真皮多能干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察真皮多能干细胞（dMSCs）移植对脊髓损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：32只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型，并随机分为真皮多能干细胞移植组（A组）及损伤对照组（B组），每组10只大鼠。伤后1w，移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞（dMSCs），而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1d、1w、8w、12w对两组大鼠进行动物行为学（BBB）评分和脊髓诱发电位（SEP和MEP）检测，并于移植后12w进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：BBB评分4w以后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），移植组明显高于对照组（P〈0．05）；SEP和MEP潜伏期和波幅值在8、12w后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后12w，移植组损伤脊髓结构的修复明显优于对照组。结论：移植治疗脊髓损伤，能明显改善其运动功能和神经形态，dMSC对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤的治疗作用

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C，TrkC）基因神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗脊髓损伤的作用。方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、脊髓半切组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋神经营养素（NT）-3局部使用（D）组、转TrkC基WNSCs移植组（E组）和转TrkC基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组），每组10只。脊髓损伤后第9天进行细胞移植。各组大鼠在细胞移植后2个月，行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查以及脊髓运动功能（BBB）评分。结果 细胞移植后2个月SEP和MEP发生潜伏期和峰峰波幅以及右后肢BBB评分的恢复均以下组最佳，与其他各组比较，差异有统计学意义（P＜ 0．05，0．01）。结论在局部给予的NT-3作用下，转TrkC基因NSCs能较好地促进损伤脊髓功能的恢复。     

神经干细胞、丙戊酸联合应用对成鼠脊髓损伤的修复作用

目的观察神经干细胞（NSCs）和丙戊酸（VPA）联合应用对成年大鼠脊髓损伤后的修复作用。方法SD大鼠随机分为单纯损伤组、NSCs移植组和NSCs＋VPA治疗组。采用半切脊髓损伤模型,损伤后进行病理染色和神经诱发电位检测。结果NSCs＋VPA治疗组损伤处空洞闭合情况优于其余两组,移植物和宿主脊髓建立的纤维联系较其余两组多,排列有序。NSCs＋VPA治疗组诱发电位各项指标匀优于其余两组,8周时最显著,其中以运动诱发电位（MEP）的优化最明显。结论NSCs和VPA联合应用对成鼠脊髓损伤具有良好的修复作用。     

大鼠脊髓半切块状缺损模型的建立及科学性评估

目的建立脊髓损伤的半切模型,为科学评价移植物治疗脊髓损伤提供模型。方法通过自行研制的脊髓半切切割刀,半切大鼠腰膨大,形成相同大小的块状缺损,建立半切块状缺损模型,通过BBB评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测来综合评价模型的科学性和稳定性。结果该模型可形成相同大小的块状缺损,伤侧后肢术后1天BBB运动功能评分为(0.50±0.53)分,术后84天为(3.63±0.74)分;术后28天伤侧N1波峰潜时MEP为(30.25±3.04)m s、皮层感觉诱发电位(SEP)为(24.03±3.64)m s,较正常组均有显著延长。结论该脊髓块状缺损模型具可靠性和稳定性,适用于评价移植物治疗脊髓损伤。     

大鼠脊髓横断伤后后肢运动功能恢复的规律

目的：研究大鼠脊髓完全性损伤后后肢运动功能恢复的规律并探讨其机制。方法：15只SD大鼠于T9平面切断脊髓并切除3mm使其完全横断。于伤后1，2，4，6周行后肢运动功能联合评分(CBS)及Basso-Beattle-Bresnahan(BBB)评分。并于伤后6周行组织学、免疫组化、脊髓运动诱发电位(MEP)检测及再次横断实验。结果：伤后后肢运动功能均有不同程度的恢复，4周时恢复速度最明显，6周时BBB最高评分可达12分；MEP的结果与刺激电极的位置有关，刺激电极置于损伤平面以上时，不能引出MEP，而置于损伤平面以下时，可引出正常波形的MEP；损伤平面以上再次横断脊髓对已恢复的后肢运动功能无影响，而损伤平面以下再次横断则致再次完全截瘫；损伤处组织学检查为胶质瘢痕，未见轴索通过，有少量神经丝蛋白200(NF200)阳性纤维，但零星、散乱。结论：大鼠脊髓完全性损伤后，后肢运动功能存在明显的自发性恢复，这种恢复与脊髓下行传导束的修复无关，而是损伤远段脊髓的自主功能。远段脊髓在功能上是一个整体。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能及其运动诱发电位的影响

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能及其运动诱发电位（MEP）的影响。方法：将30只SD雄性大鼠（200－250g)随机分为对照组、等渗盐水（NS）组和GDNF组,每组10只,改良Allen方法致T13段脊髓不完全损伤,蛛网膜下腔分别给予NS或GDNF20μl,伤后1,5h和1,3,5d评定后肢出现运动功能（Salzman评分）和检测MEP。结果：脊髓损伤后后肢运动障碍。MEP波幅（P1－N1峰峰值）降低,潜伏期延长,对照组无变经。伤后1,5h和1,3,5d,NS组波幅分别恢复至伤前的36．7％、38．9％、47．1％、74．1％和92．3％,潜伏期恢复至112．5％、111．2％、111．3％、105．0％及103．5％;伤后5h和1,3dGDNF组波幅恢复明显优于NS组,伤后1,3dGDNF组潜伏期恢复优于NS组（P＜0．05）。伤后1,5h后肢运动功能无恢复,伤后1d开始恢复,伤后3,5d明显恢复,其中GDNF组恢复显著优于NS组（P＜0．01）。结论：GDNF能够早期促进MEP波形的恢复,增强后肢运动功能的恢复;MEP恢复早于后肢运动功能恢复。     

同种胚胎脊髓移植促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能恢复的研究

目的：研究同种胚胎脊髓移植物能够促进脊髓伤后的可塑性代偿，并修复其组织结构及运动功能的可行性．方法：在急性半切洞损伤的成年大鼠脊髓内，植入大鼠胚胎脊髓，术后进行行为观察、ＨＥ染色、尼氏染色、Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色，以及脊髓运动诱发电位检查．结果：８０％的移植物能够存活，并能生长、分化，不同程度地修复宿主脊髓的组织损伤；能明显减少宿主脊髓损伤部位结缔组织、胶质瘢痕形成；诱导宿主未损伤神经元轴突侧支发芽；改善宿主损伤脊髓的神经传导，促进伤后运动功能的恢复．结论：移植同种胚胎脊髓能促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能的恢复     

K506促进神经干细胞移植后损伤脊髓神经传导通路的修复

目的 观察他克莫司(FK506)促进神经干细胞(neural stem cels,NSCs)移植后损伤脊髓神经传导通路修复的作用.方法 显微镜下动脉瘤夹压迫SD大鼠T8脊髓,建立压迫型脊髓损伤动物模型.损伤后7 d按随机数字表法分为三组:对照组,于损伤中心定向注射等渗盐水;细胞移植组,于损伤中心定向注射NSCs;FK506组,于损伤中心定向注射NSCs,同时按1 mg·kg-1·d-1连续7 d腹腔注射FKS06.连续观察1,2,4,8周,通过BBB评分、BDA顺行示踪、体感诱发电位(SEP)与运动诱发电位(MEP)监测,比较观察大鼠脊髓神经传导功能的恢复情况.结果 伤后后肢运动功能均有不同程度的恢复,4周时恢复速度最明显,8周时BBB最高评分可达6分;BDA顺行示踪,FK506组和细胞移植组在1周后有部分神经纤维通过,8周时各组均有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓损伤部位,特别是FK506组可延续至距损伤中心1.7 cm.诱发电位结果显示,FKS06组在2周时SEP的潜伏期即明显缩短(P<0.05).4周后,FK506组MEP潜伏期与各组比较明显缩短(P<0.05),表明应用免疫抑制剂能促进NSCs对损伤脊髓的恢复,缩短SEP和MEP的潜伏期,早期对SEP改善明显,后期对MEP改善明显.结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs后,系统应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经传导功能的恢复.

Abstract：

Objective To observe the effect of tacrolimus(FK506)in promoting repair of the injured spinal cord pathway after neural stem cell transplantation in rats. Methods A neurysm clip was used to compress the T8 spinal cord segment of SD rats under microscope to establish model of spinal cord injury.The rats were randomly divided into three groups seven days after injury,ie,control group (injection of normal saline at the injury center),transplantation group(injection of neural stem cells,NSCs,at the injury center),FK506 group(injection of NSCs at the injury center plus 7 days of intrapernerve conduction was compared by using the Basso-Beatfle-Bresnahan (BBB) scale,BDA tracing,somatosensory evoked potential(SEP)and motor evoked potentials(MEP)monitoring at 1,2,4 and 8weeks. Results The motor function of the hind limb after injury was recovered in various degrees with time,with the most significant recovery at 4 weeks.The BBB score reached 6,the maximum at 8 weeks.BDA tracing showed that some nerve fibers were found crossing the injured center of the spinal cord one week later in FK506 group and cell transplantation group,that BDA-positive labeled corticospinal tract fibets were seen across the injury site in all groups by the end ofthe eight weeks.In the FKS06 group,the regeneration could be observed even as 1.7 cm away from tlle injury center.SEP latency was significantly shorter in the FK506 group after two weeks(P<0.05)and the MEP latency in the FK506 group was shortened significantly at four weeks compared with the other groups(P<0.05),indicating that the immunosuppressants could promote the recovery of the injured spihal cord,shorten the latency of SEP and MEP,improve SEP at early stage and MEP at late stage．Conclusions Systemic application immuno suppressive agents FK506 plays an important role in neuroprotection and neurotrophy,which promotes the repair of the injured spinal cord after neural stem cell transplantation．     

急性脊髓损伤后运动诱发电位与MRI表现相关性研究

目的：研究实验性脊髓急性创伤后动态MR表现和运动诱发电位评分间的相关性。材料和方法：23只家兔建立脊髓液压损伤模型，其中对照组5只，脊髓按不同损伤程度分A、B两纽，各9只．于伤后24h、72h、7d行MRI与运动诱发电位评分。结果：脊髓损伤A组创后24h出现高低混杂信号．MEP未引出且随时间延睫未见恢复；72h出现血肿信号特征．7d创区大部分坏死信号．其功能未见恢复。损伤B组24h见点状水肿信号．MEP潜伏期明显延长．72h-7d范围扩大，MEP表现山脊髓功能部分恢复。结论：脊髓功能的MEP评判准确地提供了量化标准。高场MRI发现72h表现出脊髓血肿的信号提示脊髓功能缺失严重，而72h的点状高信号提示脊髓不完全损伤．并可有恢复。     

多模式神经电生理检测对脊髓手术患者神经功能状态的评估分析及其影响因素

 目的 使用肌电图(electromyography,EMG)、体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)与运动诱发电位(motor evoked potentials,MEP)多模式方法检测手术前后神经系统的多种电生理信号,探讨患者神经功能状态。方法 收集100例患者作为研究对象,术中监测患者双下肢的SEP与MEP情况;术后6个月复查患者EMG。结果 术中SEP波幅与潜伏期在较稳定情况下,MEP监测中42例患者术中的D波波幅发生降低未超过50%,22例患者出现D波波幅突然下降且超过50%。Pearson相关性分析结果表明,术中出血量与SEP及MEP波幅与潜伏期的改变具有相关性。术后复查,各组患者的腓总神经与胫神经的NCV与DL均有显著改善,异常组患者的改善情况明显低于其他四组。结论 使用EMG、SEP与MEP多模式神经电生理检测可以去除干扰因素,为脊髓手术提供客观、有价值的诊疗依据。     

兔坐骨神经挤压伤的MRI与SEP对比研究

目的:探讨磁共振成像和体感诱发电位以及两者结合在坐骨神经急性挤压伤中的诊断价值。方法:24只兔按钳夹力的不同随机分为A、B两组,左后肢为损伤侧,右后肢为对照侧,建立坐骨神经急性挤压伤模型,于伤后1、2、4、8周行MR扫描,同时行双侧体感诱发电位检查。结果:损伤侧24条神经,有23条MR显示异常,诊断正确率95.8%,假阴性率4.17%(1/24);24条损伤侧坐骨神经,有22条SEP显示异常,诊断正确率91.6%,假阴性率8.3%(2/24)。MRI与SEP对神经损伤的正确诊断率无统计学差异(P>0.05)。MRI与SEP结合起来,24条损伤神经均显示异常,诊断正确率100%。结论:MR与SEP检查可无创、准确地判断神经损伤,两者结合可明显提高神经损伤的正确诊断率,重复性好,可作为神经损伤的较好诊断手段。     

低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的效果比较

目的 比较低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的疗效。方法 取45只成年雄性SD大白鼠，随机分为A、B、C、D4组。A、B、C组为实验组，每组10只；D组为供体组，15只，切取双侧坐骨神经15mm作为供神经。A组的供体神经在－196℃下保存3周，37℃生理盐水复温后桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；B组用70％酒精浸泡8小时后，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；C组的供体神经不经任何预处理，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段。术后17周进行电生理测定，光镜观察及移植异体神经中段的轴突计数。结果 A、B实验组的电生理测定及移植神经中段的轴突计数结果无显著性差异，光镜下的形态学变化相似。A、B组与C组、电生理测定与移植体中段轴突计数均有显著性差异。结论 两种预处理方法降低异体神经的抗原性具有相似的近期效果。     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

早期皮瓣修复创面对面神经爆炸性损伤恢复过程的影响

目的 通过伤后早期用皮瓣修复创面，研究促进面神经爆炸伤恢复的方法。方法 麻醉下在离犬面部10cm处放置雷管模拟爆轰波致伤效应，并在雷管爆炸同时，用滑膛枪发射钢珠弹致犬同侧咬肌切线伤以模拟破片致伤。实验组伤后3天，用吻合血管的股薄肌游离皮瓣修复创面；对照组不做早期修复，伤后2周延期局部拉拢缝合。伤后不同时间取材面神经及面神经核进行HE和Nissel's染色，观察面神经轴突和胞体的病理改变及神经传导速度变化。结果 实验组面神经炎症消退较快，神经传导速度；而对照组炎症持续时间长，恢复缓慢。结论 颌面部爆炸伤后早期皮瓣修复创面有利于面神经创伤的恢复。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

坐骨神经损伤修复过程中髓鞘变化的形态学研究

目的：探讨坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，并对髓鞘显示方法的应用价值进行评估。方法：制备大鼠坐骨神经损伤实验模型，采用锇酸染色，改良苏木精染色和镀银染色等三种髓鞘显示方法对伤后30天，90天髓鞘的形态学变化进行比较研究。结果：应用三种方法均观察到伤后两组伤侧坐骨神经髓鞘形态结构同对照侧有明显差别，伤后30天神经髓鞘溃变程度很高；伤后90天，神经髓鞘形态结构接近正常。结论：三种髓鞘显示方法均能反映坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，改良苏木精染色方法是显示髓鞘的形态结构及其与轴突关系的简捷有效的方法，锇酸染色方法不仅适用于显示髓鞘的形态结构，还可进行形态计量分析。     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓病理改变

目的　研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓的病理改变。方法　火器伤组致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 ,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经 ,分别在光电镜下观察伤后 1天、3天 ,1周、2周、4周、12周时腰段脊髓的病理改变。结果　火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化 ,切割伤组则未见这些病理改变。结论　火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重 ,运动神经元存活数量显著减少     

大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞、层粘连蛋白动态变化研究

目的 研究大鼠坐骨神经损伤后的变性以及其再生过程中雪旺细胞（Schwann cell,SC)、层粘连蛋白（laminin,LN)变化规律。方法 用硅胶管桥接大鼠（60只）左侧坐骨神经缺损（缺损长6mm)，分别于伤后3、7、15、30、60、90天用免疫组化方法检测损伤神经近、远端和新生神经中段雪旺细胞，层粘连蛋白的表达。结果 损伤神经近、远SC和LN均于伤后30天达增殖高峰，新生神经中段LN的增殖于伤后60天达高峰，近端SC和LN的数量多于远端，LN在神经损伤区存在明显的浓度梯度。结论 LN的表达依赖于SC的增殖，LN的浓度梯度引导神经生长和雪旺细胞迁移的方向。