醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法实验设染毒组,10、20μmol/L醋酸铅处理体外培养的人股动脉内皮细胞24 h后,用透射电镜观察细胞超微结构的变化;细胞免疫化学法、Western blot法检测Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。设不加醋酸铅为对照组。结果经染醋酸铅24 h后电镜观察发现染毒组细胞染色质固缩、边移,核质间隙增宽,20μmol/L醋酸铅染毒组凋亡小体形成;细胞免疫化学、Western blot结果显示醋酸铅组的Caspase-3阳性表达较对照组明显升高;流式细胞仪检测发现醋酸铅染毒组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可诱发人股动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡及Caspase-3表达影响

目的 探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡和Caspase-3表达的影响.方法 10 μmol/L醋酸铅处理小鼠星形胶质细胞24、48 h后,采用Hoechst33258染色法观察细胞形态学变化;聚合酶链反应(PCR)、细胞免疫化学法测定Caspase-3的转录与表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后小鼠星形胶质细胞呈凋亡形态学改变.Caspase-3转录与表达水平升高,醋酸铅组细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 醋酸铅可促进小鼠星形胶质细胞凋亡,Carpase-3参与了凋亡过程.     

乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测Caspase-3的表达,采用Western blot法检测细胞中Caspase-3表达量。结果显示,显微镜下观察发现,乙酸铅染毒人星形胶质细胞变小、变圆,细胞间隙变大,细胞部分脱落。透射电镜观察发现,乙酸铅染毒细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化。流式细胞仪检测结果表明,乙酸铅染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞免疫化学法和Western Blot法检测结果显示,乙酸铅染毒人星形胶质细胞Caspase-3表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高。提示乙酸铅可诱发人星形胶质细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

铅抑制NF-κB、Bcl-2蛋白表达诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞NFκB、Bcl-2表达的影响及与细胞凋亡的关系。方法体外培养HK-2细胞分为0、2.5、5、10、20μmol/L醋酸铅组,分别染毒72h,应用间接免疫荧光-流式细胞术检测HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达的改变,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡。结果随着染铅剂量增加HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达逐步降低,NF-κB与Bcl-2降低显著相关(r=0.71,P<0.01);细胞凋亡率随着铅剂量增加而增加,在5、10、20μmol/L铅组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率与NF-κB、Bcl-2蛋白表达呈明显负相关(r=-0.625,P<0.01;r=-0.709,P<0.01)。结论醋酸铅能下调HK-2细胞NF-κB、Bcl-2基因的表达,这可能是其诱导HK-2细胞凋亡的途径之一。     

铅对HK-2细胞转分化及纤维化相关因子表达的影响

目的 探讨铅在人肾小管上皮细胞表型转化中的作用及对纤维化相关因子的影响.方法 体外培养人类近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞,以2.5、5.0、10.0μmol/L醋酸铅剂量染毒,以Oμmol/L醋酸铅剂量组为对照组,应用形态学、间接免疫荧光-流式细胞术、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察醋酸铅染毒72 h HK-2细胞形态、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)表达的改变,以及对纤维化相关因子转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响.结果 5.0、10.0μmol/L醋酸铅可使肾小管上皮细胞形态发生明显改变.5.0、10.0μmol/L醋酸铅组α-SMA阳性细胞率分别为9.32%,和6.98%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,5.0、10.0μmol/L醋酸铅组FN蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,5.0、10.0μmol/L醋酸铅组细胞TGF-β1MRNA以及蛋白质表达明显增强,2.5、5.0、10.0μmol/L醋酸铅组CTGFmRNA以及蛋白质表达明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.05).结论 铅在体外可诱导肾小管上皮细胞转分化并能增强FGF-β1、CTGF、FN表达.     

铅抑制NF-kB、Bcl-2蛋白表达诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的 研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞NFJeB、Bcl-2表达的影响及与细胞凋亡的关系.方法 体外培养HK-2细胞分为0、2.5、5、10、20 μmol/L醋酸铅组,分别染毒72 h,应用间接免疫荧光-流式细胞术检测HK-2细胞NF-kB、Bel-2蛋白表达的改变,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡.结果 随着染铅剂量增加HK-2细胞NF-KB、Bcl-2蛋白表达逐步降低,NF-kB与Bcl-2降低显著相关(r＝0.71,P＜0.01);细胞凋亡率随着铅剂量增加而增加,在5、10、20μmol/L铅组与对照组比较差别有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率与NF-kB、BcI-2蛋白表达呈明显负相关(r＝-0.625,P＜0.01;r＝0.709,P＜0.01).结论 醋酸铅能下调HK-2细胞.NF-kB、Bcl-2基因的表达,这可能是其诱导HK-2细胞凋亡的途径之一.     

肝细胞生长因子对铅致人肾小球系膜细胞损伤的保护效应的机制

目的初步探讨肝细胞生长因子（HGF）防护铅处理致人肾小球系膜细胞（HMC）损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组（C组）、Pb10μmol／L组和HGF＋Pb10μmol／L组,在6、12、24、48h分别通过噻唑蓝（MTY）法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量一PCR检测各组细胞中Caspase-3的表达水平。结果MTr检测结果显示。Pb10pμmol／L组HMC在6、12、24、48h细胞生长存活率均显著低于HGF＋Pb10μmol／L组（P〈0．01）;流式凋亡检测结果显示,HMC在10μmol／L醋酸铅染毒6、12、24和48h后,HGF＋Pb10μmol／L组在各个时间点细胞凋亡率显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。实时荧光定量-PCR检测结果显示,在HMC铅染毒48h后,HGF＋Pb10μmol／L组Caspase-3的表达量显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。结论铅促进HMC细胞的凋亡,而HGF通过降低Caspase．3的表达抑制HMC的凋亡,从而发挥对铅致HMC细胞损伤的保护作用。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。     

铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用

目的　探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn 3a的表达和致凋亡作用。方法　采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型 ,醋酸铅的染毒浓度分别为 0 1、1、10、10 0、10 0 0 μmol L ,对照组给予等量培养液。染毒后 2 4h及 4 8h时MTT法测定各组细胞的存活率 ;免疫组织化学法测定Brn 3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果　引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的最低浓度是 10 μmol L ,醋酸铅浓度越高 ,细胞存活率越低。1μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性细胞积分光密度显著下降 (P <0 0 5 ) ,10 μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性面积比的显著下降 (P <0 0 1)。 1μmol L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的最低浓度 ,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应。结论　铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的 ,并且铅导致培养海马神经细胞Brn 3a的表达下降很可能是铅诱导神经细胞凋亡的原因之一     

醋酸铅对人肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的影响

目的 探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的作用及对超微结构的影响。方法 经5、10、20 μmol/L醋酸铅染毒HK-2细胞24h后,Hochest33342染色法观察细胞形态学变化,透射电子显微镜下观察细胞超微结构的变化,分光光度计检测细胞培养上清中乳酸脱氧酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,DNA Ladder实验检测醋酸铅对HK-2基因组的影响,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 Hochest33342-PI染色显示,染铅组细胞呈凋亡形态学改变。透射电子显微镜下观察发现,染铅组细胞胞质内出现空泡,核同缩,核膜结构模糊,并出现凋亡小体。染铅组细胞培养上清中LDH活力及MDA含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。HK-2基因结果显示,染铅组出现较为明显的DNA损伤现象。5、10、20 μmol/L染铅组细胞凋亡率分别为14.16％±2.94％、19.45％±2.73％、25.01％±3.97％,均明显高于对照组(5.81％±2.18％),差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 醋酸铅可促进HK-2细胞凋亡,进而影响肾脏正常功能。     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应

目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24h后Giemsa,H.E染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。动脉内皮细胞和星形胶质细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bc1-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤动脉内皮细胞和星形胶质细胞,促进凋亡及影响血脑屏障。     

乙酸铅诱发人肾小管上皮细胞线粒体损伤的体外研究

[目的]研究铅对人肾小管上皮细胞（human kidney cells,HK-2）线粒体的损伤作用,并探讨其可能的作用机制。[方法]以不同浓度的乙酸铅处理体外培养的HK-2细胞,罗丹明123（rhodamine 123,Rh123）及10-壬基吖啶橙（10-nonyl acridine orange,NAO）结合荧光化学发光仪分别检测细胞线粒体膜电位及心磷脂水平,细胞免疫荧光法结合流式细胞术检测线粒体细胞色素c（cytochrome c,Cyt c）释放情况,加甘露醇观察铅对心磷脂及Cyt c变化的影响。[结果]乙酸铅能造成HK-2细胞线粒体膜电位剂量及时间依赖性下降,荧光强度从正常对照组的4.56±0.25下降到400μmol/L组的2.90±0.26或从正常对照组的4.44±0.20下降到12 h组的2.34±0.50,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乙酸铅能明显造成HK-2细胞线粒体心磷脂NAO荧光强度时间及剂量依赖性下降,荧光强度从正常对照组的2.45±0.18下降到400μmol/L组的0.91±0.18或从正常对照组的2.52±0.01下降到24 h组的1.50±0.05,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乙酸铅能诱发线粒体Cyt c释放,剂量及时间依赖性地降低细胞内Cyt c荧光强度。50μmol/L甘露醇能使NAO荧光强度从1.38±0.14恢复至2.30±0.15,将Cyt c荧光强度从9.49±0.31恢复至14.20±0.39,明显抑制铅对心磷脂的氧化及Cyt c的释放。[结论]铅可能早期通过HK-2细胞线粒体膜电位溃散,造成线粒体功能损害,进一步加强线粒体心磷脂的氧化损伤,促使Cyt c释放,造成线粒体的结构损伤。     

铅对培养海马神经细胞生长和nNOS表达的影响

目的研究不同剂量醋酸铅对原代培养的海马神经细胞生长和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法将孕18dSD大鼠麻醉后剖腹取出胎鼠,采用海马神经细胞培养建立细胞模型,醋酸铅的染毒浓度分别为10-5mol/L(高剂量组)、10-7mol/L(中剂量组)、10-9mol/L(低剂量组),对照组给予等量培养液。染毒24h后用免疫组织化学法检测神经细胞球和单个神经细胞nNOS蛋白的表达。结果各剂量组对海马神经细胞胞体、轴突突起长度和细胞间连接均未见明显影响。高剂量组和中剂量组海马神经细胞球和散在的神经细胞nNOS的表达明显下降,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。低剂量组海马神经细胞球和散在的神经细胞nNOS的表达较对照组有所下降,与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。结论低剂量铅下调培养的海马神经细胞nNOS的表达,这种下调作用具有剂量依赖性。     

硒甲基硒代半胱氨酸联合紫杉醇通过内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探讨硒甲基硒代半胱氨酸(Se-MSC)联合紫杉醇通过内质网应激诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及其分子机制。方法MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测蛋白表达水平,实时qRT-PCR法检测mRNA的表达水平。SPSS 19.0软件进行统计分析。结果MTT法显示Se-MSC和紫杉醇抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖;Se-MSC 50μmol/L和紫杉醇10nmol/L作用24h对HUVECs无抑制作用,但对MDA-MB-231细胞具有抑制作用;两种药物联合效果较单独使用增强,Se-MSC联合紫杉醇将MDA-MB-231细胞抑制于G1期(P<0.05)。Se-MSC和紫杉醇联合刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231可上调Bax、活化Caspase-9和Caspase-3表达,下调Bcl-2、前体caspase-3表达和Bcl-2/Bax比值(P<0.05),并激活内质网应激,上调GRP78、Caspase-4和CHOP的mRNA表达。结论Se-MSC联合紫杉醇通过抑制MDA-MB-231细胞增殖,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,下调Bcl-2、Pro caspase-3并激活内质网应激,可推测Se-MSC联合紫杉醇诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,但需要进一步验证。