硝酸盐还原试验快速检测分离株和痰标本结核分枝杆菌的耐药性

目的建立一种快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。方法以绝对浓度法为“金标准”,对已知耐药浓度的耐药结核分枝杆菌菌株及敏感株采用硝酸盐还原试验检测其对利福平和异烟肼的耐药性。同时用抗酸染色阳性的痰标本经常规处理后进行硝酸盐还原试验。结果结核分枝杆菌分离株两种方法可比性好,与绝对浓度法比较,硝酸盐还原试验敏感性为96．5％以上,特异性100％;该方法比传统绝对浓度法平均提前3周有结果;硝酸盐还原法的平行试验表明,试验重复性好,符合率为100％。痰标本硝酸盐还原试验在第10-20天能有结果,与痰标本罗氏培养后的分离株的绝对浓度法比较,硝酸盐还原试验敏感性为66．7％以上,特异性100％。结论硝酸盐还原试验可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

结核分枝杆菌耐RFP快速检测的方法研究

目的应用PCR—SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变，评价此方法用于结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药性的意义。方法采用PCR—SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果50例耐RFP菌株中有45例PCR—SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别，与药敏试验结果做对比，PCR—SSCP检测敏感性为90％，特异性为100％；12例敏感菌株与H37Rv条带一致，35份肺结核病人痰标本，21份痰PCR扩增阳性，15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别，而且PCR—SSCP28份图谱与H37Rv有差别，阳性率为80％。结论PCR—SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行，有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定，并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。     

结核分枝杆菌的优化PCR检测方法的研究

〔目的〕的建立了检测结核分枝杆菌的高灵敏度和高特异性PCR扩增体系。[方法]以国内结核病人常见病原菌-结核分枝杆菌、牛分枝杆菌特异性抗原Pab编码基因上的419bp段作为扩增靶序列,扩增引物序列为5’-ACC、ACC、GAG、CGG、TTC、CCC、TGA-3’、5’-GAT、CTG、CCG、GTC、GTC、CCA、GGT-3’。〔结果〕变性温度选择69℃-70℃。PCR扩增体系的成份经优化,选择引物浓度为0.30μmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,MgC12浓度为3.5mmol/L。〔结果〕该体系对11株标准菌株和12株临床分离菌株提纯的染色体进行扩增,其中卡介苗、结核分枝杆菌、牛分枝杆菌的扩增为阳性,其他分枝杆菌为阴性。〔结论〕以提纯的染色体DNA作模板,该体系可检出5fg结核杆菌染色体DNA,相当于一个结核分枝杆菌。     

两种结核分枝杆菌快速检测方法的比较

目的比较荧光定量PCR检测和直接扩增检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在国境口岸卫生检疫工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光定量PCR和直接扩增检测47份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与液体培养结果进行比较。结果荧光定量PCR法与直接扩增法对结核分枝杆菌检测敏感性分别为46.7%和100%,特异性分别为81.2%和84.4%。结论结核分枝杆菌直接扩增检测是一种较为敏感而特异的快速检测方法,在国境口岸卫生检疫部门具有重要的应用价值。     

结核分枝杆菌聚合酶链反应检测技术进展

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Myco-bacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种传染性疾病。根据最新的《世卫组织全球结核控制报告》,2009年约有940万结核新发病例,170万人因结核病而死亡[1]。早期诊断并及时治疗是预防TB发病率和死亡率的关键。目前,TB实验室诊断方法以痰涂片检查为主,价廉且快速,但缺乏特异性和敏感性。传统的微生物培养法虽然仍被视为诊断TB的金标准,但费时(6周～8周),自动化或半自动化的液体培养体系也需要14 d左右,然     

复合PCR-SSCP检测巨噬细胞内结核分枝杆菌耐药性的探讨

[目的]检测结核分枝杆菌耐药性。[方法]复合PCR-SSCP检测分离培养结核菌株及分离分离结核病患者标本中巨噬细胞内TB-DNA的耐药基因变异情况。[结果]PCR检测TB-DNA阳性率为90．8％；复合PCR-SSCP检测分离菌株总耐药率为90．O％(18／20)，其中耐单药、耐2药和耐3药突变率分别为20．0％(4/20)、40．O％(8／20)和30．0％(6／20)。而对PCR扩增到的结核病患者标本中巨噬细胞内TB-DNA的检测总耐药率为72．7％(48／66)；其中耐单药、耐2药和耐3药突变率分别为19．7％(13／66)、36．4％(24／66)和16．7％(11／66)。[结论]复合PCR—SSCP测定分离分纯结核病患者巨噬细胞内TB-DNA及分析其耐药性变异，可为病原、耐药和耐多药结核病诊断的有效方法之一。     

2004～2007年山东省部分结核分枝杆菌耐药情况检测分析

[目的]了解山东省结核病病原的耐药情况。[方法]对2004年5月至2007年12月山东省12个县级结核分枝杆菌防治所分离的2 637株结核分枝杆菌复合群的药敏检测情况进行分析。[结果]检测2 637株菌,对4种一线抗结核药物的总耐药率为18.85%,初始耐药率为17.83%,获得性耐药率为29.65%,耐多药率为2.43%。检测耐多药结核分枝杆菌中传代生长的41株菌株,对4种二线抗结核药物的总耐药率为72.61%,符合广泛耐多药定义的占17.07%。初治病人和复治病人耐药率和耐多药率,0~17岁组、40~59岁组、60岁以上组、18~39岁结核病病例分离的菌株间的差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]山东省12个县级结核病防治所分离的结核分枝杆菌复合群耐药和耐多药率均较高。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因的研究

目的：探讨结核分枝杆菌异烟肼（INH）耐药与KatG基因突变和缺失的关系。方法：采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR－SSCP）技术对结核分枝杆菌临床分离株的KatG基因进行分析。结果：28株INH敏感株KatG基因全部扩增阳性，其中1株（3．6％）SSCP泳动异常；30株INH耐药株中，3株（10．0％）KatG扩增阴性，27株KatG扩增阳性，其中20株（74．1％）SSCP泳动异常。与传统药敏试验相比，本法检测INH耐药的敏感性为76．7％，特异性为96．4％。结论：KatG基因突变和缺失可能是INH耐药的重要分子机理，PCR—SSCP有助于KatG基因的快速检测。     

结核分枝杆菌耐多药情况分析

目的：评估上海市近年来耐多药结核病（MDR—TB）发生情况。方法：对本市2749株结核分枝杆菌耐药性测定结果进行分析。结果：共查出234株耐多药菌株，其中新发病。组156株（6．8％），复治病人组35株（18．9％），外地病人组43株（15．8％）。234株耐多药菌株中，耐2药133株（56．8％），耐3药66株（28．2％），耐4药35株（15．0％）。耐2药菌株中，以HR耐药为主，占27．8％。耐3药菌株中，以HRS耐药为主，占66．7％。复治病人和外地病人组的耐多药率显著高于新发病人组，P＜0．01。结论：必须加强对复治病人和外地病人的管理和治疗。     

青海省236株结核分枝杆菌耐药现状研究

目的 通过对青海地区236株结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis,M.tb）进行分离培养与耐药性检测,了解青海地区结核病（tuberculosis,TB）的耐药现状,为青海地区结核病防治提供参考依据。方法 对青海地区分离的236株结核分枝杆菌用改良罗氏培养基进行培养,采用比例法进行耐药性检测,分析该地区结核病耐药状况与人口学特征的关系,并对结果进行统计分析。结果 236株结核分枝杆菌总耐药率为55.93%（132/236）;四种一线药物耐药率由高到低依次是异烟肼（isoniazid,INH）为43.22%,链霉素（streptomycin,SM）为38.14%,利福平（rifampin,RFP）为37.29%,乙胺丁醇（ethambutol,EMB）为28.81%;单耐药结核病（single drug resistance tuberculosis,SDR-TB）比例为12.71%;耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）和广泛耐药结核病（extensivelydrug resistant tuberculosis,XDR-TB）所占比例分别是30.93%（73/236）和1.27%（3/236）;青海地区的结核分枝杆菌耐药状况与地区和年龄有关（均有P<0.05）,与性别和民族无关（均有P>0.05）。结论 青海地区耐药结核病比率高于全国水平,要加强该地区结核病的预防控制,对结核病患者进行规范化治疗。     

吉林省结核分枝杆菌对乙胺丁醇耐药状况分析

目的获得吉林省结核病乙胺丁醇耐药本底数据,评价现行结核病控制策略的效果。方法按照世界卫生组织/国际防痨和肺病联合会（WHO/IUATLD）的通行标准,采用分层整群抽样方法,获得覆盖全省各地区结核分枝杆菌,对其进行菌型鉴定及乙胺丁醇（EMB）药物敏感性测试。结果收集到临床分离的结核分枝杆菌菌株1 772株,EMB总体耐药率为6.83%;其中来自初治涂阳肺结核患者菌株为1 175株（66.14%）,EMB耐药率为4.34%;来自复治涂阳肺结核患者菌株597株（33.69%）,复治耐药率为11.73%。结论吉林省结核分枝杆菌EMB总体耐药情况较高,今后须进一步加强耐药结核病的防治及临床用药指导。     

青海地区结核分枝杆菌快速检测及耐药特征研究

目的探讨青海地区耐药结核分枝杆菌(MTB)的相关基因型特点,为开展耐药结核病快速诊断提供依据。方法选择2011年6月-2012年12月西宁市区、农村和农牧区结核病患者的MTB标本各300份,采用MTB微量最低抑菌浓度(MIC)法对耐药结核病进行快速诊断,同时用传统的罗氏药敏法作为对照,采用测序方法分析耐药MTB在不同人群中的分布率,了解青海地区MTB耐药的基因突变特征,基因突变分布和主要流行突变位点。结果西宁市区与农牧区单一耐药及多耐药MTB耐药率比较,牧区明显高于西宁市区和农村,差异有统计学意义(P<0.05);rpoB、katG、gyrA突变率西宁市区分别为52.83%、52.83%、37.74%,农村分别为70.97%、62.90%、45.16%,牧区分别为92.55%、86.17%、81.91%,牧区的基因突变率与西宁市区、农村比较,差异有统计学意义(P<0.05);利福平最常见的突变位点为drpoB(531)占43.66%,异烟肼最常见的突变位点为katG(315),占61.27%;氧氟沙星最常见的突变位点为gyrA占59.52%。结论对青海地区耐药结核分枝杆菌的耐药特征有了进一步了解,为临床医师治疗结核病合理选药提供了依据。     

鄞州区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解鄞州区肺结核患者结核分枝杆菌的耐药水平,为本区的结核病诊治提供参考依据。方法对鄞州区疾病预防控制中心2008—2009年收集的结核分枝杆菌用WHO推荐的比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)和乙胺丁醇(E)的耐药性检测。结果 299例初复治患者的痰培养分离的结核分枝杆菌,总耐药率为30.77%,初始耐药率和获得性耐药率分别为27.48%和54.05%;耐多药率为6.69%,其中初始和获得性耐多药率分别为4.20%和24.32%。4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为异烟肼(19.40%)、链霉素(16.05%)、利福平(9.36%)和乙胺丁醇(6.02%)。不同性别、年龄、户籍的耐药率差异无统计学意义。结论鄞州区结核病耐药形势依然严峻,应继续加强结核病的防治工作。     

嘉兴市２７７株结核分枝杆菌耐药性监测分析

摘要：目的　了解结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药性,初步评价嘉兴市近年来结核病的耐药趋势。
方法　对嘉兴市第一医院２００９－２０１１年期间的结核病患者培养阳性菌株进行菌群鉴定及采用比例法对４种
一线抗结核药物异烟肼（Ｈ）、利福平（Ｒ）、链霉素（Ｓ）、乙胺丁醇（Ｅ） 进行药物敏感性测定,用ＳＰＳＳ
１７．０统计软件进行χ
２ 检验,分析结果。结果　本研究共纳入结核分枝杆菌２７７株,总耐药率为２７．０８％,
耐多药率为１１．１９％;初治患者和复治患者耐药率分别为１７．６２％和５６．７２％,耐多药率６．１９％和２６．８７％,
两者差异均有统计学意义（χ
２＝４．９６,犘＝０．０２６;χ
２＝２１．８５,犘＜０．０１）。结论　嘉兴市结核分枝杆菌的
耐药情况依然严峻,尤其复治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,加强对复治肺结核患者高
质量的全程监督短程化疗。
关键词：结核分枝杆菌;耐药性;分析
中图分类号：Ｒ３７８．９１＋１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０６ ０５５０ ０３     

679株结核分枝杆菌药敏结果分析

目的:了解衢州地区结核分枝杆菌耐药情况,指导临床医生合理选择抗结核药物和制定个性化的治疗方案。方法:采用比例法对694株痰培养阳性菌株进行一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(REF)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)和二线药物卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFX)的耐药性检测,利用鉴别培养基对分枝杆菌进行初步菌种鉴定。结果:679株结核分枝杆菌药敏的总耐药率21%,耐多药率5.2%,六种抗结核药物的耐药情况分别是异烟肼12.67%,链霉素10.46%、氧氟沙星7.95%、利福平6.19%、乙胺丁醇2.36%、卡那霉素2.06%.复治病人的总耐药率、耐多药率和单药耐药率明显高于初治病人。结论:应加强肺结核初治病人的规范化治疗,加大对复治结核病人的治疗和管理,预防耐药病人尤其是耐多药病人的产生和传播。     

吉林省1772株结核分枝杆菌卡那霉素耐药状况分析

目的完善吉林省结核病耐药谱分析,采用国际通用的比例法获得吉林省结核病卡那霉素耐药资料,评价本省结核治疗临床常用药效果。方法按照国际通用标准,采用100%诊断中心抽样方法,对分离培养阳性菌株进行菌型鉴定及卡那霉素（KM）药物敏感性测试。结果收集到可供分析的结核分枝杆菌分离株1 772株,卡那霉素的耐药率为4.91%;其中来自初治涂阳肺结核患者的菌株为1 175株（66.14%）,卡那霉素耐药率为3.74%;来自复治涂阳肺结核患者菌株597株（33.69%）,卡那霉素耐药率为7.20%。结论吉林省结核病卡那霉素初、复治耐药率均高于全国平均水平,应加强二线抗结核药物的规范、合理使用。     

月经血结核杆菌检测在女性生殖器结核诊断中的作用

目的探讨月经血结核杆菌检测在女性生殖器结核诊断中的作用。方法对2009年10月—2014年3月145例不孕及复发流产患者,行结核菌素PPD试验、月经血结核杆菌培养、抗酸染色及荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,并与宫、腹腔镜检查结果相对照。结果经宫、腹腔镜确诊生殖器结核21例,确诊率14.5%,其中不孕16例,复发性流产5例。确诊患者中,月经血结核杆菌荧光定量PCR检测阳性3例,阴性18例,培养、抗酸染色均无阳性。124例非生殖器结核中,月经血结核杆菌荧光定量PCR检测阳性1例,培养、抗酸染色均阴性。月经血结核杆菌荧光定量PCR方法诊断生殖器结核的灵敏度14.3%,特异度99.2%。21例生殖器结核患者中,PPD强阳性18例,124例非生殖器结核患者中强阳性1例。结论月经血结核杆菌荧光定量PCR检测灵敏度高于传统检测方法,结合PPD试验可以提高阳性率,但能否用于生殖器结核的诊断还需进一步研究。     

基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用

目的探讨基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用价值,以及不同类型标本检出率的差异。方法应用基因芯片技术,对患者的痰液、脓液、胸腹水、脑脊液等标本进行分枝杆菌属DNA检测,进一步对结核分枝杆菌阳性标本进行耐药性分析。结果 900份临床样本的鉴定结果总阳性率为10.6%,洗肉水、穿刺物、脓液等阳性率较高;进一步对40份结核阳性标本进行耐利福平基因rpoB及耐异烟肼kat Gi、nhA基因检测,共有9例检测到了突变的耐药基因。结论基因芯片检测系统可以直接进行分枝杆菌属鉴定及耐药性分析,适用于不同类型标本,简便快速,灵敏度高,特异性好。     

唐山地区结核分枝杆菌耐药及基因突变特征

目的 了解唐山地区结核分枝杆菌的耐药特征及其药物靶基因位点突变特征。方法 问卷调查193名研究对象的一般情况和疾病相关情况,并分析其特征与分离菌株药敏类型的相关性;抗酸染色和胶体金法确定结核分枝杆菌感染;采用试剂盒鉴定药敏类型;通过测序鉴定靶基因位点突变情况。结果 不同药敏类型菌株宿主的BMI、职业、居住地和抗生素用药史的差异具有统计学意义（P＜0.05）;193株临床分离株对一线、二线药物耐药率为37.31%和75.65%;耐药率排序前三位的药物为阿莫西林（53.37%）、氯法齐明（39.38%）和对氨基水杨酸（25.39%）;总突变率前三位分别为embB 306位点（80.66%）,ropB 531位点（72.62%）和rpoB 526位点（55.36%）;60%的基因位点只测得一种突变类型。结论 唐山地区结核分枝杆菌耐药率较高,药物靶基因位点突变率与其他研究报道相近但突变类型较为单一。