大鼠脑缺血再灌注时脑组织损伤病理改变观察

目的　观察大鼠局部脑缺血再灌注脑组织的病理改变特点。方法　建立鼠脑缺血再灌注模型 ,采用HE染色 ,观察缺血部位、组织学改变、神经功能缺损。采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果　缺血2h后再灌流 1h有梗死灶、1 2h梗死灶面积扩大 ,4 8h神经细胞凋亡最重。结论　神经细胞缺血性损伤与再灌注时间有关。     

大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２ 小时,再灌流０．５～４８ 小时,造成脑缺血再灌流模型（３０ 只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５ 小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细胞,１２小时达高峰,持续到２４ 小时,并可见凋亡细胞各种形态,凋亡细胞主要位于缺血损伤区内界,坏死细胞也增多。４８小时完全坏死区周围有成群的凋亡细胞。电泳显示涂片状背景上有明显的ＤＮＡ带。细胞凋亡参与缺血再灌流所致的神经元损伤,凋亡细胞与坏死细胞并存,细胞凋亡使梗塞区面积扩大。     

大鼠脑缺血再灌流损伤后的组织学观察

目的 :建立一个新的脑缺血再灌流损伤动物模型 ,观察脑组织的形态结构变化 ,为脑缺血再灌流损伤的进一步实验研究提供依据。方法 :结扎大鼠左侧颈总动脉 ,从其右侧颈总动脉向远心端插管放血持续 30min、6 0min、90min和 12 0min ;再从大鼠左侧股静脉插管输血回体内 ,然后解除左侧颈总动脉结扎 ,同时停止放血后观察。结果 :脑组织呈缺血性改变 ,随着缺血时间延长 ,缺血性损害加重 ,再灌后进一步恶化。结论 :该脑缺血模型稳定 ,重复性好 ,不同脑区缺血再灌流神经元损伤呈现不同形态学改变。     

局灶性脑缺血后修复蛋白表达与细胞凋亡影响的实验研究

目的 :研究成年大鼠局灶性脑缺血脑内的增生细胞核抗原 (ProliferatingCellNuclearAntigen ,PCNA)或称修复蛋白表达。方法 :建立大脑中动脉阻塞模型 ,对大鼠局灶性脑缺血缺血 2小时再灌不同时间。检测PCNA的蛋白表达及神经元细胞凋亡 ,观察梗死区面积。结果 :在大脑中动脉阻塞再灌注 12小时单纯缺血组PCNA最高 ,随着再灌注时间的延长 ,表达逐渐下降 ,48小时PCNA少量表达但仍略高于正常对照组。脑细胞凋亡在再灌注 1小时开始出现 ,随着缺血再灌注时间延长 ,凋亡细胞越来越多。TTC染色后可见梗塞区苍白、未染色 ,梗塞区周围染色为紫红色 ,面积约 (1.0× 0 .7)cm2 。结论 :脑缺血PCNA大量表达 ,启动细胞内的DNA修复机制 ,对损伤的DNA进行修复     

大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２小时,再灌流０．５～４８小时,造成脑缺血再灌流模型（３０只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细     

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的保护作用

目的　探讨大鼠脑缺血再灌流后神经元损伤的机制以及藻蓝蛋白对神经元的保护作用。方法　用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌流模型 (MCAO) ,分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分 ,用TTC染色法测量脑梗死体积 ,用干湿重法计算脑的含水量 ,应用原位末端标记 (TUNEL)观察脑缺血再灌流不同时间点神经元凋亡的变化。结果　 (1)在大鼠脑缺血再灌流后 2小时应用藻蓝蛋白 ,能够明显改善神经功能缺失症状 ,脑缺血再灌流后 2 4小时 ,藻蓝蛋白组的Bederson神经功能评分与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,且这种差异一直持续到脑缺血再灌流后 4 8小时。藻蓝蛋白还能够缩小脑梗死的体积 ,脑缺血再灌流后 4 8小时 ,藻蓝蛋白组的脑梗死体积与模型对照组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白还能够减轻脑水肿 ,使脑组织的含水量明显减少。 (2 )模型对照组 ,脑缺血再灌流后凋亡神经元主要分布于缺血周围区 ,随着再灌流时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增加 ,至 2 4小时达高峰 ,2天开始下降 ,14天时与假手术组间差别仍有显著性意义 (P <0 0 5 )。藻蓝蛋白组凋亡细胞的数量相对较少 ,其变化规律与模型对照组相似 ,同一时间点相比较 ,藻蓝蛋白组与模型对照组间差别有显著性意义     

局灶性脑缺血再灌注时胶质细胞源性神经营养因子在大鼠脑组织表达及其意义的实验研究

目的观察胶质细胞源性神经营养因子（glial cell fine-derived neuno-trophic factor,GDNF）在大鼠脑缺血再灌注时的表达特点,及其在脑缺血再灌注中的作用。方法阻断大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery,MCA）血流2h,再灌注3—120h制成脑缺血再灌注模型。苏木精－伊红染色评价缺血性脑损伤的组织学特点,免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色观察GDNF、iNOS表达特点。结果再灌注12h组开始出现神经元不可逆变性,24h梗死形成。正常组和假手术组未检测到GDNF的表达。再灌注3—120h,在整个再灌注过程中GDNF阳性的细胞在3h达到高峰,后逐渐下降,各组与再灌注3h组比较P〈0．01。结论脑缺血后再灌注,变性、死亡的神经元不表达GDNF,缺血周边区和非缺血区神经元GDNF表达明显增强,提示GDNF有促进神经元存活作用。缺血再灌注时活化的小胶质细胞或巨噬细胞可能表达GDNF。为临床早期使用GDNF减少脑损害,提供了一定的参考价值。     

赤土茯苓苷对小鼠海马CA_1区神经元的缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :研究赤土茯苓苷 (Smiglabran,Smi)对小鼠海马 CA1 区神经元的缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用结扎双侧颈总动脉造成小鼠脑缺血再灌注损伤 ,分别观察了不同再灌注时间 (1、3、5 d)小鼠的存活率及海马 CA1 区神经元的普通病理改变 ,同时观察了赤土茯苓苷对上述改变的影响。结果 :Smi10 0、2 0 0 mg/ kg能明显提高脑缺血后再灌流 3d、5 d小鼠的存活率 ,脑缺血再灌注的早期 ,海马 CA1 区神经元数目及形态即发生改变 ,再灌注 5 d时光镜下绝大部分细胞脱失 ,而用药组 (Smi10 0、2 0 0 mg/ kg)小鼠海马 CA1 区神经元在相应时间点上形态数目变化较轻 ,5 d时仍有超过半数以上 (6 8.1%、74.1% )细胞存活 ,细胞密度分别为 (95 .4± 8.0 )个 / 2 mm和 (10 3.8± 3.2 )个 / 2 mm,明显高于缺血对照组 (5 1.8± 7.8)个 / 2 mm,P <0 .0 0 1。结论 :Sm i对小鼠短暂脑缺血再灌注造成的海马 CA1 区神经元的病理损伤具有显著的保护作用     

全身亚低温对脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法 应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)常温组脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24小时达高峰，2天后开始下降，14天时仍高于假手术组；(2)亚低温组脑缺血再灌流后，凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区，数量相对较少，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组；(3)常温组脑缺血再灌流2小时后，神经细胞Caspase-3 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，24小时达高峰，2天后逐渐下降，至14天略高于假手术组；(4)亚低温组脑缺血再灌流后，神经细胞Caspase-3 mRNA的表达也主要位于缺血周围区，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血再灌流后。缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程，Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用，亚低温可能通过Caspase-3 mRNA途径抵抗脑缺血损伤。     

大鼠局灶脑缺血再灌注模型改良后的实验研究

参照ＺｅａＬｏｎｇａ报道的线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌动物模型,并予以改良。结果发现,脑缺血后缺血侧有恒定的梗塞区,缺血侧脑血流量明显下降,脑组织含水量较对侧明显增多,有明显的神经元缺血性损伤改变,再灌注时脑血流量达到并超缺血前水平。     

大脑中动脉缺血再灌注后nNOS的表达

①目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)与脑缺血的关系。②方法 制备Wistar大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用苏木精-伊红染色观察缺血后脑组织的形态学改变，用免疫组织化学法显示nNOS的变化。③结果 缺血再灌注后皮质及壳尾核nNOS免疫阳性神经元细胞表达增多，以再灌注3h最多，6h开始下降。组织学观察可见缺血区内有神经元的变性、肿胀及坏死。④结论 在局灶性脑缺血再灌注早期nNOS表达增多，并可能参与急性期神经毒性作用。     

Apoptosis and necrosis of neuron after focal ischemia in brain of rats]

This article reports the apoptosis and necrosis of neurons following ischemia-reperfusion in the brain of rats. The focal ischemia model was established by occluding the middle cerebral artery for 2 h and reperfusing for 0.5-48 h. The neuronal changes were investigated by HE staining, TUNEL and agarose gel-electrophoresis. The foci of ischemia were in the preoptic area, striatum and cortex. At 0.5 h of reperfusion, there were quite a few apoptotic neurons in the preoptic ischemic focus, but only a few scattered apoptotic cells were seen in the striatum and cortex. During 3-6 h of reperfusion, the number of apoptotic cells increased and the necrotic cells appeared. The number of apoptotic cells reached a peak at 12-24 h and the in morphology varied, and they were mainly located in the inner boundary of infarct. At 48 h, the apoptotic cells decreased; and the necrotic cells increased. Agarose gel-electrophoresis showed the dense smear and ladder pattern of DNA fragments, the apoptosis and necrosis of neurons coexisted, and apoptosis contributed to the enlargement of the ischemic infarct.     

Effects of reperfusion on neuronal changes and macrophagic response after transient focal ischemia--reperfusion of brain in rats]

Male SD rats(n = 29) were subjected to 2 hours' middle cerebral artery occlusion and were killed at various times of reperfusion (0.5-48 hours). The histological features of neuronal changes, the macrophagic response and the relationship between them were investigated. The neurons underwent acute changes(shrinking or swollen), and the pyknotic apoptotic neurons were occasionally seen within 3 hours. The number of apoptotic neurons increased with recirculation time. The scattered red neurons and ghost cells were first found at 6 hours of reperfusion. Many apoptotic neurons, apoptotic bodies were detected in the penumbra of ischemic core at 48 hours. Lectin histochemistry with GSI-B4 was performed to observe the macrophage. The results showed the active microglia and macrophage from meninges presented at 12 hours. The macrophages from parenchyma vessels appeared at 24 hours. Reactive microglia and extrinsic macrophage aggregated into the band of macrophage which phagocytized the apoptotic neurons. The results indicate that, firstly, it is important to prevent the neuronal apoptosis and reduce the volume of infarct in stroke patients; secondly, irreversible neuronal lesions simultaneously stimulate microglial activation and the presence of extrinsic macrophages from meninges was earlier than the appearance of the macrophages from parenchyma blood-monocytes. The authors also suggest that the data on the neuronal changes over time after ischemia and reperfusion be useful reference materials for selecting the most timely medication to treat cerebral infarction.     

脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2和p53 mRNA的表达

①目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞bcl 2和p5 3mRNA表达的变化规律。②方法采用原位杂交技术分别观察缺血 1.5h再灌注后 2h ,6h ,12h ,1d ,2d ,3d ,7d和 14d神经细胞bcl 2 ,p5 3mRNA的表达。③结果　脑缺血再灌注 2h在缺血周围区bcl 2mRNA开始表达 ,1d达高峰 ,之后逐渐减弱 ,14d达接近假手术组水平 ;p5 3mRNA于再灌注 6h出现 ,1～ 2d达高峰 ,7d达假手术组水平。④结论　大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl 2和p5 3mRNA的表达与缺血性损伤有一定关系 ,bcl 2和p5 3mRNA参与了神经细胞凋亡的调节。     

局灶性脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的:探讨局灶性脑缺血预处理在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与一氧化氮(NO)的关系.方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血模型.在此模型上,脑缺血预处理10 min再灌注72 h后,再次脑缺血90 min后再予再灌注24 h,用Bederson神经缺损体征评分法评估大鼠神经功能缺损,用亚硝酸盐还原法测定脑组织中NO的含量.结果:脑缺血90 min再灌注24 h后,脑缺血预处理 脑缺血再灌注组(IP R组)大鼠的神经功能缺损体征明显轻于假脑缺血预处理 脑缺血再灌注组(R组)(P＜0.05);R组和IP R组的缺血侧和自身对照侧皮层、海马的NO含量异常升高,与假脑缺血预处理 假脑缺血再灌注组(S组)相比差异均有统计学意义(P＜0.01);IP R组缺血侧和自身对照侧皮层、海马的NO含量较R组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能是降低了脑组织的NO水平.     

大鼠局灶性脑缺血后再灌流时神经元的改变与巨噬细胞应答

取ＳＤ大鼠２９只，制成大鼠局灶性脑缺血模型，观察再灌流０．５～４８小时时神经元的改变与巨噬细胞应答，并探讨两者间的相互关系。结果：再灌流３小时内，神经元主要表现为收缩或肿胀；再灌流６小时组，有散在的红神经元及鬼影细胞；再灌流４８小时组，缺血半影区有大量的凋亡细胞及凋亡小体。凝集素ＧＳＩ－Ｂ４标记巨噬细胞表明，１２小时时出现小胶质细胞活化及来自脑膜的巨噬细胞，２４小时时出现脑实质内血单核细胞浸润；４８小时时脑内巨噬细胞在缺血半影区大量聚集。上述结果表明：①脑缺血后阻止细胞凋亡和减少脑梗塞体积对脑梗塞患者有极重要的意义；②不可逆的神经元损伤早于小胶质细胞活化，来自脑膜的巨噬细胞早于脑实质血单核细胞浸润。该研究结果也为脑梗塞最佳药物治疗时间的选择提供了参考资料。     

SPECT检查在猪脑缺血可逆时相窗诊断中的价值

①目的 探讨超早期缺血性脑卒中可逆时相窗诊断的有效方法。②方法 将12只猪随机分为阻断组和再灌注组，均用动脉夹夹断单侧颈总动脉。阻断组在第2、4、5、6、8、10小时处死动物；再灌注组在相应时间去除颈总动脉夹形成再灌注脑缺血模型，24h后处死动物。所有动物在处死前均行SPECT显像检查、局部脑血流量测定，并行CT扫描；处死后行脑组织形态学观察。③结果 SPECT检查显示：阻断颈总动脉即刻手术侧脑区出现明显放射性缺损，阻断4h内去除动脉夹者放射性缺损区恢复正常；阻断5h以上者，即使再灌注，放射性缺损区仍存在，并随着阻断时间的延长放射性缺损更加明显。CT显像则在阻断8h后才出现异常。光镜、电镜观察显示，阻断5h以上者阻断侧神经元略有肿胀，出现线粒体肿胀、线粒体嵴减少、胞质减少等病理性改变，少数出现核固缩并随阻断时间延长而逐渐加重；而阻断4h以内去除动脉夹者，脑组织恢复正常。④结论 SPECT检查可超早期发现脑缺血，并提示脑缺血5h就进入不可逆的状态。     

黄芪对大鼠局灶性脑缺血线粒体膜流动性的保护作用

目的观察中药黄芪对缺血后脑细胞线粒体的保护作用。资料和方法利用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，测定单纯缺血组动物脑细胞线粒体丙二醛的含量及膜流动性的变化，以及缺血即刻、缺血后６、１２、２４、４８不同时点腹腔注射黄芪各组动物上述指标的变化，对比分析用药各组与盐水对照组观察结果的差异。结果缺血侧大脑半球线粒体内丙二醛含量明显增加，膜流动性明显降低，丙二醛水平与膜微粘度关系密切。缺血后２４小时内注射黄芪均能显著降低线粒体丙二醛含量和膜微粘度，缺血后４８小时用药线粒体生化指标无显著下降，但仍有一定的保护作用。结论黄芪对脑缺血线粒体有保护作用，早期用药疗效显著。