上海市浦东地区淋病奈瑟菌分型与耐药性的相关分析

目的了解上海市浦东地区淋病病原体奈瑟双球菌的不同基因分型及各基因型与耐药性之间的对应关系。方法运用随机扩增多态性DNA(RAPD)指纹图谱对78株分离自不同患者淋球菌菌株进行区分，从分子水平对淋球菌进行基因分型，并在此基础上探讨不同的基因分型与耐药性之间的关系。结果78株淋球菌分离株RAPD图谱上相似，但各菌株基因图谱之间有明显不同DNA多态性，可将菌株区分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种基因分型，对此三种基因分型与A、B、C、D四种不同的耐药类型进行对应分析，发现耐药类型与基因型别之间存在对应关系。结论通过研究发现浦东地区淋球菌流行株有着不同的耐药特点及基因型别，耐药性与不同的基因分型之间存在着一定相关性。     

白色假丝酵母菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的建立医院感染白色假丝酵母菌的基因多态性DNA分型方法,了解白色假丝酵母菌医院感染的分子流行病学情况,并探讨其基因多态性与真菌药物敏感性检测结果的可能关系。方法收集临床各病区送检的住院患者白色假丝酵母菌感染标本30份和其相应患者资料、抗真菌药物敏感性检测结果,采用经优化的随机扩增多态性(RAPD)DNA方法,对30株白假丝酵母菌进行基因多态性分型,利用Phylip3.67聚类分析软件分别用邻接法和算术平均数的非加权成组配对法,对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果随机引物OPE-03进行RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物;30株不同来源的菌株可大致分为3种亲缘关系;两种聚类分析结果相同,提示该实验结果可靠。结论白色假丝酵母菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关;RAPD多态性可能与其耐药性有关;不同聚类分析方法的RAPD图谱分析结果相同。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的基因多态性研究

目的应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对耐亚胺培南铜绿假单胞菌进行基因多态性研究。方法对医院临床分离的8株耐亚胺培南铜绿假单胞菌进行随机引物聚合酶链反应(PCR)扩增,扩增产物进行电泳和聚类分析。结果耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药表型相同,但基因型相同,绝大多数基因型不同。结论通过RAPD分析了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌基因型的特性,明确耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的表型与基因型的关系,为该菌的感染控制提供分子流行病学依据。     

弗氏柠檬酸杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱. 方法以优化的反应体系及单一随机引物L8,对临床分离的116株C.freundii进行RAPD分析,并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱. 结果 116株临床分离C.freundii共得78种RAPD型. 结论 RAPD法可将C.freundii分型78种.     

副溶血性弧菌食源性疾病分离株的RAPD分子分型研究

目的：探讨副溶血性弧菌食源性疾病分离株的基因多态性。方法：采用随机扩增多态性分析(RAPD)对副溶血性弧菌食源性疾病分离株进行分子分型，结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图，对菌株进行基因多态性分析。结果：所采用引物能从副溶血性弧菌扩增出特异性的DNA条带，分型效果较好，所有46株副溶血性弧菌中大部分的RAPD结果经聚类分析可分为3个主要聚类群，较好地反应了不同血清型和不同来源菌株的亲缘关系。结论：可应用RAPD方法进行食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

开放性伤口分离阴沟肠杆菌的耐药性及多态性DNA分型研究

目的了解地震后群体受伤患者开放性伤口分离阴沟肠杆菌的耐药性,并对其同源性进行研究,为群体外伤紧急医疗救治过程中是否存在医院感染提供科学依据。方法对汶川地震后14例开放性骨折或骨筋膜室综合症受伤患者的创面分离阴沟肠杆菌进行耐药性分型;同时留取菌株,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)指纹图基因分型方法进行同源性分析。结果 6株阴沟肠杆菌的耐药性分型分为3型,RAPD分型分为4型,耐药谱分型相同的菌株RAPD分型不一定相同;同一患者上、下肢分泌物中分离的菌株同源性为100.0%;有5株菌株的同源性>90.0%,菌株间的差异非常小,可能存在耐药菌株的相互传播。结论群体受伤患者伤口感染细菌耐药性强,且伤口感染的同源性较高,存在医院感染的可能;因此,在突发灾难救援工作中,应重视医院感染控制工作,避免耐药细菌的传播和流行。     

重症监护室MRSA耐药性及RAPD分析

目的:调查重症监护室耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及分子流行病学情况,为控制感染提供科学依据。方法:ICU分离的金黄色葡萄球菌采用mecA基因检测法确定MRSA,对筛选出的MRSA采用纸片法检测其耐药性,用随机扩增多态性DNA(RAPD)进行分子流行病学分析。结果:MRSA的分离率为58.5%,对多种抗生素均耐药,没有发现耐万古霉素和替考拉宁的菌株。24株MRSA经RAPD分型,均获得稳定的条带,可分为四型,以Ⅱ型为主,共检出15株。结论:ICU分离MRSA菌株具有多重耐药性,应根据药敏试验结果合理选用抗生素进行治疗;通过RAPD分型研究,可了解MRSA的基因型流行特征,为控制感染提供分子流行病学依据。     

重庆市老年中心铜绿假单胞菌流行病学分型研究

目的对重庆市老年中心引起医院感染的铜绿假单胞菌(PAE)进行流行病学分型研究,了解其流行与耐药,以便更好地控制其引起的医院感染.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对重庆市老年中心分离的24株PAE进行RAPD基因分型.结果24株PAE共得RAPD 14型,分型率100%;同一病区不同患者分离出的PAE未检出相同基因型的PAE,3个不同病区间未检出相同RAPD型别的PAE;7例感染个体连续收集的PAE有5例RAPD指纹图谱完全一致,2例出现跳跃性指纹图谱,且与其他分型指纹图谱不相同.结论RAPD能满足对PAE进行分子流行病学分型;通过分型可判断内原性、外源性或突变PAE引起的感染.     

RAPD反应条件的优化及在微生物分型中的应用

分子生物学技术已成功应用于菌属内菌株分型。基因型分型比表型分型更直接,可从根本上确定菌株遗传基础间的相互联系及变异。与聚合酶链反应(PCR)相结合的新的基因型分型方法日益受到欢迎,其中随机引物扩增多态性DNA(RAPD)正广泛应用于越来越多的微生物分型中,其以快速、简易、分辨力高等优点成为直接分析许多病原菌基因组、明确菌属间克隆来源的重要方法,尤其是用于临床爆发的研究中,但该方法对实验条件高度依赖,可重复性相对 较低。本文对RAPD实验条件的控制及应用加以综述。     

湖南地区SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的 了解湖南地区产SHV型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的检出情况,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法 收集、鉴定分离菌株,进行ESBLs检测;PCR扩增blaSHV基因;对PCR产物测序确定其基因型;并通过随机扩增多态性DNA(RAPD)进行菌株同源性分析.结果 171株多药耐药的肠杆菌科中共有26株菌携带blaSHV基因,PCR产物经测序共检出5种基因型:9株携带SHV-28、7株携带SHV12、7株携带SHV-1、2株携带SHV-11和1株携带SHV-5;RAPD结果显示,19株肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,5株阴沟肠杆菌分别为不同的RAPD类型.结论 SHV-12是湖南地区主要流行的SHV型ESBLs,并且在产SHV型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中存在菌株间的克隆传播,未发现产SHV型ESBLs的大肠埃希菌.     

Clonal identification of Aeromonas hydrophila strains using randomly amplified polymorphic DNA analysis

The suitability of arbitrary primer polymerase chain reaction (RAPD) as a typing technique was evaluated by comparing it with pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) to characterize Aeromonas hydrophila strains isolated from a cluster of hospital-acquired infections. Five isolates from patients and 10 isolates from the water supply were compared to 10 epidemiologically unrelated strains isolated from patients and rivers. Two methods were used to prepare DNA and two primers (AP3 and AP5) were selected. The discriminatory power was better with the extractive DNA preparation than the boiling method. The discrimination of closely related from less related strains by PCR using AP3 was consistent with that by PFGE: water supply of Cholet hospital contaminated with Aeromonas species was not the source of the cluster of hospital infections and only two patients were infected with clonally-related strains. RAPD using primer AP3 was simpler, cheaper, and quicker to perform than pulsed-field gel electrophoresis and is well suited for the epidemiological study of A. hydrophila isolates.     

吸毒人群口腔假丝酵母药物敏感性分析

目的 了解吸毒人群口腔假丝酵母对常用抗真菌药物的敏感性,为临床治疗假丝酵母病提供参考资料.方法 采用美国临床标准化实验委员会推荐的微量稀释法测定75株假丝酵母对4种常用抗真菌药物两性霉素B(Amb)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCZ)和酮康唑(KETO)的药物敏感性.结果 75株吸毒人群口腔假丝酵母对Amb、5-FC、FCZ和KETO的耐药率分别为0、4%、8%和13.3%;对FCZ和KETO的交叉耐药率为8%;非白色假丝酵母对FCZ的耐药率为23.5%,对KETO的耐药率为43.2%,高于白色假丝酵母的3.45%和5.2%,差异有统计学意义(P＜0.05),2种假丝酵母对5-FC和Amb的耐药率差异无统计学意义.结论 吸毒人群口腔假丝酵母对Amb和5-FC的敏感性高于对FCZ和KETO;口腔假丝酵母对FCZ、KETO和5-FC有天然耐药株和对唑类药物的天然交叉耐药株,且非白色假丝酵母对FCZ和KETO的耐药率及交叉耐药率高于白色假丝酵母.     

不同地区草原革蜱基因组DNA多态性研究

目的研究我国不同地区草原革蜱是否有种型差异。方法从新疆阿尔泰、甘肃省武威、平凉地区采集草原革蜱标本，并分别提取它们的DNA，选取9条随机排列碱基序列片段，利用随机扩增多态DNA技术(Random Amplifted Polymorphic DNA，RAPD)，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。将扩增产物制备成DNA图谱，比较不同地区草原革蜱基因组DNA的多态性，从分子水平对不同地区草原革蜱进行差异分析。结果3个地区的草原革蜱部分DNA条带相同，但也有完全不同的DNA条带。结论3个地区的草原革蜱DNA存在差异。     

志贺氏菌的RAPD鉴定研究

目的：建立水或食品中志贺氏菌的快速鉴定方法，方法：首先采用特异性PCR技术对细菌进行初步检测，以确定其是否为志贺氏菌；然后采用随机引物扩增DNA多态性（RAPD）技术对志贺氏菌再进行鉴定，结果：志贺氏菌特异性引物（ipaH引物）扩增阳性的细菌经RAPD技术进行基因水平的分型，发现相同种的志贺氏菌株产生了基本相同的条带模式，不同种的菌株，甚至同一种菌的不同型间的条带模式也存在一定差异，结果经实际分离样品的验证。结论：RAPD技术可用于水或食品中志贺氏菌的鉴定。     

PCR指纹图技术鉴定临床常见酵母菌的探讨

目的探讨PCR指纹图技术用于鉴定临床常见酵母菌的方法. 方法采用PCR方法,使用随机引物M13和T3B对临床常见的7属17种酵母菌进行扩增. 结果17种酵母菌的扩增产物在数量和大小上都有其自身特征;不同种间酵母菌其PCR指纹图型存在明显的差异;对同种酵母菌内不同菌株扩增的结果表明,酵母菌的PCR指纹图分析种间变异远远大于种内变异,据此能将各种酵母菌有效地区分开. 结论控制好实验条件,PCR指纹图技术可有效地鉴定临床常见的酵母菌.     

两种方法检测假丝酵母菌属感染的效果及其耐药性

目的 对比分析PCR法及传统培养法诊断假丝酵母菌属感染的敏感性及准确性,寻求一种能早期诊断及菌株鉴定的替代方法；同时分析临床假丝酵母菌属的耐药性,为临床的抗真菌治疗提供指导.方法 应用PCR法对189份临床疑似真菌感染标本进行快速鉴定,与传统培养法结果进行比较,并对培养出的假丝酵母菌进行药敏试验.结果 189份标本主要来自痰液,占44.97％;通过PCR法及传统培养法检测出的假丝酵母菌属感染阳性标本分别为62、47份,综合传统方法及PCR法的检测结果,检测出有真菌感染的标本数共66份,PCR检测敏感率达93.94％,要高于传统培养法的71.21％,差异有统计学意义(x2=11.85,P＜0.01)；此外,分析PCR法及传统法检测假丝酵母菌类别时,发现有两株热带假丝酵母菌在传统方法中被归类到光滑假丝酵母菌中,检测准确率PCR法更优于传统培养法；体外药敏试验结果表明,5-氟胞嘧啶、伏立康唑和两性霉素B对分离的4种假丝酵母菌的敏感性均较高,而氟康唑则仅对白色假丝酵母菌有较高的敏感性.结论 采用PCR法可更准确、快速的检测假丝酵母菌属的感染,通过药敏试验结果可以指导临床抗真菌药物的合理应用.     

宁波市90株结核分枝杆菌临床分离株MLVA基因分型研究

目的研究宁波市结核分枝杆菌的可变数目串联重复序列(VNTR)的分型及分布特征。方法随机选取宁波市结核分枝杆菌临床分离株,常规培养,提取菌体基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对15个VNTR位点进行检测,采用BioNumerics软件进行基因分型的聚类分析。结果 90株结核分枝杆菌临床分离株的VNTR位点检测结果显示出明显的基因多态性,基因分型经聚类分析,分为4个基因群(Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群),84个基因型。Ⅰ群占11.1%,含有10个基因型,Ⅱ群占17.8%,含15个基因型,Ⅲ群占65.6%,含54个基因型,Ⅳ群占5.6%,含5个基因型。结论宁波市结核分枝杆菌VNTRs基因存在明显多态性得到初步证实,至少存在4个VNTR型,主要流行型为Ⅲ型。