儿科多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱β-内酰胺酶基因研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性性及超广谱β-内酰胺酶基因携带情况,为临床抗感染治疗提供依据。方法收集2016年日照市妇幼保健院儿科分离的鲍曼不动杆菌38株,采用纸片扩散法对分离菌株进行药物敏感性试验。对其中21株多重耐药菌进行PCR检测PER、SHV、TEM、CTX和VEB基因携带情况。结果38株鲍曼不动杆菌,对多粘菌素B、替加环素均敏感,对头孢哌酮-舒巴坦(34.2%)、阿米卡星(36.8%)耐药率较低,对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类耐药率均>50%。在21株多重耐药菌中,16株SHV型基因阳性,8株PER型基因阳性,未检出TEM、CTX和VEB基因。结论儿科鲍曼不动杆菌多重耐药与携带SHV、PER基因相关。     

呼吸系统不动杆菌感染的多重耐药性与耐药基因的检测

目的　检测引起呼吸系统感染的不动杆菌多重耐药性及耐药基因。方法　采用标准的纸片扩散法 (KirbyBauer法 )检测不动杆菌对 16种抗生素耐药状况 ,用单纸片扩散法检测ESBLs表型 ,并用PCR方法对多重耐药菌株进行超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)TEM、SHV、OXA、IMP、CTX M耐药基因的检测。结果　 10 8株不动杆菌中77.78%对 >2种的抗生素具有耐药性 ,其中有 8株菌对 15种抗菌药物均耐药 ;10 8株不动杆菌检出ESBLs表型阳性 2株 ,且均为多重耐药菌株 ;2株ESBLs表型阳性的耐药基因为TEM型 ,扩增产物长 5 35bp ,SHV、OXA、IMP、CTX M耐药基因均未检出。结论　不动杆菌对抗生素已产生明显多重耐性药 ,对有些常规使用的抗生素正向耐药方面转变 ,山东济南地区不动杆菌的ESBLs耐药基因可见TEM型。     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 进行多药耐药铜绿假单胞菌株中β-内酰胺酶耐药相关基因存在情况及耐药机制研究.方法 用聚合酶链反应检测临床分离的22株多药耐药铜绿假单胞菌中的12种β-内酰胺酶基因(IMP、GIM、SPM、VIM、TEM、GES、VEB、PER、DHA、CARB、OXA-10、SHV).结果 22株菌中CARB基因全部阳性(100.0%),IMP基因阳性21株(阳性率95.5%),TEM基因阳性17株(阳性率77.3%),VEB基因仅3株阳性(13.6%),VIM基因1株阳性(4.5%),其余基因无阳性检出.结论 铜绿假单胞菌中CARB及IMP基因携带率高,常常同时携带其他耐药基因,导致菌株出现多药耐药性,给临床诊治和医院感染监控带来极大的困难.     

4种非发酵糖革兰阴性杆菌β-内酰胺酶基因研究

目的分析解放军第98医院临床分离的4种非发酵糖革兰阴性杆菌中β-内酰胺酶基因存在状况。方法从临床分离鲍氏不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、嗜麦芽寡养单胞菌19株和黄杆菌属15株,采用PCR及序列分析的方法分析9种(群)β-内酰胺酶基因TEM、SHV、OXA、CTX-M群、PER、VEB、IMP、VIM、GES。结果鲍氏不动杆菌和铜绿假单胞菌中TEM基因阳性率分别为100.0%和66.7%;鲍氏不动杆菌有18株(30.0%)SHV阳性,17株为SHV-12型ESBLs(GenBank登录号:AY259163),另1株为一种新亚型,被命名为SHV-48;铜绿假单胞菌有1株(3.3%)OXA阳性,为OXA-10型ESBLs;其余基因均阴性。结论我院非发酵糖革兰阴性杆菌中至少存在4种β-内酰胺酶基因,基因型分别为TEM-1、SHV-12、SHV-48和OXA-10。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的 耐药性和耐药机制研究

摘要:目的　了解亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌（IRAB）和铜绿假单胞菌（IRPA）的耐药性和耐药机制,为临床合理使用抗生素及控制院内感染提供依据。方法　收集2009年至2013年某院分离到的IRAB和IRPA,采用常规方法进行细菌学鉴定,采用K-B法进行药敏试验;对相关常见耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）及序列分析。结果　共收集到136株临床分离的IRAB和IRPA,耐药菌株主要分离自ICU病区和呼吸内科。其中IRAB占59.6%（81/136）,IRPA占42.1%（55/136）;两者的5年平均检出率分别为15.2%和8.6%,均呈逐年上升。标本种类中,以呼吸道标本（痰和肺泡灌洗液）为主,占88.9%（121/136）。泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）7株（8.6%）,泛耐药铜绿假单胞菌（PDR-PA）5株（9.1%）;泛耐药菌株均来自ICU。头孢派酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌具有较强的抗菌活性,耐药率分别为22.2%和32.7%,未检出多粘菌素B不敏感鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。81株鲍曼不动杆菌仅检出OXA-23型和OXA-51型β-内酰胺酶基因,阳性率分别为87.7%（71/81）和100.0%（81/81）。55株铜绿假单胞菌中,检出IMP型金属β内酰胺酶基因,阳性率为14.5%（8/55）;OprD2 基因缺失率为76.4%（42/55）。结论　IRAB和IRPA多重耐药性严重;OXA-23和OXA-51型β-内酰胺酶基因多重耐药鲍曼不动杆菌产生的主要机制;IMP型金属β内酰胺酶和OprD2 基因缺失是铜绿假单胞菌的主要耐药机制。     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因与转座子、整合子遗传标记研究

目的 研究铜绿假单胞菌连续分离株的β-内酰胺酶基因、孔膜蛋白oprD2基因及整合子和转座子介导的各种耐药基因的分布状况.方法 纸片扩散法测定铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法检测20株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、孔膜蛋白oprDz基因、Tn21/Tn501型转座子编码基因merA、Ⅰ类整合子编码基因qacE△l-sull;采用PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 20株铜绿假单胞菌检出TEM、OXA-2群、OXA-10群、CARB 4种p.内酰胺酶基因.未检出质粒型AmpC酶和金属β-内酰胺酶基因;膜孔蛋白编码基因oprD:均为缺失型,Tn21/Tn501型转座子遗传标记MerA阳性7株(35.0%),Ⅰ类整合子遗传标记qacE△l-sull阳性10株(50.0%),2号株作OXA-2群阳性基因测序,与OXA-21型接近,但仍存在2个氨基酸序列差别,可确认为新亚型.结论 多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶类抗菌药物的耐药主要与TEM、OXA、CARB型耐药基因有关,整合子与转座子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多药耐药,并发现1种铜绿假单胞菌OXA基因新亚型.     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因检测及耐药特性分析

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌的耐药基因及其耐药特性。方法对100株多重耐药铜绿假单胞菌进行药敏试验,并检测β-内酰胺酶编码基因、Opr D2基因、氨基糖苷类修饰酶基因等。结果发现多重耐药铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦敏感性最低,对庆大霉素敏感性最高,差异有统计学意义(P0.05)。β-内酰胺酶编码基因:TEM、CTX-M-1、DHA检出率分别为29%、61%、8%,SHV、PER、OXA-10、VEB、GES、IMP、CARB和VIM基因未检出。Opr D2基因的检出率仅为8%;氨基糖苷类修饰酶基因:aac(6')-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ的检出率分别为60%、35%、32%,aac(6')-Ⅰ基因未检出。结论通道蛋白Opr D2缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,本研究发现多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因以aac(6')-Ⅱ检出率最高。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析

目的:调查我院多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、外膜通道蛋白D2(OprD2)基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因的存在状况。方法:采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的药物敏感性,筛选出100株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶编码基因、OprD2基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因。结果:100株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1群、TEM、DHA的检出率分别为54.0%、30.0%、9.0%,未检出SHV、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、IMP和VIM基因;OprD2基因的缺失率为61.0%;氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ的阳性率分别为59.0%、33.0%、25.0%,未检出aac(6′)-Ⅰ;耐消毒剂基因qacE△1-sul1的检出率为15.0%。结论:我院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,对β-内酰胺类抗生素的耐药主要与CTX-M-1群、TEM、DHA型耐药基因有关,对亚胺培南耐药主要与OprD2基因缺失有关,对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与aac(6′)-Ⅱ、a...     

β-内酰胺酶基因与铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类药物的关系研究

目的探讨β-内酰胺酶基因与铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类药物的关系,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对临床分离的690株铜绿假单胞菌进行回顾性分析;并选取52株耐碳青霉烯类抗生素的铜绿假单胞菌,利用PCR法检测其中8种主要β-内酰胺酶编码基因的分布情况。结果 690株铜绿假单胞菌中,临床分布以痰标本为主,占56.52%(390/690),其次为伤口分泌物,占11.88%(82/690);病区分布以ICU检出率最高,占16.23%(112/690),其次为神经外科和呼吸内科,分别占13.91%(96/690)和10.58%(73/690);在检测的15种抗生素中,耐药率超过50%的达9种(60%),耐药率最高为氨苄西林/舒巴坦(98.00%),其次为复方新诺明(93.00%)和替卡西林(92.00%),耐药率最低为多粘菌素E(6.00%);β-内酰胺酶基因的PCR结果显示,IMP阳性25份,VIM阳性17份,IMP和VIM均阳性7份,OXA阳性3份,其它β-内酰胺酶耐药基因(SPM,TEM,PER,GES,SHV)均阴性。结论临床分离铜绿假单胞菌主要来自呼吸道标本,科室分布以ICU、神经外科和呼吸科为主,其耐药情况非常严重;本地区铜绿假单胞对碳青霉烯类抗生素耐药可能主要与β-内酰胺酶基因IMP和VIM相关。     

鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶耐药基因分子流行病学研究

目的 分析自临床分离的产SHV型β-内酰胺酶(β-lactamases,BLA)多重耐药鲍曼不动杆菌的SHV型BLA耐药基因序列并确定其所产BLA耐药基因亚型。方法 在2000年7月至2002年12月间从临床分离60株鲍曼不动杆菌,经药敏试验、超广谱β-内酰胺酶(FSBLs)表型确证试验和SHV型BLA耐药基因的聚合酶链反应(PCR)检测,筛选出2株具有多重耐药特性、SHV基因型均阳性的分离株(HZ02、HZ10株),对耐药基因进行序列分析。结果 在2001年6月至2002年1月间分离到的18株(30.0％)鲍曼不动杆菌质粒上携带SNV型BLA耐药基因;NZ02株和NZ10株的SHVPCR扩增阳性,其基因片段分别含825个和833个核苷酸,与Nuesch-lnderbinen等首先发现的SHV-12亚型ESBLs编码基因序列(GenBank注册号:X98105)完全相同。结论 30.0％鲍曼不动杆菌质粒上携带SHV型(超广谱)β-内酰胺酶耐药基因并引起一次医院感染爆发。同时证实在我国浙江省湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌中存在产SHV-12亚型ESBL_s耐药基因菌株。     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌相关耐药基因监测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌中常见的β-内酰胺酶基因的分布情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测了77株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM、SHV和CTX-M等三种β-内酰胺酶基因,并进行了DNA测序。结果 50株产ESBLs的大肠埃希菌中,41株TEM基因阳性(82.0%),7株SHV基因阳性(14.0%),16株CTX-M基因阳性(32.0%),21株菌两种以上基因型同时阳性。27株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,21株TEM基因阳性(77.8%),24株SHV基因阳性(88.9%),3株CTX-M基因阳性(11.1%),16株菌两种以上基因型同时阳性。结论产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中携带多种β-内酰胺酶基因,且以TEM和SHV型较为流行。     

多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因研究

目的调查鲍氏不动杆菌中β-内酰胺类药物耐药相关基因存在状况。方法收集张家港市第一人民医院2008年3～11月住院患者临床标本中分离的鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析17种β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶、碳青酶烯酶和AmpC酶等基因。结果 20株鲍氏不动杆菌检测到TEM阳性15株(75%),PER阳性3株(15%),ADC阳性17株(85%),且14株TEM和ADC同时阳性(70%),但是其余14种基因均未检出;1号株ADC基因是新亚型,密码子由CCA(编码脯氨酸)变为ACA(编码苏氨酸),暂以ADC-like命名。结论调查结果表明,鲍氏不动杆菌携带TEM、PER和ADC基因是β-内酰胺类药物耐药的主要原因,发现ADC-like基因是国内外首次报道。     

鲍氏不动杆菌耐药性及相关耐药基因检测分析

目的检测分析鲍氏不动杆菌耐药性及相关耐药基因。方法采用K-B法(CLSI 2008年标准)测定鲍氏不动杆菌临床分离株耐药性;PCR方法检测TEM、SHV、CTX-M、I MP、VI M、OXA-23、OXA-24耐药基因以及Ⅰ、Ⅱ类整合酶。结果 130株鲍氏不动杆菌,除阿米卡星和碳青霉烯类外,对其他抗菌药物耐药率非常高,TEM、SHV、CTX-M、Int1、Int2基因阳性率分别为68.5%、10.8%、17.7%、75.4%、0;51株耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌中I MP、VI M、OXA-23、OXA-24基因阳性率分别为25.5%、19.6%、72.5%、0。结论鲍氏不动杆菌耐药性较高,携带TEM型β-内酰胺酶、OXA-23、I MP和VI M型碳青霉烯酶基因和Ⅰ类整合酶;产生OXA-23型碳青霉烯酶和金属酶是医院鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药的主要机制。     

吴江地区多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因携带情况及同源性

目的了解吴江地区临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)碳青霉烯酶基因携带情况和同源性。方法收集吴江地区3所综合性医院2010年1月—2013年12月临床分离的非重复MDRAB 44株,测定其最低抑菌浓度(MIC);采用聚合酶链反应（PCR）扩增碳青霉烯酶基因OXA 51、OXA 23、OXA 24、OXA 58、IMP、TEM、SHV和GES,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性。结果44株MDRAB主要来源标本为痰（占93.18%）,主要分布在重症监护病房（ICU）、呼吸科和神经外科,各占45.45%、27.27%和13.64%;MDRAB对米诺环素和多粘菌素B均敏感,对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星耐药率均为100.00%,对亚胺培南和美罗培南耐药率均为97.73%。44株MDRAB均检出OXA 51、OXA 23和TEM基因,其中12株菌GES基因阳性,OXA 58和SHV基因阳性各1株,未检测到OXA 24及IMP基因;MDRAB分为A—G 7个型别,分别为19、3、9、3、1、4、5株。A型主要来源于吴江地区的两所大型综合性医院（吴江第一人民医院和盛泽医院）,吴江第一人民医院未发现B、D和E型;E型仅1株,分布在永鼎医院,其余型别散在分布。结论吴江地区临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药严重,基因OXA 23和TEM是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因,并以A、C型为主,呈克隆性传播。     

肿瘤医院产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌分布及基因型研究

目的了解医院感染的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌医院感染的临床分布及其基因型特征。方法用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs大肠埃希菌80株,应用PCR方法分别扩增产酶菌株的TEM、SHV和CTX-M 3种β-内酰胺酶基因,并对PCR扩增结果及ESBLs株临床分布进行分析。结果 PCR扩增结果显示,CTX-M、TEM和SHV基因的阳性率分别为79.5%、12.8%和18.2%;42.3%的菌株同时携带多个基因;产ESBLs大肠埃希菌广泛分布于各个临床科室,其中普外科占32.5%,肝胆外科和重症监护病房均占23.8%;标本分布较为集中,41.3%来自腹腔引流液,23.8%来自呼吸道标本,12.5%来自尿液。结论医院感染中,产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型是CTX-M,腹腔引流液、呼吸道标本、尿液是其主要标本来源,CTX-M型产ESBLs菌分布广泛,应特别加强对它的监测,预防医院感染暴发流行。     

多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白基因的研究

目的 调查多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白oprD2基因的存在情况.方法 收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A～D 4类33种β内酰胺酶基因和oprD2膜孔蛋白基因.结果 20株MDRPA中A类β-内酰胺酶基因检出TEM(100.0％),B类β-内酰胺酶基因检出IMP(75.0％),C类β-内酰胺酶基因检出PDC(100.0％)和DHA (30.0％),D类β内酰胺酶基因无检出;oprD2膜孔蛋白基因均未检出,提示膜孔蛋白基因编码缺失;1号株TEM基因PCR产物经测序证实为TEM-1基因,IMP基因PCR产物经测序证实为IMP-1基因;9号株DHA基因PCR产物经测序证实为DHA-1基因.结论 产TEM、PDC、IMP型基因少数并产DHA型β-内酰胺酶和膜孔蛋白基因编码缺失,是该组MDR-PAE对β-内酰胺类药物产生耐药的主要原因.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因分析

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPa）β-内酰胺类酶的表达情况,比较产酶菌和非产酶菌的耐药性,并探讨产AmpC酶基因对其耐药表型的影响。方法采用EDTA协同试验检测β-内酰胺类酶,PCR扩增β-内酰胺类酶耐药基因及其序列测定确定其基因型。结果 112株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产β-内酰胺类酶菌85株（75.9%）,产酶菌株的耐药性比非产酶菌株的耐药性明显严重,对替卡西林/克拉维酸、头孢吡肟、头孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星耐药率均大于35.3%;耐药基因TEM、SHV、OXAI、MP-1、AmpC、VIM-2阳性率分别为53.57%、10.17%、2.71%、4.46%、46.43%、16.96%,且有42.85%的菌株表现为多基因耐药。结论产β-内酰胺酶菌株对大多数抗生素的耐药性明显高于非产酶菌株,耐药基因以产TEM、AmpC为主,少部分产SHV、OXA、IMP-1、VIM-2,产β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制。     

产ESBLs大肠埃希菌基因型分析

目的 了解医院感染的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌医院感染的临床分布及其基因型特征。方法用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs大肠埃希菌151株，应用PCR方法分别扩增产酶菌株的TEM、SHV和CTX-M3种β-内酰胺酶基因，并对PCR扩增结果及ESBLs株临床分布进行分析。结果PCR扩增结果显示，CTX-M、TEM和SHV基因的阳性率分别为92．10％，49．7％和1．30％；48．3％的菌株同时携带多个基因。产ESBLs大肠埃希菌广泛分布于24个临床科室，其中普外科占23．2％，重症监护病房占10．6％。标本分布较为集中，29．8％来自尿液，24．5％来自呼吸道标本，23．9％来自穿刺液。结论医院感染中，产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型是CTX-M，尿液、呼吸道标本、穿刺液是其主要来源，产ESBLs菌分布广泛，需引起重视。     

多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白carO基因研究

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因的存在与变异.方法 收集2009年12月-2011年4月住院患者痰标本中分离的多药耐药鲍氏不动杆菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)的方法,分析37种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白carO基因.结果 20株多药耐药鲍氏不动杆菌共检出TEM、PER、ADC、OXA-23群等4种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为95.0％、25.0％、100.0％、80.0％,膜孔蛋白carO基因突变率达100.0％.结论 携带4种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白编码基因carO突变,是该组鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因.