组织因子途径抑制物-2与妇科肿瘤

组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）属于库尼（Kunitz）型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白,是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制物。大量研究表明,TFPI-2通过抑制和降解基质金属蛋白酶,抑制肿瘤新生血管生成．抑制TF-FVIIa复合物介导的信号转导途径以及诱导肿瘤细胞凋亡等机制调控某些恶性肿瘤细胞的侵袭和转移。就TFPI-2的分子生物学特点、与恶性肿瘤侵袭转移的关系,及其与妇科肿瘤关系的研究进展综述。     

组织因子途径抑制物-2与妇科肿瘤

组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）属于库尼（Kunitz）型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白,是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制物。大量研究表明,TFPI-2通过抑制和降解基质金属蛋白酶,抑制肿瘤新生血管生成,抑制TF-FVIIa复合物介导的信号转导途径以及诱导肿瘤细胞凋亡等机制调控某些恶性肿瘤细胞的侵袭和转移。就TFPI-2的分子生物学特点、与恶性肿瘤侵袭转移的关系,及其与妇科肿瘤关系的研究进展综述。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与卵巢癌的侵袭和转移

肿瘤的侵袭和转移是个多步骤的复杂过程 ,但是首先肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )和基底膜的能力。这一过程中基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)必不可少 ,它几乎能降解细胞外基质所有成分 ,被认为参与肿瘤的侵袭、转移和血管形成[1] ,它的组织抑制物 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ ｔｅｎａｓｅｓ ,ＴＩＭＰｓ)亦参与这一降解过程的代谢调节 ,故近年来它们愈来愈被人们重视。1　ＭＭＰｓ分类、结构、调节及检…     

纤溶酶原激活因子及抑制因子与卵巢癌浸润转移

肿瘤浸润转移必须突破其周围的细胞外基质(ECM)。纤溶酶原激活因子(PA)及其抑制因子(PAIs)介导的ECM的降解在卵巢癌的浸润转移过程中起十分关键的作用，肿瘤细胞通过大量表达uPA、PAI-I使：ECM分解，进而不断浸润和扩散。对其基因结构、功能、作用机制等进行综述，旨在为肿瘤的诊断和治疗提供新方法，开辟新途径。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与妇科恶性肿瘤的浸润及转移

细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)的降解被认为是肿瘤侵蚀正常组织和开始转移的信号及重要途径。近年来 ,大量研究证实 ,基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＭＭＰｓ)及其组织抑制物 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＴＩＭＰｓ)在这一过程的代谢平衡调节中起决定性作用[1] 。一、ＭＭＰｓ的结构及调节1.ＭＭＰｓ家族的种类及结构 :ＭＭＰｓ是一组结构中含Ｚｎ2 和Ｃａ2 的蛋白水解酶家族 ,共有 14个成员。根据其作用底物不同可分为 4类[…     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与卵巢癌的侵袭和转移

卵巢癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，5年存活率低，与其侵袭和转移的特性有关。细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肿瘤的侵袭和转移中起了关键性的作用，ECM的降解主要依靠蛋白水解酶，基质金属蛋白酶是较为重要的一类。大量实验表明基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)介导的细胞外基质的降解对肿瘤的侵袭起着极为重要的作用，而基质金属蛋白酶的组织抑制剂(tissue inhibitor of matrx metalloproteinases,TIMPs)可抑制MMPs的活性，MMPs和TIMPs的平衡失衡可导致肿瘤的浸润转移。本文就近年来有关MMPs的TIMPs在卵巢癌浸润和转移中的作用作一综述如下。     

卵巢癌细胞侵袭转移相关转录因子表达分析

目的:分析并比较卵巢癌细胞中与肿瘤转移、侵袭相关的转录因子。方法:采用细胞划痕及小室跨膜实验比较卵巢癌细胞HO-8910及其高转移株HO-8910PM的转移侵袭能力差异;采用高通量转录因子活性检测芯片(DNA/蛋白结合芯片)分析并比较两种细胞中转录因子的活化情况,明确与肿瘤侵袭、转移相关表达的转录因子;用转录因子酶联免疫活性分析方法验证芯片检测结果。结果:细胞划痕实验及侵袭实验表明HO-8910PM比HO-8910细胞转移侵袭能力强,在345个转录因子中共筛选出与肿瘤侵袭、转移相关的31个表达差异转录因子。HO-8910PM细胞与HO-8910细胞相比,表达上调的有13种,下调的有18种。v-Maf仅表达于HO-8910PM,HLF仅表达于HO-8910。结论:v-Maf、HLF等31种转录因子可能参与了卵巢癌侵袭转移的相关机制。     

组织蛋白酶L基因与卵巢上皮性癌细胞侵袭及转移的关系

目的 构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的真核表达质粒,通过体外实验研究CTSL基因与卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的关系.方法 采用逆转录(RT)-PCR技术从卵巢癌组织总RNA中扩增CTSL基因的cDNA全长,克隆至pMD18-T载体上;酶切、纯化CTSL基因后与pcDNA3.1载体连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CTSL.应用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒转染卵巢癌HO8910细胞,RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检验CTSL mRNA和蛋白的表达情况,细胞增殖能力测定分别采用四甲基偶氮唑蓝法和集落形成实验,细胞周期检测、细胞体外侵袭、转移、黏附能力测定分别采用流式细胞仪、细胞体外侵袭重建基底膜实验、穿膜小室(transwell小室)实验、体外黏附实验.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果证实,HO8910细胞转染pcDNA3.1-CTSL质粒后有CTSL基因和蛋白的表达.HO8910-CTSL细胞的生长速度加快,但与对照的HO8910-pcDNA3.1及HO8910细胞分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的S+G2+M期细胞比例为37.9%,与HO8910-pcDNA3.1细胞及HO8910细胞(分别为32.9%、31.8%)比较虽有增加,但差异均无统计学意义(P>0.05).HO8910-CTSL细胞的侵袭、转移能力增加(分别为0.34±0.18、1.252±0.114),与HO8910-pcDNA3.1细胞(分别为0.17±0.04、0.486±0.027)及HO8910细胞(分别为0.16±0.05、0.459±0.674)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HO8910-CTSL细胞的黏附能力(0.16±0.04)与HO8910-pcDNA3.1细胞(0.19±0.04)及HO8910细胞(0.19±0.03)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTSL基因真核表达质粒转染使卵巢癌细胞的体外侵袭和转移能力增加,有可能成为抗卵巢癌侵袭和转移的分子靶点.     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与子宫内膜癌的浸润和转移

肿瘤的浸润和转移及ECM及基底膜的降解。基质金属蛋白酶 (MMPs)是一类重要的水解酶 ,对ECM有广泛的降解作用 ,它与金属蛋白酶组织抑制物 ((MMPs)相互作用是调节ECM动态平衡的重要因素。现就MMPs和TIMPs在子宫内膜癌浸润转移中的作用作一综述     

肝细胞生长因子对卵巢癌细胞侵袭作用的影响

肝细胞生长因子（HGF）与其受体c-met蛋白特异性结合，可激活多条信号传导通路的级联反应，促进细胞增殖、肿瘤血管形成、肿瘤细胞的侵袭等。为了解HGF对卵巢癌细胞浸润转移的促进作用及其对卵巢癌细胞核转录因子（NFKB）通路的传导作用，采用Boyden小室体外侵袭实验观察HGF对卵巢癌细胞株SKOV3细胞侵袭作用的影响，     

卵巢癌与肿瘤转移

肿瘤的浸润和转移是一个极其复杂的病理过程，是传统抗癌治疗难以克服的主要障碍，也是恶性肿瘤导致患者死亡的主要原因。肿瘤的浸润与转移是一个复杂、多步骤的癌细胞与宿主细胞相互作用的连续过程。其过程可以概括为：(1)肿瘤血管生成，肿瘤细胞的持续生长要求机体不断形成向肿瘤提供营养的血管，其过程是在各种血管生成因子和相应抑制因子共同调控下进行；(2)肿瘤细胞脱落并侵入基质。     

尿激酶型纤溶酶原激活因子介导的卵巢上皮癌细胞浸润转移体外的实验研究

目地:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子在卵巢上皮癌浸润转移中的作用机制。方法:用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA基因cDNA全长,克隆至pGEM-T Easy Vector,鉴定后与真核表达载体PCMV-HA连接,酶切及测序。用脂质体法将重组质粒DNA转染至SKOV3细胞。加压筛选并培养PCMV-HA-uPA及对照细胞。分别用RT-PCR和W estern blot方法检测转染前后SKOV3细胞uPA的表达。细胞增殖能力测定用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,细胞周期测定用流式细胞仪法,细胞体外侵袭,迁移和黏附能力测定分别采用Matrigel Invasion,TranswellM igration和Adhersion Assay方法。结果:(1)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞克隆形成,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(2)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞的细胞周期中S期比例增加,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(3)uPA阳性表达介导SK-OV3细胞的体外侵袭,迁移和黏附能力均明显强于对照细胞株,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.0001和0.0049)。结论:uPA通过促进肿瘤细胞侵袭,迁移和黏附能力在卵巢上皮癌浸润转移中起了重要作用。     

COX2促进卵巢癌细胞迁移及相关机制的研究

目的:探讨COX2对卵巢癌细胞株增殖及迁移的影响及其相关机制。方法:构建慢病毒载体Lenti-COX2-EGFP,转染卵巢癌细胞株SKOV3和ES2。PCR及Western blot法鉴定转染效率,CCK-8实验检测细胞增殖,划痕实验观察细胞迁移能力,qRTPCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail和Slug表达。结果:与对照组相比,过表达COX2后卵巢癌细胞的增殖和迁移能力增强,差异均有统计学意义(P0.05);E-cadherin表达下调,Snail、Slug、Vimentin表达上调。COX2抑制剂塞来昔布处理则可抑制COX2过表达细胞的增殖及迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:COX2可促进卵巢癌细胞增殖及上皮间质转化(EMT)继而增强肿瘤细胞迁移能力;塞来昔布可发挥阻断作用。推测COX2可能是卵巢癌临床治疗的一个潜在靶点。     

白细胞介素7基因转染卵巢癌细胞的体外研究

目的　观察白细胞介素 (IL) 7基因体外转染卵巢癌细胞后 ,细胞的增殖特性 ,表面抗原表达和细胞因子分泌的变化 ,及对淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK细胞 )杀伤敏感性的影响。方法　对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3进行体外培养 ,将重组质粒pBK CMVIL 7导入SKOV3建立SKOV3 IL 7,将双相表达载体pBK CMV导入SKOV3建立SKOV3 Neo ,应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝比色试验及流式细胞术 ,观察IL 7基因转染前后 ,SKOV3的增殖特性变化 ;间接标记异硫氰酸荧光素 流式细胞术 ,测定细胞表面抗原表达 ;酶联免疫吸附试验测定细胞因子分泌 ;应用乳酸脱氢酶释放法观察细胞对LAK细胞杀伤敏感性的影响。结果　IL 7基因转染前后 ,SKOV3细胞基本形态、增殖特性及细胞周期分布无明显变化 ;细胞表面人类白细胞抗原ABC(HLA ABC)表达阳性率为 91 8%～99 9% ;人类白细胞抗原DR(HLA DR)未能检测到 ;IL 7基因转染后SKOV3细胞间粘附分子I(ICAM I)表达显著提高 ,SKOV3 IL 7为 (4 0 6± 3 7) % ,SKOV3 Neo为 (2 3 2± 2 7) % ,SKOV3为 (18 9± 7 2 ) % ;转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达显著降低 ,SKOV3 IL 7为每 2 4h、10 6 细胞中 (下同 ) 15 8ng L ,SKOV3 Neo为 72 6 μg L ,SKOV3为 396ng L ;IL 7基因转染后 ,SKOV3细胞对LAK细胞     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1对植入前小鼠胚胎体外发育的影响

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠胚胎中的表达规律及其对小鼠胚胎体外发育的影响。方法:①应用RT-PCR及免疫荧光技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠不同发育时期胚胎中的表达规律。②在不同CD82/KAI1抗体浓度的培养液中,培养小鼠8-细胞胚胎,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:①CD82/KAI1mRNA在小鼠不同时期胚胎中均有表达,于8-细胞期及桑葚胚表达较丰富,CD82/KAI1蛋白表达于各期胚胎细胞的胞膜和胞浆,在桑葚胚期CD82蛋白还强表达于胚胎细胞的胞核。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制胚胎的发育速度(1∶800,P<0.05),降低囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和孵出率(1∶800,P<0.05),减少囊胚细胞数(1∶800,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在小鼠胚胎的发育过程中可能发挥重要作用。     

nm23-H2基因抑制卵巢癌细胞侵袭转移及调节网络初探

目的研究上皮性卵巢癌转移相关nm23-H2基因功能及其调控网络,为最终揭示卵巢癌侵袭转移分子机制和晚期卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法将nm23-H2重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染人卵巢癌细胞系SKOV3.ip1,经G418抗性筛选及RT-PCR鉴定得到稳定转染阳性克隆H2-18,设计体外黏附实验及人工基底膜侵袭实验比较转染前后细胞黏附侵袭特性的改变。应用2 747点人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞基因表达的改变,寻找与nm23-H2相关下游调控肿瘤相关基因,并探讨其调节网络。结果用重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染SKOV3.ip1细胞。转染前后细胞在体外的增殖能力没有显著变化,转染后细胞的黏附与侵袭基底膜能力明显降低。经人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞发现55个二倍差异表达基因,在上调基因中以转录调节、信号转导、分化发育及细胞凋亡类基因为多;下调基因中以信号传导及黏附运动功能类基因为主。结论nm23-H2基因具有抑制卵巢癌侵袭转移的作用,并且这一作用的实现是通过对一系列下游肿瘤相关基因的调控来完成的。基因芯片技术结合普通分子生物学技术是后基因组时代肿瘤相关基因功能研究及探索基因调控网络的有效手段。     

卵巢上皮性癌细胞转移相关蛋白的比较蛋白组学分析

目的筛选卵巢上皮性癌（卵巢癌）转移相关蛋白,进一步探讨卵巢癌的转移机制。方法以卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卯巢癌细胞系HO-8910PM为研究对象,采用比较蛋白组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）,筛选两个细胞系中差异表达的蛋白质。结果高转移细胞系HO-8910PM与卵巢癌细胞系HO-8910比较,共出现了21个差异表达蛋白质点,其中16个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点表达下调。21个差异表达蛋白质点有17个被鉴定,并分为7大类,即锌指蛋白、钙结合蛋白、DNA修复及合成蛋白、细胞调节蛋白、细胞代谢相关蛋白、细胞信号和传导蛋白及细胞表面抗原。结论卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的蛋白质表达存在明显差异。     

新生儿溶血病患儿血浆组织因子和组织因子途径抑制物含量的变化

组织因子（tissue factor，TF）即凝血因子Ⅲ，是启动凝血途径的重要因子。组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI）是近十余年来发现的生理性抗凝物质，对TF诱导的凝血过程起负性调节作用，在维持体内促凝和抗凝的相对平衡中起重要作用。     

卵巢癌细胞中CD44的表达及其反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞黏附侵袭的实验研究

卵巢癌是我国最常见的妇科恶性肿瘤之一,70％的患者确诊时已届晚期,故5年生存率极低。腹膜种植、转移是卵巢癌细胞转移的主要方式,也是卵巢癌患者致死的主要原因。CD44是目前研究较多的腹膜转移相关黏附分子,它主要介导细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附,进而参与肿瘤的侵袭和转移。我们尝试以CD44反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)体外转染卵巢癌细胞系CAOV3,观察其对癌细胞黏附和侵袭能力的影响。     

BMP-2对人卵巢浆液性囊腺癌HO8910细胞浸润能力的影响及机制研究

目的 检测骨形态发生蛋白-2（BMP-2）对人卵巢浆液性囊腺癌HO8910细胞的浸润能力有无影响,并探讨其可能的影响机制。方法 2008至2009年于中国医科大学盛京医院应用细胞黏附实验、cross-river实验和matrigel-transwell实验观察BMP-2对HO8910细胞浸润能力的影响,并检测BMP-2作用后HO8910细胞中MMP-2、TIMP-2的变化。结果 BMP-2作用后HO8910细胞黏附能力增强,cross-river时间延长,穿过matrigel-transwell侵袭模型的细胞数量减少,且MMP-2表达较前减弱,TIMP-2表达较前增强。结论 BMP-2抑制HO8910卵巢癌细胞浸润能力。