多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析及对替加环素敏感性降低的机制研究

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的机制。方法应用浓度梯度法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感性,然后应用实时荧光定量PCR检测菌株中adeB外排泵基因的分布,最后应用实时荧光逆转录PCR技术测定外排泵基因adeB的表达水平。结果替加环素对100株受试菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.125μg/ml~4μg/ml,MIC50为1μg/ml,MIC90为2μg/ml;菌株中ade B外排泵基因广泛分布,但adeB外排泵基因的相对表达量并未随着MIC值的增加而增加。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性的降低可能存在ade B基因表达调控以外的机制。     

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系

目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系。方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序。结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%。59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%。不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P0.05)。adeABC外排泵的调控基因adeR、adeS的碱基序列未出现基因突变或插入序列。结论 RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中adeB、adeJ基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关。     

多药耐药鲍氏不动杆菌adeABC外排系统研究

目的 调查临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC和调控基因adeS、adeR分布情况及与抗菌药物耐药的关系.方法 在全国范围21所医院选择同期多药耐药鲍氏不动杆菌101株和敏感菌12株进行研究；测定其对6种抗菌药物的MIC值；PCR筛选外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeS、adeR,克隆测序明确基因型.结果 101株多药耐药鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、米诺环素、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星耐药率分别为52.5％、62.4％、71.3％、80.2％、94.1％、95.0％,其中对以上6种抗菌药物全部耐药的菌株36株；adeA、adeB、adeC、adeS、adeR基因阳性菌株分别为74、76、75、73、77株；以上5种基因均阳性(基因型命名为组Ⅰ)的菌株检出64株,检出率为63.4％,为分布最广且最主要的基因型；根据脉冲场凝胶电泳菌株的同源性分析结果发现,克隆A、B、C、E中以组Ⅰ为主,而D克隆中以组Ⅶ(5种基因均阴性)为主；12株敏感鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC阳性率也均＞40.0％,但调控基因adeS、adeR阳性率较低.结论 鲍氏不动杆菌临床分离株中,adeABC外排泵基因在耐药菌和敏感菌中阳性率均高,而且地区分布和克隆分布十分广泛,其与多耐药的获得有极大的相关性,其基因的播散可能主要通过菌株的克隆播散得以实现.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵基因adeB关系的分析

目的探讨耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌的耐药性与外排泵基因adeB的关系,为临床合理使用抗生素提供依据,防止和抑制鲍曼不动杆菌耐药菌株的增加。方法收集本院2017年1月-12月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌122株,其中亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)96株,亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(ISAB)26株。采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性分析试验;应用PCR及序列分析的方法分析外排泵基因adeB。结果 IRAB对大多数抗生素最小抑制浓度(MIC)值均较高,但对替加环素仍保持较高的敏感性,而ISAB对多数抗生素均较敏感。PCR扩增结果显示IRAB的adeB检出率为96.8%。adeB基因与GenBank注册号CP026943.1基因相似性为99%。结论本院分离到的鲍曼不动杆菌对亚胺培南有较高的耐药性,与adeB基因关系密切。     

多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因及同源性分析

目的分析临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因adeA、adeB、adeC及其调控基因adeR、adeS分布与抗菌药物耐药的关系,为ICU感染鲍氏不动杆菌的同源性有效应对医院感染。方法 2012年ICU检出鲍氏不动杆菌102株,采用K-B法进行药敏试验,PCR测定所有菌株的药物外排泵基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果 94株耐药鲍氏不动杆菌对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100.0%,对亚胺培南和氨苄西林/舒巴坦的耐药率为75.8%和95.0%,对其他抗菌药物耐药率均>85.0%;102株鲍氏不动杆菌中adeA、adeB、adeC、adeR、adeS基因型的阳性株分别为78、79、76、77、74株;5种基因均以阴性为主;敏感株中调控基因adeR、adeS表达率较低分别为37.5%和25.0%。结论 ICU分离的鲍氏不动杆菌中呈现严重的多药耐药,adeABC外排泵耐药基因相对于敏感株在耐药菌株中大量存在,外排泵基因的高表达与鲍氏不动杆菌的多药耐药存在相关性关系,而且其基因的播散主要通过克隆播散得以传播。     

西安地区鲍氏不动杆菌耐药程度与主动外排作用的相关性研究

目的 研究西安地区鲍氏不动杆菌耐药程度与主动外排作用的相关性,明确主动外排作用是鲍氏不动杆菌多药耐药的重要原因之一.方法 应用K-B法进行体外药敏试验,采用羰基氰氯苯腙(CCCP)抑制试验进行外排表型检测,观察在含20 μg/mlCCCP条件下152株鲍氏不动杆菌对5种抗菌药物MIC值的变化;用PCR法检测多药耐药菌adeABC外排系统的外排基因adeB和调节基因adeR、adeS.结果 CCCP抑制试验:阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、亚胺培南和氯霉素为底物,分别有89、64、70、46和62株符合外排阳性的标准;PCR检测多药耐药鲍氏不动杆菌基因adeB、adeR、adeS的检出率分别为74.32％、71.62％、68.92％,敏感菌株中检出率分别为16.67％、16.67％、16.67％.结论 鲍氏不动杆菌中的确存在对抗菌药物的主动外排作用,主动外排作用是鲍氏不动杆菌多药耐药的重要原因之一.     

鲍曼不动杆菌耐药性分析及其主动外排基因adeB的分子检测

目的了解临床鲍曼不动杆菌的多重耐药状况及主动外排基因adeB的检测情况。方法对南华大学附一医院所分离的鲍曼不动杆菌在不同类型标本中的分布与科室来源进行分析,利用ATB药敏系统对所分离菌株进行药物敏感试验;通过Primer Premier软件设计特异性扩增引物,采用聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌主动外排基因adeB在不同类型标本中的分布情况进行检测,探讨鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排基因adeB之间可能存在的关系。结果所分离的50株鲍曼不动杆菌耐药率较高,对美罗培南和亚胺培南的耐药率达76.0%和74.0%,对其它抗菌药物的耐药率均在80%以上;50株鲍曼不动杆菌经PCR检测,主动外排基因adeB阳性者42株,检出率为84.0%。结论本地区鲍曼不动杆菌耐药率及主动外排基因adeB检出率较高,主动外排基因adeB可能介导了鲍曼不动杆菌的多重耐药。     

多药耐药鲍曼不动杆菌主动外排作用研究

目的:观察羰基氰氯苯腙(CCCP)对多药耐药鲍曼不动杆菌耐药水平影响,以探讨主动外排作用在鲍曼不动杆菌耐药中所起的作用。方法:用琼脂二倍稀释法测定鲍曼不动杆菌对哌拉西林等临床常用抗生素的最低抑菌浓度(MIC),观察在CCCP存在条件下MIC值的变化;用PCR法扩增外排泵编码基因adeB。结果:79.2%(19/24)的菌株外排泵表型试验阳性,其中有63.2%(12/19)同时对2种以上的药物有明显的外排作用,这19株主动外排表型阳性菌株adeB基因检测均阳性。结论:外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对鲍曼不动杆菌的MIC,外排泵抑制剂的应用及外排泵编码基因的检测为临床提供一种敏感的检测鲍曼不动杆菌主动外排系统的方法。     

鲍曼不动杆菌的耐药分析及主动外排基因adeB的检测

目的了解临床分离不动杆菌属对16种抗菌药物的耐药性,为耐药菌的抗菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因adeB,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法随机收集40株不重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验。后采用聚合酶链反应(PCR)方法筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeB,并进行序列分析。结果 40株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南最为敏感,耐药率为0;其次对氨苄西林/舒巴坦,耐药率仅为27.5%;对其余抗菌药物的耐药率在52.5%～75.0%之间;根据PCR产物片段大小,40株鲍曼不动杆菌共有adeB基因阳性菌株26株(65.0%)。序列分析显示adeB基因与参考序列AF37088599%相同,与参考序列AJ971416100%相同。结论鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌,对多种抗生素的耐药率高,且呈多重耐药。主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌外排泵基因adeB的研究

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵蛋白在耐药方面的作用和外排泵基因表达情况。方法分离自河北医科大学第一医院的多重耐药鲍曼不动杆菌,加入外排泵抑制剂后MIC值降低至原值的1/4或以上判定为外排泵表型阳性株,外排泵表型阳性鲍曼不动杆菌34株采用PCR扩增法对其进行外排泵蛋白基因ade B的检测,并将ade B基因测序序列与Gen Bank中序列进行同源性比较。结果 34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到ade B基因的有33株,检出阳性率为97.06%。对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因ade B进行测序,经比对,所测序列与Gen Bank中序列同源性为100%。结论 Ade ABC外排泵机制在鲍曼不动杆菌对抗菌药物敏感性方面的作用尤其重要,含有ade B基底泵的重组衍生体相对于不含有的菌株抗菌素的敏感性降低,所以主动外排基因ade B是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一。     

多药耐药鲍曼不动杆菌AdeB外排系统与碳青霉烯类耐药的关系

目的 探讨我国多药耐药鲍曼不动杆菌（鲍氏不动杆菌,MDR-AB）AdeB外排系统对碳青霉烯类抗生素耐药的介导作用.方法 选取全国21家医院MDR-AB菌株101株和敏感菌株12株,用琼脂稀释法检测外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β-苯胺（PAβN,50 mg/L）对菌株AdeB外排系统的抑制作用及菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药情况.利用实时荧光定量PCR技术分析adeB的表达情况,并探讨其与外排表型及耐药之间的关系.结果 101株MDR-AB对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为62.4％和52.5％.1 13株菌株中,共有82株adeB阳性菌株,其中adeB表达比率＞2.5的7株菌株均表现为多重耐药.亚胺培南的耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.237±0.159和0.698±0.115,差异有统计学意义（t=2.641,P＜0.05）;而美罗培南耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.013±0.148和0.978±0.150,组间差异无统计学意义（t=0.166,P＞0.05）.结论 我国MDR-AB中,AdeB外排泵系统的过度表达介导了其对亚胺培南耐药,并可能和美罗培南耐药有关.     

替加环素与米诺环素对多药耐药及泛耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌活性分析

目的 通过检测替加环素和米诺环素对多药耐药(MDR)及泛耐药(PDR)鲍氏不动杆菌(ABA)的最低抑菌浓度(MIC),探讨两种抗菌药物对多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)及泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)的体外抗菌活性,从而指导临床用药.方法 收集2010年7月-2011年6月临床分离的60株MDRAB和67株PDRAB,用E-test法测定替加环素和米诺环素对其体外抗菌活性及其MIC值分布.结果 127株鲍氏不动杆菌对替加环素和米诺环素的敏感率分别为40.9％、30.7％,对替加环素的中介率为14.2％,略高于米诺环素的7.1％;60株MDRAB对替加环素的敏感率为51.7％,对米诺环素敏感率为41.7％,两种药的MIC50为2、8 μg/ml,MIC90为16、64 μg/ml;31株耐头孢哌酮/舒巴坦MDRAB对替加环素和米诺环素的敏感率为35.5％、29.0％,其MIC50为4、24 μg/ml,MIC90为32、96 μg/ml;67株PDRAB对替加环素敏感率为31.3％,对米诺环素敏感率为20.9％,MIC50为8、32 μg/ml,MIC90为48、96 μg/ml.结论 替加环素对多药耐药及泛耐药鲍氏不动杆菌的抗菌活性稍强于米诺环素,该地区两药的敏感率均不高,应引起临床重视.     

氟喹诺酮耐药肠球菌gyrA和parC基因突变特征及其与环丙沙星耐药相关性分析

目的 探讨氟喹诺酮耐药肠球菌的gyrA和parC基因突变特征与环丙沙星耐药程度的相关性。方法 收集2016 - 2018年临床分离59株粪肠球菌和62株屎肠球菌,使用PCR方法特异性扩增gyrA和parC基因,并进行基因测序检测分析。结果 粪肠球菌和屎肠球菌对环丙沙星耐药率分别为59.32%和80.65%。粪肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 51.252, P＜0.001）和parC基因Ser80突变（χ2 = 55.115, P＜0.001）与粪肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16μg/ml）的相关性差异具有统计学意义;屎肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 42.014, P＜0.01）和parC基因Ser80突变（χ2 = 62.000, P＜0.01）与屎肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）的相关性差异具有统计学意义。结论 gyrA基因Ser83突变和parC基因Ser80突变与肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）可能相关。     

环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

Phylogenetic analysis of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii isolated from different sources using Multilocus Sequence Typing Scheme

The emergence and worldwide distribution of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii strains has become a major public health threat. The objective of this study was to investigate the clonal relatedness of A. baumannii isolates collected from clinical and extra-hospital environments in Mthatha, South Africa. Forty carbapenem-resistant isolates comprising of clinical (20) and extra-hospital (20) were identified and tested for antimicrobial susceptibility. Detection of carbapenemase encoding genes was performed by Real-time PCR. The clonal relationship of clinical isolates relative to extra-hospital isolates was determined via multilocus sequence typing (MLST). All isolates (clinical and extra-hospital) were resistant to most common antibiotics including carbapenems (imipenem; MIC ≥32 μg/mL and meropenem; MIC ≥32 μg/mL) with the only exception being amikacin (with 3 isolates susceptible), tigecycline (14 isolates susceptible) and colistin (all isolates susceptible). The bla OXA-23-like and the intrinsic bla OXA-51 -like genes were detected in all the isolates tested. The bla OXA-58-like and bla IMP-type genes were detected in 2 clinical isolates whilst the bla OXA-24-like, bla VIM-type, bla NDM-1, bla SIM, and bla AmpC were not detected. The bla OXA-24-like, bla OXA-58-like, bla IMP-type, bla VIM-type, bla NDM-1, bla SIM, and bla AmpC were negative in the extra-hospital isolates. Co-occurrence of bla OXA-23 -like, bla OXA-58-like and bla IMP-type was observed in 2 clinical isolates. The MLST performed on 33 isolates identified 5 existing sequence types (ST) (ST1, ST2, ST25, ST85 and ST215) in clinical isolates and 2 existing STs (ST1 and ST2) in extra-hospital isolates. The most dominant ST was ST2 accounting for 68.8% of the clinical isolates and 82.4% of the extra-hospital isolates. The study demonstrated high prevalence and potential clonal spread of globally-disseminated clonal complex 2 carrying bla OXA-23-like within our local settings. However, ST25 might be an emerging lineage carrying the bla OXA-23-like . Continuous monitoring is important in limiting the spread of these strains in other healthcare settings and the community.     

2005-2007年中国食品中大肠埃希菌O157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的研究

目的了解中国2005-2007年食源性疾病监测网分离的大肠埃希菌O157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法运用PCR方法进行基因检测,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的89株大肠埃希菌O157中,共51株菌携带亚碲酸钾(ter)基因簇:在42株大肠埃希菌O157∶H7中,41株菌具有ter基因簇;6株携带flicH7基因、无动力O157∶NM(non-mobile)都具有ter基因簇;在41株不携带flicH7基因、无动力O157∶NM和O157∶hund(具有动力,无法判定H型别)中仅有4株菌具有ter基因簇。ter基因簇阳性的51株大肠埃希菌O157,其亚碲酸钾抗性水平为64～512μg/ml。ter基因簇阴性菌株共有38株,亚碲酸钾抗性水平大多数介于2～16μg/ml,仅1株为128μg/ml。29株携带志贺毒素基因的大肠埃希菌,共有28株具有该基因簇和较高水平的亚碲酸钾抗性。结论食品来源的大肠埃希菌O157具有不同亚碲酸钾抗性水平,高水平的亚碲酸钾抗性与携带亚碲酸钾基因簇具有很高的相关性。     

多药耐药鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药机制的研究

目的 了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制.方法　从2009年4-8月中山大学附属第三医院住院患者中分离出20株MDRAB,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析28种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因.结果 检测TEM、OXA- 23群、ADC等3种β内酰胺酶基因呈阳性,阳性率分别为100.0％、65.0％、100.0％;其余均阴性,膜孔蛋白carO基因检测均阳性.结论 MDRAB对多种β-内酰胺类抗菌药物耐药主要与产OXA- 23群碳青霉烯和ADC型AmpC酶相关;产OXA- 23型碳青霉烯酶是导致MDRAB对碳青霉烯类耐药的重要原因,与产金属β-内酰胺酶和膜孔蛋白缺失无关.