用抗生物素蛋白—生物素酶标染色法探讨两种胚胎抗原对结肠癌的诊断价值

本文用新近发展起来的抗生物素蛋白-生物素酶标染色法(ABC 法)探讨癌胚抗原(CEA)与特定时期胚胎抗原(SSEA-1)在结肠癌中的分布及其对结肠癌的诊断价值。结果显示CEA 存在于几乎所有结肠癌病例(29/30),但也可在约40%左右的正常结肠粘膜表面上皮或腺上皮细胞膜上出现。SSEA-1存在于约84%的结肠癌病例,但仅微量存在于约20%正常腺隐窝基底部的上皮细胞膜。两者在结肠癌细胞及正常结肠上皮细胞膜上的分布情况也不同。认为用 ABC 法检测这两种抗原,特别是 SSEA-1在结肠癌中的呈现情况可能有助于临床诊断。本文并对 ABC 法略加讨论。     

人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。     

生物素-抗生物素抗原斑点试验在检测疟疾抗原上的应用

应用生物素-抗生物素系统(Biotin-Avidin System,BAS)的生物放大作用,建立了生物素-抗生物素抗原斑点试验(ABC-AST),并采用多株抗疟原虫红内期单克隆抗体(McAb),以增加试验的敏感性,明显提高了染色斑点的阳性强度。用多株抗疟原虫 McAb获得的抗原斑点的颜色明显深于单株 McAb,而与多克隆抗体染色效果相似。 本试验应用多株 McAb为反应剂的 ABC-AST检测92例镜检查见原虫的间日疟病人血清,阳性率为94.57％,AST 为86.96％;对42例镜检原虫密度小于0.01％的疟疾病人血清AST 法仅能查出76.19％,而ABC-AST法能查出92.86％,明显地提高了检出率。健康人血清的 ABC-AST和 AST假阳性率分别为4.35％和6.09％(P>0.05)。     

体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力

背景：人羊膜上皮细胞具有多系分化能力,是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察,而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。 目的：分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响,探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。 方法：使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。 结果与结论：不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%,存在很大的个体差异。并且,随着传代次数的增加,人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低,其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外,培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异,且其差异与原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示,不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平受到个体差异的影响,需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达SSEA-4的胎儿样本,以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外,体外培养过程中SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响,需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外,人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响,在今后还需要进一步研究。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

抗生物素蛋白与生物素:生物医学研究的工具

抗生物素蛋白(Avidin)的早年研究曾导致了生物素的发现、分离和合成。虽然抗生物素蛋白占卵蛋白的0.05％,但用它喂养大鼠时,可引起大鼠出现一种罕见的皮炎。后来发现此种皮炎可用一种保护因子治疗,     

绵羊羊膜上皮细胞分离培养及鉴定*☆

背景：目前有研究发现人羊膜和大鼠羊膜分离消化培养后,可成功获得具有干细胞特性的人羊膜上皮细胞和鼠羊膜上皮细胞,在体外一些外源因子作用下具有向三胚层细胞分化的潜能。 目的：获取绵羊羊膜上皮细胞,并对其干细胞特性进行鉴定。 方法：采用机械方法剥离绵羊羊膜组织,运用低速旋转TrypLE(胰酶替代物)消化法对绵羊羊膜进行分离培养获得绵羊羊膜上皮细胞。 结果与结论：细胞免疫荧光检测结果表明绵羊羊膜上皮细胞表达Oct-4、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81等胚胎干细胞标记蛋白;RT-PCR技术鉴定结果显示绵羊羊膜上皮细胞的Oct-4、Sox-2、Rex-1全能性相关基因表达,而Nanog基因不表达。检测结果提示实验成功获得具有干细胞特性的绵羊羊膜上皮细胞。      

生物素-抗生物素系统及其在免疫学研究中的应用(文献综述)

<正> 从七十年代末起,生物素和抗生物素系统(Avidin-Biotin System)开始在免疫化学领域中逐渐得到广泛应用。特别是由于生物素和抗生物素间亲和力大、特异性强、试剂有商品供应,可分别结合各种类型大小分子,故在相当大的范围内,为免疫标记技术提供了极为方便有用的工具,成为被大家所喜爱采用的方法。 一、生物素和抗生物素发现的历史:生物素(Biotin)首先于1936年由Kogl和     

miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换

目的探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制。方法 RT-q PCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、Ep CAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-q PCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平。结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05)。在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05)。TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换。     

多天线癌胚抗原检测方法的建立及其在恶性肿瘤患者血清中的水平

目的 :建立多天线癌胚抗原 (multipleantennaecarcinoembryonicantigen ,MA CEA)的快速定量检测法 ,并研究肿瘤患者血清中多天线癌胚抗原的水平。方法 :采用神经氨酸酶 (neuramin-idase ,NMD)降解MA CEA糖链外侧的唾液酸。采用蔓陀萝凝集素 (daturastramoniumagglutinin ,DSA)和CEA抗体 ,建立检测MA CEA的链霉亲和素 生物素系统酶免疫分析法 (ABC EIA) ,分别检测 2 39例肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和卵巢癌患者血清中MA CEA的水平 ,同时采用ELISA检测血清CEA的水平。结果 :血清MA CEA的水平在CEA阳性的肺癌患者中明显升高 ,75例肺癌患者血清MA CEA的阳性率为 14 .7% ,而CEA水平升高的肺癌阳性率为 4 7.3% ;但胃癌、肝癌、结肠癌和卵巢癌患者 ,无论CEA水平是否升高 ,均未检测到MA CEA水平的升高。结论 :建立了一种可定量检测肿瘤患者血清MA CEA的方法 ,为肺癌的鉴别诊断及其他多天线糖链肿瘤标志物的研究奠定了基础     

生物素改性的植入胶原用作药物载体

本文通过牛皮胶原与生物素-N-羟基琥珀酰亚胺(BNHS)共价键结合使胶原生物素化,再通过生物素-卵白素之间的生化反应使药理活性分子专一性地结合在胶原上。生物素化的胶原与卵白素的结合活性用一种体外的斑点试验定性分析,并用光学数字显示仪可实现定量数据处理。这里采用了两种结合程序:(1)用辣根过氧化物酶标记的卵白素与生物素化的胶原反应(LAB法)。通过辣根过氧化酶的显色作用检测卵白素与生物素胶原的结合率。(2)用游离的卵白素与两种生物素化的基     

用生物素酰肼制备亲和素—生物素化酶复合物

亲和素—生物素化酶复合物(即ABC)中所用的生物衍生物一般是生物素—N羟基琥珀酰亚胺酯(BNHS),我们现在用生物素酰肼(BHN)代替BNHS来制备ABC,结果提高了ABC的显色效果和检测抗原抗体的灵敏度。     

生物素—亲和素系统在免疫学检测中的应用

<正> 早些年前,学者们发现给动物喂食大量卵白蛋白可引起维生素 H(即生物素,biotin)缺乏症,此后证明其原因是卵白蛋白中存在一种对生物素有异常强亲和力的碱性糖蛋白,称之为 avidin,译名有抗生物素蛋白、卵白素和亲和素等。前二者易与抗体或卵白蛋白混淆,本文采用亲和素。自七十年代中期起,亲和素与生物素之     

生物素-抗生物素系统在检测HBsAg中的应用

<正> 生物素-抗生物素系统(Biotin-AvidinSystem,BAS)与ELISA技术相结合就成为BAS-ELISA检测法,它较常规ELISA灵敏度更高,特异性强,同时又具备简便、经济、快速的优点。我们用自制的BAS试剂,建立了检测HBsAg的BAS-ELISA方法,实验结果良好,现报告如下。     

CEA、CA199、细胞角质素片段19和CK联合检测对结肠癌的诊断价值

目的探讨血清CEA、CA19-9、细胞角质素片段19(CY211)和CK联合检测对结肠息肉和结肠癌的诊断价值。方法检测结肠息肉组和结肠癌组患者及对照组血清CEA、CA19-9、CY211和CK含量。二元Logistic回归分析。结果结肠癌组与结肠息肉组相比较,CEA和CA199含量均显著升高(P<0.05),而CK含量显著降低(P<0.05)。CEA在结肠息肉组和结肠癌组患者的诊断价值最高,其曲线下面积为0.728,诊断灵敏性和特异性为54.9%和91.4%。当CEA、CA199、CY211和CK联合检测时,其曲线下面积为0.847,诊断灵敏性和特异性分别为73.6%和85.5%。结论与单独指标检测相比,联合检测同时兼顾灵敏性和特异性,可作为临床结肠癌的辅助诊断方法。     

国产抗生物素及其在免疫学性能研究

<正> 抗生物素(Avidin)是从蛋清中提取的一种糖蛋白,对生物素有极大亲和力,利用抗生物素——生物素系统作为免疫学检测工具,是最近发展起来的一种灵敏度极高的酶标方法。为了在国内尽快发展这种免疫工具,作者贯彻科研和生产相结合方针共同研制抗生物素,经几批试制,国产抗生物素与Sigma同类产品比较,其含量和免疫活性都能达到或超过。如经多次CM-纤维素亲和提纯,在每ml含1.56μg抗生物素即可检得     

生物素多聚葡聚糖胺追踪显示皮质脊髓束的走行和分布

背景：生物素多聚葡聚糖胺的作用机制及代谢过程目前还不十分清楚,可能和与生物素连接的其他复合物相似。 目的：选择最佳的生物素多聚葡聚糖胺追踪(示踪)实验方法,使生物素多聚葡聚糖胺能充分显示皮质脊髓束的走行和分布。 方法：将15只SD雌性大鼠用于生物素多聚葡聚糖胺条件实验,分为双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5 μL/位点存活2周组、单侧(右侧)大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺1 μL/位点存活3周组及双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5 μL/位点存活3周组,每组5只。 结果与结论：在3组进行生物素多聚葡聚糖胺追踪实验的大鼠中,双侧大脑皮质注射10%生物素多聚葡聚糖胺0.5 μL/位点存活3周组的追踪效果最好。提示在双侧大脑皮质上选择多点注射,以每个位点注射0.5 μL的10%生物素多聚葡聚糖胺,注射后大鼠存活3周为最佳的生物素多聚葡聚糖胺追踪实验方案。     

联合检测癌胚抗原、糖链抗原19-9和C反应蛋白对结肠癌的诊断价值

目的 探讨联合检测血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原19-9 (CA19-9)、C-反应蛋白(CRP)对结肠癌诊断的临床应用价值.方法 分别利用电化学发光法检测CEA及CA19-9、乳胶颗粒增强免疫浊度法检测CRP在正常对照组、结肠息肉和结肠癌组中的表达量.结果 与正常对照组相比较,结肠癌组CEA、CA19-9和CRP均...     

抗生物素蛋白——生物素系统在免疫学中的应用

抗生物素蛋白(Avidin)是与生物素(Biotin)有极强亲和性的一种糖蛋白。自七十年代末起,抗生物素蛋白—生物素系统(ABS)开始引入酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中,改善了这些方法的稳定性和特异性,大大提高了方法的灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新途径,日益受到国内外免疫学工作者的普遍重视。抗生物素蛋白是由鸡、鸟、蜥蜴等动物输卵管中分泌的一种硷性糖蛋白,鸡蛋中含量比较丰富,占总蛋白的0.05%。早在1927年,Boas用生鸡蛋清饲养大白鼠,结果引起了大鼠皮炎。1936年,Kogl从鸡蛋黄中分离出一种小分子物质,因能促进培养液中酵母菌的生长,故取名为酵母菌生长因子。1939年,Gyngy证明这种因子能治疗喂饲蛋清引起的大鼠皮炎,又将其改名为     

结,直肠癌组织中PNA,PHA及CEA的免疫组化研究

用生物素标记的花生凝集素(PNA)、菜豆凝集素(PHA)及抗CEA抗体对良恶性结、直肠组织作组化染色研究,发现:PNA主要标记结、直肠癌(21/25);PHA主要与正常结、直肠杯状细胞粘液相结合(21/22);而癌旁粘膜的结合情况介于二者之间。上述凝集素能显示细胞糖结合物糖化的紊乱,因而有助于结肠癌的诊断。抗CEA抗体可帮助临床决定哪些病人需定期随访检查血中CEA水平,以便监测复发与转移。     

生物素-抗生物素系统点免疫结合试验诊断棘球蚴病的研究

<正> 本文建立了生物素-抗生物素系统点免疫结合试验(BAS-DIBA),并以棘球蚴病患者血清、非棘球蚴病患者血清、健康人血清和纯化的细粒棘球蚴(Echinococcus granulo-sus)抗原进行BAS-DIBA和常规DIBA的诊断试验。