聚合酶链反应检测HGV RNA

庚型肝炎病毒(HGV)呈全球性分布。在志愿供血员中 HGV 感染率约为1.7%,职业供血员中为12.9%,在一些不明原因肝病患者中约为9%。HGV 感染可表现为急性、慢性或暴发性肝炎。目前采用聚合酶链反应检测 HGV RNA 是诊断 HGV 感染的主要手段。我们在 HGV5′端非翻译区(5′UTR)设计引物。建立了检测 HGV RNA 的逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-Nested-PCR),并用于 HGV感染的诊断。材料与方法一、标本来源     

抗-HGV在各型病毒性肝炎患者中的检出情况及意义

目的了解抗庚型肝炎病毒抗体（抗－ＨＧＶ）在各型病毒性肝炎患者中的检出情况及临床意义。方法对１９０例不同病原的病毒性肝炎患者进行抗－ＨＧＶ（ＥＬＩＳＡ）检测,对其中抗－ＨＧＶ阳性者进行ＨＧＶ－ＲＮＡ（ＲＴＰＣＲ）检测。结果①在各型病毒性肝炎患者中总的抗－ＨＧＶ阳性率为１２１％（２３／１９０）。②ＨＣＶ感染者中抗－ＨＧＶ的阳性率（２６９％）最高,其后依次为ＨＥＶ（１８２％）,ＨＢＶ（１１２％）,ＨＤＶ（８３％）。③２３例抗－ＨＧＶ阳性的患者中仅有５例（２１７％）ＨＧＶ－ＲＮＡ同时检测阳性。④抗－ＨＧＶ阳性组与抗－ＨＧＶ阴性组比较,两组肝功能指标无统计学差异（Ｐ＞００５）。结论①抗－ＨＧＶ阳性并不一定代表ＨＧＶ病毒复制或现症感染。②ＨＧＶ致病性可能较弱。③ＨＧＶ可能通过多途径传播。     

静脉毒瘾者84例HGV感染状况

目的调查庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在静脉毒瘾者中的感染状况。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测８４例静脉毒瘾者血浆标本。ＨＧＶＲＮＡ经热变性法提取后逆转录为ｃＤＮＡ，在ＨＧＶ５′非编码区（５′ＮＣＲ）设计两对引物进行巢式扩增，产物为２３８ｂｐ，并经限制性内切酶ＨｐａⅡ鉴定扩增产物来自ＨＧＶ。结果８４例中有１５例为ＨＧＶＲＮＡ阳性，阳性率为１７．９％。ＨＧＶＲＮＡ阳性病例中１１例合并丙型肝炎病毒感染（１１／１５）。结论静脉毒瘾者是ＨＧＶ感染的高危人群；不洁注射是获得ＨＧＶ感染的重要途径。     

重庆地区HGV RNA检测及部分序列分析

目的 阐明重庆地区庚型肝炎病毒感染状况和序列特征。方法 以公布的ＨＧＶ非编码部分序列为引物，采用ＲＴ一套式ＰＣＲ技术检测ＨＧＶＲＮＡ，扩增产物序列采用ＰＣＲ片段直接循环测序法测定。结果 从７３例名种类型肝炎患者血清中检出２３例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性，阳性率高达３７％，其中２６例非Ａ－Ｅ型肝炎中检出６例阳性（２３％），３９例乙型肝炎患者中检出１５例阳性（３８％），测序结果表明，重庆株ＨＧＶ非编码区邓列与     

实时荧光定量RT-PCR检测血清和单个核细胞中HCV RNA的意义

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测血清和外周血单个核细胞(PBMCs)中HCV RNA含量及其临床价值。方法采集可疑丙型病毒性肝炎病人血,用FQ-RT-PCR分别检测血清和PBMCs中HCV RNA含量。血清或PBMCS HCV RNA阳性者都视为HCV RNA阳性。结果检测可疑患者180例,HCV RNA阳性106例。其中血清HCV RNA阳性84例,占79.25%;PBMCs HCV RNA阳性63例,占59.43%。HCV RNA阳性比率血清高于PBMCs(χ2=9.78,P<0.01)。单独血清HCV RNA阳性43例,占40.57%;单独PBMCs HCV RNA阳性22例,占20.75%;血清和PBMCs中HCV RNA同时阳性41例,占38.68%。血清和PBMCs HCV RNA含量差异无显著性。结论同时检测血清和PBMCs HCV RNA可提高HCV感染诊断的阳性率,检测PBMCs HCV RNA对抗病毒治疗的疗效评价及治疗时间有重要意义。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

敏感特异RT-nPCR检测高危人群HGV感染状况

目的建立敏感、特异的RT-nPCR技术以检测高危人群中HGV感染状况.方法根据已知并已公认的HGV序列,在其5'UTR区寻找最大同源序列并设计套式引物建立HGVRNA的RT-nPCR检测法,对129例高危人群(包括48例静脉药瘾者,15例血透患者及各型肝炎患者66例)的血清标本进行检测.结果我们所建立的5′UTR引物的RT-nPCR检测HGVRNA的敏感性高于NS3区引物的RT-nPCR的敏感性(高10～100倍);IVDUs、血透者及乙型、丙型、非甲-戊型肝炎患者HGVRNA的检出率分别为12%(6/48),13%(2/15)及17%(3/18),22%(7/32),6.2%(1/16),抗-HGV的检出率分别为10%(5/48),7%(1/15)及22%(4/18),28%(9/32),25%(4/16).输血组的HGV感染率(38%)显著高于未输血组(18%)(P＜0.05).结论5′UTR区引物的HGVRNA RT-nPCR检测法敏感、特异;HGV在高危人群中的感染普遍存在,是部分非甲-戊型肝炎的病因,输血和使用血制品为HGV传播的重要的途径.     

聚合酶链反应和杂交试验检测上海地区庚型肝炎病毒感染的初…

为探讨上海地区庚型肝炎病毒感染的现状，采用逆转录－套式－聚合酶链反应检测庚肝炎病毒（ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ）核酸（ＨＧＶ ＲＮＡ）。结果在各类患者和因员中ＨＣＶＲＮＡ的检出率分别是；血液透析和肾移植为１５．７％，丙型肝炎为３．３％、乙型肝炎为０、散发性非Ａ－Ｅ型肝炎为０、义务因员为７．５％。提示ＨＧＶ杂多为无闰状或亚临床型，常与ＨＣＶ重叠感染，并与输血密切相关，作者肯定了上海地区存在庚型肝炎，指出筛选     

186例病毒性肝炎血清中HGV RNA检测

笔者应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测186例病毒性肝炎患者血清庚型肝炎病毒核糖核酸(HGV-RNA),以了解广西玉林地区庚型肝炎病毒(HGV)在肝炎患者中的感染状况,结果如下。 1 对象和方法 1.1 检测对象 186例均为1996年5月～1997年2月住我院传染科的病毒性肝炎患者,男150例,女     

慢性重型肝炎及肝炎肝硬化患者HGV感染状况分析

庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)可引起急性和慢性肝炎 ,且可与乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)、丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)同时或重叠感染。本文应用逆转录套式聚合酶链反应法 (ＲＴ ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ)检测了 2 64例慢性重型肝炎患者和 466例肝炎肝硬化患者 (共 73 0例 )中ＨＧＶ的感染情况 ,现报     

不同临床型肝病患者中庚型肝炎病毒感染的研究

目的:了解不同临床型肝病患者的庚型肝炎病毒(HGV)感染状况。方法:应用酶联免疫法(ELISA)检测不同临床型肝病患者血清中抗-HGV,并对抗-HGV阳性血清应用逆转录套式聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HGV RNA。结果:肝硬变,慢性乙型和丙型肝炎病人及HBsAg携带者的抗-HGV阳性率(分别为36.36％、26.2％、12.5％和12.0％),均显著高于急性肝炎(4.17％)。急性和慢性非甲-戊型肝炎病人的抗-HGV阳性率也较高,分别为33.3％(1/3)和16.67％(1/6)。各临床型肝病患者中,抗-HGV阳性和阴性组血清天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平无明显差异。结论:HGV与乙型和丙型肝炎病毒(HBV和HCV)具有较高的共同感染率,部分非甲-戊型肝炎为HGV感染;重叠感染HGV似并不加重肝损害程度。     

急性病毒性肝炎患者中庚型肝炎病毒RNA检测研究

为观察庚型肝炎病毒在急性病毒性肝炎中感染情况,对239例急性肝炎患者的血清,采用两步法筛选进行HGV RNA的检测,并经HGV RNA确证试验,结果显示:HGV RNA阳性者9例,其中合并乙肝1例,合并丙肝3例,合并戊肝1例,非甲-戊型肝炎中占4例。提示:①HGV与其它型肝炎病毒重叠感染较多。②6例患者无输血史,而HGV RNA仍为阳性,提示HGV的输血外传播。③NA-E急性肝炎患者中,HGV的阳性率为23.5％,证实HGV为其病原之一,同时提示还可能存在其它的致病因子。     

庚型肝炎病毒抗体在不同人群中的检测及意义

为了解庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)在我国人群的感染状况,应用ELISA法对277例各种肝病及103例肝炎高危人群血清进行了抗-GBV-C/HGV-IgG的检测。结果:急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎、肝炎肝硬变和肝癌患者抗-GBV-C/HGV检出率分别为20.3％(13/64)、15.6％(19/122)、26.7％(12/45)、28.2％(11/39)和28.6％(2/7);在HAV、HBV、HCV、HAV+HBV、HBV+HCV、HBV+HDV和HAV+HBV+HCV肝炎病人中检出率分别为15.6％(5/32)、26.1％(31/119)、20.7％(6/29)、26.1％(6/23)、28.6％(4/14)、18.2％(2/11)、33.3％(1/3)和在非甲-戊型肝炎中的检出率为12.1％(4/33);献血员、血液透析者、静脉毒瘾者抗-GBV-C/HGV检出率分别为14.7％(5/34)、6.3％(2/32)和8.1％(3/37),以上结果组间均无显著差异(P>0.05)。研究表明,在我国部分肝病及肝炎高危人群中存在庚型肝炎病毒感染,GBV-C/HGV与HAV、HBV、HCV、HDV之间存在多种形式的同时或重叠感染,非甲-戊型肝炎中存在GBV-C/HGV感染,但感染率并不高,提示GBV-C/HGV可能是非甲-戊型肝炎的一种病原体,但并非是非甲-戊型肝炎的主要致病因子。     

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒表达的免疫组化研究

目的 了解HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织HGV/GBV-C相关抗原的分布状况,探讨HGV/GBV-C对肝脏的损害机制。方法 以抗HGV/GBV-C NS5单克隆抗体或抗HCV NS3单克隆抗体为试剂,采用免疫组织化学方法检测肝炎病人肝组织中HGV/GBV-C、HCV相关抗原表达。结果 56例肝炎病肝组织中HGV/GBV-C相关抗原表达阳性率为26.79％(15/56);HCV NS3抗原表达阳性率为39.29％(22/56)。HGV/GBV-C NS5抗原表达阳性信号主要位于肝细胞胞浆中,染色阳性细胞周围可见淋巴细胞浸润。结论 肝细胞中存在HGV/GBV-C相关抗原表达,其编码产物可能作为一种靶抗原,诱发免疫病理反应,免疫损伤可能是其发病机制之一。     

肾透析患者血清中庚型肝炎病毒核酸的检测和与乙、丙型肝炎病毒同时感染分析

目的:了解肾透析患者庚型肝炎病毒(HGV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)合并感染的状况。方法:应用逆转录多聚酶链反应扩增庚型肝炎病毒基因,采用蛋白酶K裂解法提取血清中HGV RNA,逆转录为cDNA后进行巢式扩增,获得238bp的特异性片段。用此方法对28例肾透析患者血清标本进行检测。结果:发现28例患者血清中有4例HGV RNA阳性。这4例患者同时合并HCV感染,其中2例为HBV、HCV、HGV合并感染。结论:肾透析患者是HGV感染的高危人群,HGV在肾透析患者中常与HCV、HBV合并感染。     

肝炎病人血清、外周血单个核细胞和肝脏中GBV-C/HGV复制中间体的研究

目的:关于GBV-C/HGV组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究27例肝炎病人血清、外周血单个核细胞(PBMCs)及肝脏中GBV-C/HGV正链及负链RNA(复制中间体)的存在状况。方法:应用逆转录-巢式多聚酶链反应技术检测GBV-C/HGV正、负链RNA。结果:27例病人血清中21例病人血清、7例PBMCs、10例肝组织中检测到GBV-C/HGV正链RNA,其中2例单一GBV-C/HGV感染者肝组织中检测到负链RNA,在27例病人血清及PBMCs中均未检测到负链RNA。结论:提示GBV-C/HGV是一种嗜肝病毒,肝脏可能是其复制的主要场所之一,但GBV-C/HGV与HCV混合感染时,在PBMCs及肝脏中尚未发现该病毒复制的证据。     

慢性肝病患者肝组织中HGV抗原的表达及意义

目的探讨慢性肝病患者组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）表达与意义。方法应用免疫组织化学方法以鼠抗ＨＧＶＮＳ５甲克隆抗体检测１４２例慢性肝病患者肝组织中ＨＧＶ抗原，部分患者采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测其血清中ＨＣＶＲＮＡ。结果１４２例肝病患者中，２９例（２０．４％）组织中检出ＨＧＶ抗原，肝硬化组（４２．９％，１２／２８）较慢性肝炎（１５．９％８／１１）和肝癌（１４．３％，９／６３）组检出率高。阳性信号位于胞浆中，阳性细胞可成散在、簇状或弥漫性分布。阳性细胞周围可有炎性坏死；肝癌患者抗原阳性细胞主要位于癌旁肝组织，癌巢中仅偶见少数散在分布的阳必细胞；绝大多数组织抗原阳性者其血清ＨＧＶＲＮＡ为阳性。有４例患者组织中ＨＧＶ抗原阳性但其血清ＨＧＶＲＮＡ阴性。结论ＨＧＶ可在慢性肝病包括肝细胞肝癌患者肝组织中表达，ＨＧＶ感染在慢性肝炎病期进展及肝癌发生中具有一定意义。     

原发性肝癌患者血清中庚型肝炎病毒核酸的检测分析

为了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在原发性肝癌患者中的感染状况，本文对１４５例原发性肝癌患者血清进行了分析。应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增庚型肝炎病毒基因，采用蛋白酶Ｋ裂解法提取血清中ＨＧＶ－ＲＮＡ，逆转录为ｃＤＮＡ后进行巢式扩增，获得２３８ｂｐ的特异性片段。用此方法对１４５例原发性肝癌（ＨＣＣ）患者血清标本进行检测，结果发现２１例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性（１４．５％），均为男性患者。     

聚合酶链反应检测慢性丁型肝炎血清HDV RNA的实验研究和临床观察

本文建立一种高度敏感和特异性的检测丁型肝炎病毒(HDV)RNA的方法,提高了丁型肝炎的诊断水平。以HDV RNA保守区ORF5′末端第929～1640位核苷酸为靶基因设计一对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了35例慢性丁型肝炎患者血清HDV RNA,并同时检测HBVM。35例中共检出HDV RNA421例(60％),10例HDAg阳性者HDV RNA全部阳性,25例抗-HD阳性者中有11例HDV RNA阳性(44％)。表明采用RT-PCR可以准确、快速、敏感地检测出HDV RNA,具有很强的特异性。35例中HBV DNA的检出率为34.2％,而HDV RNA的检出率为60％,HBV DNA和HDV RNA同时阳性者共9例占25.7％,提示慢性乙型肝炎病人合并丁型肝炎时,HBV的复制受到不同程度的抑制而HDV的复制较为活跃。     

丙型肝炎病毒NS5B的体外表达、纯化和RNA多聚酶活性鉴定

目的 研究丙型肝炎病毒NS5B蛋白的表达及其生物学功能。方法 构建长度为1676bp(7261-9036bp,编码558aa)的HCV NS5B编码区cDNA,定向克隆到表达质粒pET16b中,并在大肠杆菌BL21中表达。应用合成的多聚A或寡聚U为模板进行~3H-UTP掺入实验分析纯化蛋白的活性。结果 表达的NS5B蛋白分子量为65KD,以包涵体形式存在细胞内,改变部分表达条件未能减少包涵体的形成及可溶性蛋白的增加,该包涵体蛋白在6M尿素浓度、pH:10及500mM NaCl的溶液中完全溶解。~3H-UTP掺入实验表明纯化的蛋白具有RNA多聚酶活性并依赖多聚A的存在。结论 对NS5B蛋白生物学活性的研究,有助于了解HCV的复制及抗病毒药物的开发。