0．05;各组脑匀浆、血清中TNF-β水平在12h达到最高,脑匀浆中IL-10水平在48h达到最高,血清中24h达到最高。结论TMP具有脑保护作用,其可能机制为降低TNF-α、IL-10水平。     

合并糖尿病的老年患者单肺通气时血清及肺泡灌洗液中炎性因子的变化及乌司他丁的干预效应

目的探讨合并2型糖尿病(T2DM)的老年患者单肺通气时血清及肺泡灌洗液中炎性因子的变化及乌司他丁(UTI)的干预效应。方法 30例接受胸腔镜手术老年患者随机分为糖尿病组(DM组),DM UTI干预组(DM-U组),每组15例。DM-U组在麻醉诱导后静脉泵注5 000 U/kg UTI,DM组静脉给予同容量的生理盐水,观测各组患者在麻醉前(T1)、麻醉后单肺通气前(T2)、手术结束前(T3)、术后24 h(T4)各时点血糖及血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化以及T2、T3时点双肺泡灌洗液中上述炎性因子的变化;比较术后并发症的发生率。结果两组患者T3及T4时点血糖及血清中IL-6、IL-8均较T1时点升高(P0.05),DM-U组T3、T4两个时点血清中的IL-6、IL-8较DM组降低(P0.05);T3时点双肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、TNF-α均较T2时点升高(P0.05),通气侧肺各因子较同时点非通气侧肺明显减低(P0.01),与同时点DM组比较,T3时点双肺泡灌洗液中TNF-α降低(P0.05),但IL-6及IL-8则DM组和DM-U组比较无统计学差异(P0.05)。结论单肺通气时DM患者血清中IL-6、IL-8及肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α均升高,预先静脉给予5 000 U/kg UTI可抑制单肺通气时DM患者血清中IL-6、IL-8及肺泡灌洗液中TNF-α的释放。     

盐酸小檗碱对高糖、高脂联合诱导内皮细胞分泌TNF-α的干预作用

目的 观察盐酸小檗碱(黄连素)对高糖、高脂联合诱导下血管内皮细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的干预作用及对内皮细胞的保护作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,建立Glu+ ox-LDL损伤HUVECs模型.实验分组:对照组:DMEM培养液+l0％胎牛血清;模型组:Glu40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L;黄连素低组:Glu 40 mmol/L+ox-LDL 100 mg/L+黄连素1.25 μg/ml;黄连素中组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素2.5 μg/ml;黄连素高组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素5μg/ml.检测细胞培养液中的内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)和TNF-α水平.结果 细胞增殖率:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L(模型组)培养HUVECs 24 h,与对照组比较细胞存活率降低(P＜0.01),说明造模成功,同时应用1.25 ～5.0 μg/ml黄连素治疗,细胞存活率明显提高(P＜0.01).NO:模型组NO水平显著低于对照组(P＜0.01),黄连素处理组NO水平显著高于模型组,以5μg/ml剂量组作用最显著(P＜0.01).ET-1:模型组ET-1比对照组显著增高(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组明显降低(P＜0.01).TNF-α:对照组与模型组间内皮细胞培养液中TNF-α水平差别有统计学意义(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组内皮细胞培养液中TNF-α水平明显降低(P＜0.01),但仍高于对照组(P＜0.01).结论 黄连素通过调节内皮NO/ET-1平衡、抗炎作用,改善Glu、ox-LDL联合诱导的内皮细胞损伤.     

内质网应激蛋白CHOP-10在缺血缺氧诱导人主动脉内皮细胞损伤中的作用

目的探讨人主动脉内皮细胞(HAEC)在缺血缺氧刺激下内质网应激(ERS)标志蛋白C/EBP同源蛋白10(CHOP-10)的表达变化及意义,并观察阿托伐他汀对上述过程的影响。方法将传代培养的HAEC分为正常对照组、缺血缺氧组、缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组以及缺血缺氧+阿托伐他汀组(0.l mol/L、1.0 mol/L、10.0mol/L),缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组采用CHOP-10 shRNA下调CHOP-10的基因表达;24 h后采用RT-PCR法检测细胞中CHOP-10的基因表达,Western blot法检测CHOP-10、Caspase-3和Caspase-8的蛋白水平;采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;采用CCK8法测定细胞增殖活力。结果与正常对照组相比,HAEC在缺血缺氧损伤时CHOP-10表达明显升高(P0.01),细胞分泌炎性因子IL-6及TNF-α增加(P0.01),凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达增加(P0.01),细胞增殖活力明显下降(P0.01)。阿托伐他汀能呈浓度依赖性地抑制HAEC CHOP-10表达,而缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组或缺血缺氧+阿托伐他汀组,炎性介质IL-6、TNF-α的分泌也相应减少,细胞凋亡下降,增殖活力明显增加(P0.01)。结论缺血缺氧损伤可引起血管内皮细胞发生ERS及炎症反应,导致细胞增殖活力下降,凋亡增加,CHOP-10基因沉默或应用阿托伐他汀干预可减轻缺血缺氧时ERS及炎症反应而对血管内皮细胞产生保护作用。     

血流剪切力对血管内皮细胞过敏毒素C3a受体表达影响的研究

目的:探讨血流剪切力对血管内皮细胞过敏毒素C3a受体(C3aR)、炎症因子及黏附分子表达的影响。方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,利用振荡流(OS)刺激,分别于处理前、处理6小时、12小时、24小时收取细胞,用免疫印迹法检测C3a受体(C3aR)及血管细胞黏附蛋白1(VCAM 1)表达变化;用实时荧光定量检测C3aR、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子1(ICAM 1)及VCAM 1表达。结果:与处理前相比,内皮细胞在振荡流刺激后,C3a受体mRNA水平和蛋白表达均升高,6小时升高最显著分别为:[(1.997±0.3109)vs.(1.000±0.005773),P=0.0423;(2.968±0.2333)vs.(1.007±0.01202),P=0.0009];IL-1β、MCP-1、ICAM1及VCAM 1的mRNA水平均显著高于处理前,6小时达到最高值;TNF-α在刺激24小时后升高最显著(均P<0.05);振荡流刺激内皮细胞后VCAM 1表达上调,在6小时升高最显著(均P<0.05)。结论:血流剪切力可能通过上调血管内皮细胞过敏毒素C3a受体,调节内皮细胞炎症因子及黏附分子表达。     

重症胰腺炎大鼠血清和胰腺组织Ang-Ⅱ、TNF-α、IL-10水平的变化

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清和胰腺组织中血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平的动态变化及相关性。方法:64只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SO组)和SAP组。利用ELISA法检测1、3、6、12 h血清、胰腺组织匀浆中TNF-α、Ang-Ⅱ、IL-10的水平。结果:SAP组血清、胰腺组织中Ang-Ⅱ水平较SO组明显升高(P0.05)。SAP组胰腺组织TNF-α水平明显升高,3 h达到高峰,而血清TNF-α水平1 h明显升高,6 h达高峰,与SO组比较,各时点差异具有统计学意义(P0.05)。SAP组胰腺组织IL-10水平各时点较SO组明显升高(P0.05);血清IL-10 3 h开始升高,12 h达高峰。结论:Ang-Ⅱ、TNF-α、IL-10在SAP大鼠胰腺组织及血清中平行产生,且均明显升高,表明Ang-Ⅱ参与胰腺炎过程,通过打破促/抗炎失衡,进而加重胰腺炎的炎症反应。