绿色荧光蛋白转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的研究

目的： 探讨绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠用作hprt基因突变试验动物模型的可能性。方法：用乙基亚硝基脲 (N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导GFP转基因小鼠和普通小鼠基因突变,比较诱导后两种小鼠的嗜多染红细胞微核率变化情况。再观察GFP小鼠细胞克隆对GFP转基因小鼠hprt基因的DNA和mRNA序列进行验证,并对GFP转基因小鼠hprt突变克隆外显子1和外显子9进行了双向测序。结果：ENU诱导后GFP转基因小鼠和普通小鼠的微核率变化趋势相同。GFP转基因小鼠的微孔培养物比普通小鼠的微孔培养物易于确认,且降低了假阳性率和假阴性率。GFP转基因小鼠的hprt基因是完整的,与普通小鼠相比未见明显差异。GFP转基因小鼠hprt基因6个突变克隆外显子1的序列均与野生型小鼠细胞的序列一致,3个突变克隆外显子9的序列中有2个发生了A∶T→T∶A颠换。结论：ENU诱导的GFP转基因小鼠突变模型良好,GFP转基因小鼠可用作小鼠淋巴细胞hprt基因突变试验的动物模型,准确性高且试验难度低。     

抗突变研究近况

大量研究表明:基因突变在肿瘤形成中起着重要的作用,因此,从某种意义上讲减少人体基因突变率有可能减少肿瘤的形成。目前降低人体突变的途径可有:(1)减少和控制致突变剂进入自然环境;至今,有几百种短期测试被用于检测环境或工业生产中的化学致突变剂,以鉴别出环境致突变     

69. TK基因突变试验-L5178Y细胞与TK6细胞的比较研究

TK基因突变试验是一种国外已广泛使用的体外短期致突变实验，它具有很高的灵敏度，可检出包括点突变、大的缺失、重组、染色体异倍性和其他较大范围基因组改变在内的多种遗传改变。TK基因突变试验采用的靶细胞系主要有小鼠淋巴瘤细胞L5178Y以及人类淋巴母细胞TK6和WTK1等，其基因型均为tk+/-。使用L5178Y细胞的试验（即小鼠淋巴瘤细胞试验）发展较早，已形成一套比较完善的方法。而TK6和WTK1等人类来源的细胞在TK基因突变分析中的应用时间还不长，其方法尚不太成熟且资料有限，但因为来源于人类，在评价受试物对人体的损伤方面意义可能更大。有关小鼠淋巴瘤细胞和人类淋巴母细胞在TK基因突变试验中的灵敏度与特异性方面的比较性研究的报告尚不多见。本研究使用3种常规诱变剂（MMS、EMS、MMC）和一种非诱变剂（KCl），分别采用琼脂平皿法和微孔平板法对两种细胞（L5178Y与TK6）的灵敏度和特异性进行比较研究。研究结果表明，直接比较同一受试物诱发两种细胞的突变频率，TK6细胞显著低于L5178Y细胞。比较两种细胞的相对突变指数时，TK6细胞突变指数显著高于L5178Y细胞。而且TK6细胞在较低浓度的受试物剂量下即可诱发突变频率、突变指数的显著增加。说明TK6细胞在本试验中比L5178Y细胞敏感。两种细胞采用两种方法对4种受试物的致突变性评价结果一致，即3种强致突变剂的检测结果均为阳性；微孔法检测KCl的结果两种细胞均为阳性，而琼脂法的检测结果均为无反应。结论：使用TK6细胞和L5l78Y细胞对4种受试物的检测结果基本一致，但TK6细胞在检测低毒性、低浓度受试物时优于L5178Y细胞。另外，从对人类的实际意义来看，也应推广TK6细胞在TK基因突变分析中的应用。     

TK基因突变试验—L5178Y细胞与TK6细胞的比较研究

TK基因突变试验是一种国外已广泛使用的体外短期致突变实验,它具有很高的灵敏度,可检出包括点突变、大的缺失、重组、染色体异倍性和其他较大范围基因组改变在内的多种遗传改变。TK基因突变试验采用的靶细胞系主要有小鼠淋巴瘤细胞L5178Y以及人类淋巴母细胞TK6和WTK1等,其基因型均为tk^ /-。使用L5178Y细胞的试验（即小鼠淋巴瘤细胞试验）发展较早,已形成一套比较完善的方法。而TK6和WTK1等人类来源的细胞在TK基因突变分析中的应用时间还不长,其方法尚不太成熟且资料有限,但因为来源于人类,在评价受试物对人体的损伤方面意义可能更大。有关小鼠淋巴瘤细胞和人类淋巴母细胞在TK基因突变试验中的灵敏度和特异性方面的比较性研究的报告尚不多见。本研究使用3种常规诱变剂（MMS、EMS、MMC）和一种非诱变剂（KCl）,分别采用琼脂平皿血和微孔平板法对两种细胞（L5178Y与TK6）的灵敏度和特异性进行比较研究。研究结果表明,直接比较同一受试物诱发两种细胞的突变频率,TK6细胞显著低于L5178Y细胞。比较两种细胞的相对突变指数时,TK6细胞突变指数显著高于L5178Y细胞。而且TK6细胞在较低浓度的受试物剂量下即可诱发突变频率、突变指数的显著增加。说明TK6细胞在本试验中比L5178Y细胞敏感。两种细胞采用两种方法对4种受试物的致突变性评价结果一致,即3种强致突变剂的检测结果均为阳性;微孔法检测KCl的结果两种细胞均为阳性,而琼脂法的检测结果均为无反应。结论：使用TK6细胞和L5178Y细胞对4种受试物的检测结果基本一致,但TK6细胞在检测低毒性、低浓度受试物时优于L5178Y细胞。另外,从对人类的实际意义来看,也应推广TK6细胞在TK细胞突变分析中的应用。     

hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估

目的：探讨hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估作用。方法：取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为10～60Gy时的外周静脉血,采用多核细胞法检测hprt基因突变率。结果：在照射累积剂量为30、40和50Gy时,hprt基因突变率在照射后升高,与照射前相比,差别有统计学意义（P〈0.05）。当累积剂量达60 Gy时,hprt基因突变率虽然较照射前升高,但差别无统计学意义（P〉0.05）。在0～40 Gy,hprt基因突变率基本呈线形上升,且突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系（r=0.900,P〈0.05）。回归方程为y=0.459＋0.014x。结论：在累积剂量0～40 Gy范围内,hprt基因突变率在放疗后明显升高,呈现良好的剂量-效应关系,可用于评价放疗造成的损伤,是具有应用潜质的生物剂量计。     

姜黄油抗突变作用机理进一步试验研究

为进一步探讨姜黄油的抗突变作用机理，采用抗突变和致突变同步快速试验法对其做了四种处理方式的试验：Ａ．姜黄油先与已知致突变剂丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）接触，再加入遇到致突变剂即发生突变的指示菌；Ｂ．姜黄油先与上述指示菌接触，用生理盐水（ＮＳ）洗菌，最后加ＭＭＣ；Ｃ．ＭＭＣ先与指示菌接触，用ＮＳ洗菌，最后加姜黄油；Ｄ．姜黄油、ＭＭＣ和指示菌同时混合接触。以上四种方式在３７℃下接触２０ｍｉｎ后分别做试验。结果     

指状青霉提取物诱发E.coli ND-160及K12 infA基因突变

背景与目的:研究指状青霉(Penicillium digitatum)提取物对大肠杆菌菌株的致突变性.材料与方法:采用E.coliND-160菌株回复突变试验、K12infA基因突变试验及其突变序列分析.结果:指状青霉提取物:①可明显地诱导ND-160菌株回复突变;②对K12菌株可诱发其infA基因DNA序列中5个碱基位点突变,且其中1个位点的突变还可导致编码相应氨基酸的改变(Lys→Val).结论:指状青霉对大肠杆菌基因有明显的致突变性.     

一种快速显示抗突变作用机理的试验设计

为建立一种在检测物质的抗突变性的同时能显示出其作用机理的快速试验方法，我们做了 试验设计，预期能揭示出抗突变物是直接灭活致突变剂的细胞外作用不审细胞内的抗突变作用，并区分是保护细胞免受损伤还是促使已突变的细胞ＤＮＡ修复，或具有多种综合作用。该设计的以检测已知抗突变ＶｉｔＣ为例效果良好。     

87. 桑葚等五种可食性中药材的抗突变和致突变性初步试验研究

目的：为筛选有抗突变作用的天然可食性中药材,增加饮食中的抗癌因素,为肿瘤的人群预防提供基础依据,我们在筛选数十种抗突变天然可食性中药材的基础上,又选择了桑葚、葡萄、杏、榆钱及樱桃进行研究。方法：采用抗突变和致突变同步快速试验,试验中以0.05 mg/ml的丝裂霉素C(MMC)为致突变阳性对照剂,100 mg/ml的维生素C(Vit.C）为抗突变阳性对照剂,0.85％的生理盐水为既不致突变也不抗突变的阳性对照剂,并设立平行对照。做了加大鼠肝脏微粒体酶（S9）的试验和不加S9的试验,对每种检品均做重复验证试验。标准试验菌株为大肠杆菌溶源性菌GY5027,该菌遇到致突变剂即发生SOS反应产生噬菌体,对该噬菌体敏感的菌为GY4015,两菌相遇产生噬菌斑,试验前对两菌株进行了鉴定符合其原生物学特性,对受试物进行清洗沥去水滴,用无菌组织研磨器研碎,加生理盐水制成1∶3液汁,加热至95℃ 5 min自然冷却待测。菌种的活化及处理、向半固体培养基中加菌铺皿、各种培养基的配置、检品及对照剂的处理、判断结果的标准等试验程序均按抗突变和致突变同步快速试验方法中的直线加条法常规进行。处理完毕后,置于37℃恒温箱培养,6～12 h内观察结果。加S9的试验在冰盘上低温快速操作,每皿中加0.5 ml的S9混合液,其他操作程序与不加S9试验相同。结果：经过加和不加S9两种试验,结果该5种检品均未发现致突变毒性;桑葚、葡萄、杏和樱桃对MMC引起的致突变性有明显的拮抗作用。结论：该4种天然可食性中药材除原已知的药理作用外,有可能还具有防癌作用,值得进一步验证及研究,榆钱虽未发现抗突变作用,但也证实无诱变毒性,仍可按民间习惯食用。     

桑葚等五种可食性中药材的抗突变和致突变性初步试验研究

目的：为筛选有抗突变作用的天然可食性中药材,增加饮食中的抗癌因素,为肿瘤的人群预防提供基础依据,我们在筛选数十种抗突变天然可食性中药材的基础上,又选择了桑葚、葡萄、杏、榆钱及樱桃进行研究。方法：采用抗突变和致突变同步快速试验,试验中以00.5mg/ml的丝裂霉素C（MMC）为致突变阳性对照剂,100mg/ml的维生素C（Vit.C)为抗突变阳性对照剂,0．85％的生理盐水为既不致突变也不抗突变的阳性对照剂,并设立平行对照。做了加大鼠肝脏微粒体酶（S9）的试验和不加S9的试验,对每种检品均做重复验证试验。标准试验菌株为大肠杆菌溶源性菌GY5027,该菌遇到致突变剂即发生SOS反应产生噬菌体,对该噬菌体敏感的菌为GY4015,两菌相遇产生噬菌斑,试验前对两菌株进行了鉴定符合其原生物学特性,对受试物进行清洗沥去水滴,用无菌组织研磨器研碎,加生理盐水制成1：3液汁,加热至95℃5min自然冷却待测。菌种的活化及处理、向半固体培养基中加菌铺皿、各种培养基的配置、检品及对照剂的处理,判断结果的标准等试验程序均按抗突变和致突变同步快速试验方法中的直线加条法常规进行。处理完毕后,置于37℃恒温箱培养,6－12h内观察结果,加S9的试验在冰盘上低温快速操作,每皿中加0.5ml的S9混合液,其他操作程序与不加S9试验相同。结果：经过加和不加S9两种试验,结果该5种检品均未发现致突变毒性;桑葚、葡萄、杏和樱桃对MMC引起的致突变性有明显的拮抗作用。结论：该4种天然可食性中药材除原已知的药理作用外,有可能还具有防癌作用,值得进一步验证及研究,榆钱虽未发现抗突变作用,但也证实无诱变毒性,仍可按民间习惯食用。     

V79细胞基因突变试验的应用研究

哺乳动物细胞基因突变试验是近年来发展的检测化学物质致突变作用一较为成熟的方法．本文利用中国仓鼠肺V79细胞HGPRT基因位点突变试验对蜂胶的致突变性和有机锗Ge-132的抗突变性进行了初步研究．结果显示：①剂量为2μg／ml、10μg／ml,50μg／ml的蜂胶浸出液无诱变性．②剂量为100μg／ml的Ge-132可抑制丝裂霉素C诱导的V79细胞基因突变,     

RAS基因突变和人类肿瘤的发生

基因突变被认为是生命过程的基本现象已有几十年的历史,它包括染色体重排和基因的点突变,基因的突变可以导致癌基因的扩增、基因表达的变化以及细胞分裂、分化过程的改变,其在肿瘤的发生和发展中起着激发、启动和促进作用。基因突变的机制及其突变与致瘤性之间的关系是当代分子生物学研究的一个重要课题。应用各种致突变剂对原核生物、哺乳类动物进行了研究,阐明了某些突变机制,现在已经找到许多DNA加合物和单碱基替换的关系,并且明确了化学致癌剂可诱导各种动物的肿瘤,这些动物中常有ras家族的癌基因发生突变。至今在哺乳类基因组中     

大黄抗突变作用的研究

本文通过Ａｍｅｓ试验ＴＡ９８、ＴＡ１００菌株和ＳＯＳ反应原噬菌体诱导抗突变和致突变同步试验测试了大黄水溶性提取液的抗突变作用。结果表明大黄在４～４０ｍｇ／皿三个浓度，加或不加Ｓ９试验中对柔毛霉素、２ＡＦ所诱发的ＴＡ９８的突变、对叠氮钠、环磷酰胺所诱发的ＴＡ１００的突变有不同程度的抑制作用，并呈观剂量效应关系。对移码型致突变剂的作用较优。原噬菌体诱导抗突变和致突变同步试验发现大黄对ＭＭＣ诱发的突变也表现出明显的抑制。     

北豆根多糖的致突变性与抗突变性研究

目的 应用Ames试验和小鼠微核试验,研究北豆根多糖在不同剂量下的致突变作用和抗突变作用.方法 Ames试验采用预培养法,微核试验采用连续ip给药11天的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核计数法.结果 北豆根多糖在＜2 000 μg/皿和＜40 mg/kg剂量下,未诱发Ames试验各菌株回变菌落数的增高和微核试验骨髓嗜多染红细胞微核率的增高.Ames试验在北豆根多糖500 μg-1 000 μg/皿浓度范围,可使阳性剂环磷酰胺和丝裂霉素C所诱发的高回变菌落数出现明显降低;微核试验在北豆根多糖20 mg-40 mg/kg剂量范围,可使阳性剂40 mg/kg环磷酰胺或2 mg/kg丝裂霉素C所诱发的高微核率出现明显降低.结论 北豆根多糖不存在基因突变和染色体畸变作用,具有对抗和减轻致突变剂环磷酰胺和丝裂霉素C的抗突变作用.     

铅对果蝇生殖细胞显性致突变性的研究

铅是有毒重金属之一,其对人类生殖的影响早在1980年就有报告。近年来铅的致突变性的问题已引起了人们的重视。已证明铅能聚积在细胞核内,干扰细胞增殖和DNA的合成,影响DNA合成的精确性。能引起果蝇染色体丢失。铅对哺乳动物有显性致死作用。但铅的某些短期致突变实验的结果均为阴性,因此目前关于铅的致突变性的问题尚有争议。一种致突变物往往引起遗传物质的多种损伤,包括点突变和染色体畸变等。传统的显性致死性突变实验主     

番茄红素抗突变作用的实验研究

背景与目的:研究番茄红素对突变剂诱导的遗传损伤的抑制作用。材料与方法:采用修改的小鼠骨髓细胞微核试验和Ames试验:按《食品安全性毒理学评价程序和方法》试验,计数微核数、回复突变菌落数,计算微核率,相对菌落数和抑制率。结果:小鼠骨髓细胞微核试验中预先给予番茄红素的试验组与环磷酰胺阳性组比较微核率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),番茄红素对环磷酰胺诱发小鼠胸骨骨髓微核的抑制率达到59%以上。番茄红素预处理突变剂的Ames试验中TA98、TA100均有相对回变菌落数的减少,与致突变物对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),且呈明显的剂量-反应关系;番茄红素与突变剂同时加入的Ames试验中只有TA98在140μg/皿剂量组有抑制作用。结论:番茄红素能有效抑制突变剂诱导的遗传损伤,具有一定的拮抗突变的作用。     

两种人类淋巴母细胞TK、HPRT基因突变实验比较研究

背景与目的:比较2种人类淋巴细胞在4种受试物作用下TK、HPRT 2个位点突变情况,为其在遗传毒性实验中的应用积累资料.材料与方法:甲磺酸乙酯(ethl methanesulfonate,EMS),甲磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS),乙二醛(glyoxal,GLY),邻苯二胺(o-phenylenediamine,OPD)4种不同化学结构和致突变方式的致突变物作为受试物,采用微孔培养板法比较TK6和TK6-E6细胞在TK和HPRT 2个位点的突变情况.结果:TK6-E6细胞比TK6细胞对4种受试物毒性更为耐受;4种受试物在2种细胞,2个位点突变实验结果均为阳性,以TK6-E6细胞的TK实验最为敏感;TK6的慢生长集落比例(RSC)较TK6-E6低,各受试物间无差别(P＞0.05).结论:TK6-E6和TK6细胞在TK、HPRT 2个位点的基因突变实验中均能检出致突变物;TK6-E6相对于TK6对细胞毒性耐受,可以用于检测更高浓度的受试物,同时有较高的突变敏感性.     

放射治疗对宫颈癌病人DNA损伤及hprt基因突变的初步研究

目的：评价放射治疗对宫颈癌患者造成的遗传学损伤。方法：取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为0Gy、10Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy、60Gy时的外周静脉血,以彗星实验检测淋巴细胞的DNA损伤,采用多核细胞法测hprt基因位点突变率。结果：各累积剂量组淋巴细胞DNA拖尾率比照射前显著升高（P〈0.01）,并且在0-60Gy之间,拖尾率与累积照射剂量之间成线性关系。各累积剂量组尾长比照射前均增加（P〈0.01）,在照射剂量累积30Gy时,尾长均值达最大。尾长与累积剂量间不成线性关系。hprt基因位点突变率在照射后升高,与照射前相比,在照射累积剂量为30Gy、40Gy和50Gy时,显示有统计学意义差别（P〈0.05）。hprt基因突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系。结论：宫颈癌患者放疗后造成外周血淋巴细胞DNA损伤及hprt基因突变,hprt基因突变和彗星实验用于评价放疗造成的损伤,具有较高的敏感性。     

化妆品的致突变和抗突变同步快速试验分析

目的与方法: 为了快速筛选有致突变性的化妆品,采用大肠杆菌溶源性菌GY5027和对噬菌体敏感的指示菌GY4015,对29种化妆品进行致突变和抗突变同步快速试验.同时观察了急性经口试验、急性眼睛刺激试验和急性或多次皮肤刺激试验.结果:在加和不加大鼠肝脏微粒体酶(S-9)条件下,全部样品无抗突变阳性;4种样品呈现致突变阳性,其中2种至少1项急性试验阳性.经SPSS软件作等级相关分析表明,同步试验与急性试验结果相关显著(r-s＝0.392,P=0.036).结论:部分化妆品确实存在致突变性;采用致突变和抗突变同步试验可快速、大量筛选有致突变性的化妆品;急性试验阳性化妆品致突变性也较高.     

Ames实验对叶黄素的致突变性与抗突变性研究

背景与目的研究不同剂量的叶黄素致突变性、抗突变性及抗突变机理的初步分析。材料与方法采用Ames试验常规方法进行检测。结果1335μg/皿、668μg/皿、334μg/皿和167μg/皿剂量的叶黄素对TA97、TA98、TA100和TA102菌株在加与不加S9条件下均无致突变性;对TA98和TA100菌株具有显著的抗突变作用。结论在本实验条件下,叶黄素对Ames试验无致突变性,且有显著的抗突变作用,抗突变的机理为叶黄素具有综合的抗突变作用。