清化瘀毒法对大鼠肝纤维化进程的干预作用

目的 研究紫七软肝片对实验性大鼠肝纤维化进程的干预作用.方法 用40%CCl4皮下注射和高脂饲料及酒精喂养造成大鼠肝纤维化模型.随机分为空白对照组、模型组、紫七软肝片组、大黄虫丸组和秋水仙碱组,造模同时灌胃给药干预,共6周.实验第4周末及结束以后,各取血清、肝组织,检测Hyp的含量,观察肝组织炎症活动度和肝纤维化程度.结果 药物干预后炎症活动度及肝纤维化程度均降低,其中紫七软肝片组6周末时炎症活动度计分最低,肝纤维化度计分与模型组有显著差异(P<0.01).结论 以清化瘀毒为旨立法的紫七软肝片能够减轻大鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度;紫七软肝片能够降低大鼠血清HA、PcIII及肝组织Hyp,尤其以肝纤维化早期明显,可能是其抗肝纤维化的作用途径之一.     

赶黄虫草胶囊对复合因素致肝纤维化大鼠的防治作用

目的:观察赶黄虫草胶囊对复合因素致大鼠肝纤维化的防治作用。方法:选取SD大鼠100只,除空白对照组10只外,其余大鼠采用每周2次皮下注射40%CCl4花生油溶液,同时喂予高脂低蛋白饲料,隔日以10%乙醇为饮水等复合因素刺激制备大鼠肝纤维化模型,连续8周。造模4周后将大鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、鳖甲软肝片阳性对照组(灌胃给予鳖甲软肝片800 mg·kg-1·d-1)、GHCCC高、中、低剂量组(灌胃给予GHCCC 800、400、200 mg·kg-1·d-1)。给药8周后,各组大鼠取血、取肝脏,酶联免疫法测定血清Ⅲ型前胶原肽(ⅢPC)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量;化学比色法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)的含量;肝组织病理切片行Masson染色,镜下进行肝细胞脂肪变性及肝纤维化分级。结果:GHCCC高、中和低剂量组的血清ⅢPC、HA、LN水平和肝组织纤维化面积显著低于模型组的相应值;高剂量组肝组织中羟脯氨酸水平显著低于模型组;肝脏病理损伤明显减轻,其中高、中剂量组肝脂肪变性分级和肝纤维化评分明显降低(P0.05)。结论:GHCCC对CCl4复合因素致肝纤维化大鼠具有一定的治疗作用。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织α-SMA、TGF-β1蛋白表达，采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，α-SMA蛋白表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达也较模型组显著下降。结论：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低α-SMA蛋白表达及TGF-β1的转录及表达，抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

参桃软肝丸抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的：观察参桃软肝丸对肝纤维化模型大鼠的治疗效果。方法：采用复合因素造成大鼠肝纤维化模型，用参桃软肝丸7．2g／kg、3．6g／kg的剂量进行实验性治疗，作血清GPT、白蛋白、纤维蛋白原含量测定，观察肝功能的改变，作HE和胶原纤维染色，光镜下观察肝脏病理形态学改变。结果：参桃软肝丸各剂量组大鼠血清中的GPT含量明显低于模型组，血清白蛋白、纤维蛋白原含量明显高于模型组。两组比较差异均有显著性(P＜0．05)；光镜下发现各用药组大鼠肝脏组织内纤维组织增生程度较轻。结论：参桃软肝丸有抗肝纤维化作用。     

HG颗粒对CCl4复合因素致肝纤维化大鼠血清IL-1和IL-6含量的影响

目的研究HG颗粒对CCl4（四氯化碳）复合因素致肝纤维化大鼠血清IL-1（白介素1）和IL-6（白介素6）含量的影响。方法70只SD大鼠，除空白对照组10只外，其余各组大鼠皮下注射CCl4，同时予高脂饲料和20％乙醇喂养6周建立肝纤维化大鼠模型，存活大鼠按性别和体重随机分为5组，再加上空白对照组，动物共计6组，分别给予药物或蒸馏水。空白对照组：蒸馏水0．1ml／kg；模型对照组：蒸馏水0．1ml／kg；HG颗粒高、中、低3种剂量组：6，3，1．5g生药／kg；复方鳖甲软肝片组：1g／k，灌胃治疗，1次／d，连续4周。观察模型大鼠血清IL-1和IL-6含量的变化。结果模型大鼠血清IL-1和IL-6含量均明显增高。HG颗粒3种剂量组治疗后均能降低模型大鼠血清IL-1和IL-6含量。复方鳖甲软肝片亦可降低大鼠血清IL-1和IL-6含量。结论HG颗粒对CCl4复合因素致肝纤维化大鼠有显著的治疗作用。     

清肝降脂方对脂肪变性LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达的影响

目的:通过建立游离脂肪酸体外诱导的LO2细胞非酒精脂肪肝模型,探讨不同剂量的清肝降脂方对肝脏脂肪变LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达水平的影响。方法:建立游离脂肪酸诱导脂肪变性LO2肝细胞体外模型。人肝LO2细胞采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养,待细胞均匀分布,随机分为6组:正常对照组、模型组、清肝降脂方高剂量组、中剂量组、低剂量组、水林佳对照组,每组6瓶。除正常对照组外,其余5组细胞均以0.5 mmol/L的游离脂肪酸诱导LO2非酒精脂肪肝细胞模型,诱导24 h后,各组随机抽取1瓶进行油红O染色,观察LO2细胞的脂肪化程度。确定模型诱导成功后,正常对照组和模型组分别加入10%正常大鼠血清,低、中、高剂量清肝降脂方药物血清组及水林佳药物血清组添加10%含相对应药物的大鼠血清,培养24h后,收集细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测血红素氧化酶-1(HO-1)、早期生长反应因子-1(Egr-1)的基因及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组LO2细胞HO-1、Egr-1 mRNA和蛋白表达有所增加;与模型对照组比较,自拟清肝降脂方三剂量组和对照药物组HO-1 mRNA及蛋白表达有所增高,Egr-1mRNA和蛋白表达明显降低;与对照药物组比较,清肝降脂方高剂量组HO-1 mRNA表达有所增高,Egr-1 mRNA表达有所降低。结论:Egr-1高表达可能会导致肝损伤机制之一;HO-1高表达可能是保护肝损伤机制之一;两者可能都是通过调节TNF-α表达来调节NAFLD细胞的损伤进展。清肝降脂方可明显改善LO2细胞Egr-1、HO-1 mRNA及蛋白的表达,可能为其治疗机制、临床诊断和判断进展参考指标。     

血清药理学与药代动力学整合模型的复方鳖甲软肝片日服用次数合理性研究

该课题通过体外观察大鼠含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,结合复方鳖甲软肝片中芍药苷的药物代谢动力学模型,研究复方鳖甲软肝片合理的日服用次数。大鼠每日不同次数灌胃给药,分别于给药前及第1次给药后各时间点眼眶后静脉取血,用于测定大鼠含药血清对HSC-T6增殖的影响以及大鼠血浆中芍药苷的血药浓度。综合分析时量和时效关系,制定复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化的合理的日服用次数。结果表明,复方鳖甲软肝片含药血清对HSC-T6抑制的效应与芍药苷血药浓度具有良好的相关性,每日给药2次组对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积(AUC)及药代动力学AUC均高于每日给药1次组和3次组。因此,复方鳖甲软肝片用于慢性肝炎肝纤维化以每日服用2次为佳。     

柔肝解毒方法含药血清体外抗肝癌的实验研究

目的：通过体外抑制肿瘤细胞增殖试验,观察柔肝解毒方体外防治肝癌的药效作用。方法：制备柔肝解毒方含药血清,用MTT法观察含药血清对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞增殖的影响。结果：柔肝解毒方含药血清能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的增殖,对HepG2的最高抑制率为69.73%,对SMMC-7721的最高抑制率为62.64%,与空白对照组及PBS组相比差异显著（P〈0.01）;最高剂量组与含5-氟尿嘧啶血清抑制肝癌细胞的效果相比,无显著性差别（P〉0.05）。中药组的抑制率呈一定的量效关系,随着给药剂量的增加其抑制率升高。结论：柔肝解毒方具有良好的体外抗肝癌的药效作用。     

桂郁金提取物对人肝星状细胞的胶原与金属蛋白酶分泌的影响

目的 观察桂郁金乙醇提取物(挥发油)对人肝星状细胞的作用,了解其对该细胞胶原蛋白和基质金属蛋白酶分泌功能的影响.方法 将人肝星状细胞株(HSC-LX2)与药物孵育48h后,用免疫组化法染色观察Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、MMP-1及MMP-13表达的部位和面积.结果 低、中、高浓度桂郁金提取物均具有抑制HSC-LX2细胞分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原,并增加其分泌MMP-1及MMP-13的能力.以上作用具有剂量依赖性,且中、高剂量组作用明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强,经统计学分析差异均有显著性(P＜0.05).结论 桂郁金提取物具有降低HSC-LX2细胞的纤维化蛋白分泌功能、增加纤维化蛋白降解的能力,从而可以干预肝纤维化病程;以上能力均具有剂量依赖性;且中、高剂量桂郁金提取物组能力明显比秋水仙碱组和复方鳖甲软肝片组强.     

紫七软肝片对二甲基亚硝胺所致大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的观察紫七软肝片对二甲基亚硝胺( DMN)所致大鼠慢性肝损伤模型的保护作用.方法模型组及各给药组腹腔注射 DMN 10 mg/kg,每周两次,连续两天注射,持续 4周,给药自造模之日起,正常对照组给予等体积生理盐水,每天 1次.结果紫七软肝片的 3、 6、 12 g/kg 3个剂量组肝功能指标均有不同程度的改善,肝组织羟脯氨酸含量较模型组明显降低; 6、 12 g/kg剂量组血清透明质酸、层粘连蛋白的值较模型组显著降低;病理组织学检查结果表明,其肝脏病变程度均较模型组明显减轻.结论 紫七软肝片对大鼠慢性肝损伤具有一定的保护作用.     

紫七软肝颗粒对小鼠免疫功能的影响

目的：研究紫七软肝颗粒对正常及免疫低下小鼠免疫系统的影响。方法：用碳粒廓清实验研究紫七软肝颗粒对正常小鼠网状内皮系统及脾脏指数、胸腺指数的影响；用环磷酰胺造成免疫低下模型，观察紫七软肝颗粒对2，4—二硝基氯苯（DNCB)诱导的迟发性超敏反应(DTH)及小民血清溶血素含量的影响，并测定小鼠脾脏指数及胸腺指数。结果与结论：紫七软肝颗粒能增强正常小鼠网状内皮系统的各噬功能，增强由环磷酰胺造成的免疫低下小鼠的迟发性超敏反应和血清溶血素含量，增加脾脏指数及胸腺指数。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

HG颗粒对四氯化碳复合法致肝纤维化大鼠肝胶原纤维及羟脯氨酸含量的影响

目的研究HG颗粒对（四氯化碳）CCl4致肝纤维化大鼠肝脏胶原纤维及羟脯氨酸（Hyb）含量的影响。方法70只SD大鼠，除空白对照组10只外，其余各组大鼠皮下注射CCl4，同时子高脂饲料和20％乙醇喂养6周建立肝纤维化大鼠模型，存活大鼠随机分为5组，加上空白对照组，动物共计6组，分别给予药物或蒸馏水。空白对照组：蒸馏水0．1ml／kg；模型对照组：蒸馏水0．1ml／kg；HG颗粒高，中，低3种剂量组：6，3，1．5g生药／kg；复方鳖甲软肝片组：1g／kg，灌胃治疗，1次／d，连续g周。观察大鼠肝胶原纤维及Hyb含量的变化。结果模型大鼠肝胶原纤维及Hyb含量均明显增高。HG颗粒3剂量组治疗后均能降低大鼠肝胶原纤维组织及Hyb含量，复方鳖甲软肝片亦可降低胶原纤维及Hyb含量。结论HG颗粒对CCl4复合法致肝纤维化模型大鼠具有显著的治疗作用。     

HG颗粒对二甲基亚硝胺致肝纤维化大鼠血清ALT,AST,TP,Alb及Glob的影响

目的研究HG颗粒对二甲基亚硝胺(DMN)致肝纤维化大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)及球蛋白(Glob)的影响。方法80只SD大鼠,除空白对照组10只外,其余大鼠均腹腔注射DMN(2ml/kg)3周建立肝纤维化大鼠模型,存活动物按性别、体重随机分为5组,加上空白对照组,动物共计6组,分别给予药物或蒸馏水。空白对照组:蒸馏水0.1ml/kg;模型对照组:蒸馏水0.1ml/kg;HG颗粒高、中、低3种剂量组:6,3,1.5g生药/kg;复方鳖甲软肝片组:1g/kg,1次/d,灌胃治疗连续4周。观察各组大鼠血清ALT,AST,TP,Alb andGlob。结果模型大鼠血清ALT,AST活性显著增高,Alb含量略为降低,TP含量略升高,Glob含量显著升高。HG颗粒治疗后使ALT和AST活性降低,使TP和Glob含量降低,使Alb含量增加,复方鳖甲软肝片可降低ALT,AST活性,但对TP,Glob,Alb含量无调节作用。综合疗效HG颗粒优于复方鳖甲软肝片。结论HG颗粒能有效治疗DMN所致肝纤维化大鼠。     

复方鳖甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化作用机理的实验研究

目的：采用单侧输尿管结扎（UUO）肾间质纤维化模型，探讨复方鳖甲软肝方对肾间质纤维化大鼠血生化及肾组织病理形态学的影响。方法：将大鼠随机分为7组，正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。UUO术后4周处死大鼠，并应用HE、六胺银染色及Mallory染色，观察肾组织病理学改变。结果：模型组肾小管结构严重破坏，管腔塌陷，上皮细胞大量坏死；有些部位肾小管和间质的结构基本消失，间质中出现弥漫性细胞增殖，并广泛间质纤维化。复片鳖甲软肝方组和苯那普利组纤维化病理改变明显减轻，其中以复片鳖甲软肝方中剂量组作用明显。结论：复方鳖甲软肝方可减少炎细胞的浸润、减轻肾小管的损伤，进而延缓肾间质纤维化的病程进展。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

黄芪多糖对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的保护作用

目的：观察黄芪多糖（APS）对四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化的治疗作用。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,造模成功后,取大鼠血清和肝组织进行检测。测定血清肝纤维化四项、肝脏组织中羟脯氨酸（HYP）含量;HE染色比较炎症及肝纤维化程度;免疫组织化学法分析肝组织中I型胶原（Col-I）、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)表达量。结果：与模型组相比,APS中、高剂量组的肝纤四项水平、炎症及肝纤维化程度明显降低（P<0.05）;APS中、高剂量组肝脏组织中HYP含量显著降低（P<0.01）;APS中剂量组Col-I、α-SMA表达显著减少（P<0.01）;APS高剂量组Col-I、α-SMA表达明显减少（P<0.05）。结论：APS对大鼠肝纤维化具有一定的防治作用,作用机制可能与其抑制Col-I、α-SMA表达有关。     

增损甘露消毒丹对肝纤维化大鼠血清透明质酸和层黏蛋白的影响

目的：观察增损甘露消毒丹对肝纤维化大鼠血清透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）以及肝组织病理的影响。方法：采用四氯化碳（CCL4）植物油溶液皮下注射加乙醇灌胃制备肝纤维化大鼠模型。设病理模型组、增损甘露消毒丹小、中、大剂量组及复方鳖甲软肝片组。造模成功后进行药物灌胃治疗,疗程结束后处死各组大鼠,检测肝纤维化血清学指标透明质酸、层黏蛋白的含量,并对其肝组织病理切片进行HE染色、胶原纤维染色及网状纤维染色,观察其肝纤维化的程度。结果：各治疗组较病理模型组血清HA、LN含量明显降低（P〈0.05）;增损甘露消毒丹大剂量组、中剂量组与复方鳖甲软肝片组相比,血清HA、LN含量差异无统计学意义。各治疗组（除增损甘露消毒丹小剂量组）较病理模型组网状纤维面积／肝组织面积百分比降低（P〈0.05）;增损甘露消毒丹大剂量组与复方鳖甲软肝片组相比,其网状纤维面积／肝组织面积百分比无明显差异。结论：增损甘露消毒丹在降低肝纤维化大鼠血清HA、LN含量方面,与复方鳖甲软肝片基本相当。     

蒙药肝乐康胶囊抗肝纤维化的实验研究

目的：研究肝乐康胶囊抗肝纤维化的作用。方法：采用CCl4和乙醇复合因素致大鼠肝纤维化模型，给予肝乐康胶囊水溶液灌胃，观察血清学、形态学变化。结果：肝乐康胶囊大剂量组能显著降低大鼠谷丙转氨酶、谷草转氨酶、脯氨酸肽酶、血清透明质酸的水平；减轻肝脏炎症及纤维化程度；肝组织胶原面积明显减少。结论：肝乐康胶囊具有保肝和抗肝纤维化作用，其作用机制可能与抗炎、抑制肝脏星状细胞的活化和增殖有关。     

软肝化癓丸抗肝纤维化作用和机制的研究

复制大鼠免疫性肝纤维化模型，采用Griess反应法测定一氧化氮（NO），结晶紫染色法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α），胸腺细胞法测定白介素1（IL－1），并用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测mRNA 的表达。结果：（1）软肝化症丸各剂量组均能明显抑制血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）的升高，提高白蛋白（A1b），减轻肝细胞坏死、变性及胶原增生程度；（2）抑制大鼠腹腔巨噬细胞产生NO、TNF-α、IL-1;(3）抑制大鼠肝组织I胶原、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。