非小细胞肺癌中c-Met、EGFR、K-Ras和EML4-ALK基因的检测分析

的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中肝细胞生长因子受体（c-Met）基因扩增与临床病理特征的关系以及分析c-Met与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的相关性。方法 采用荧光原位杂交技术（FISH）检测108例NSCLC患者的c Met基因扩增情况,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测EML4-ALK融合基因及c-Met基因表达量,聚合酶链扩增反应（PCR）及直接测序法检测EGFR和K-Ras基因突变情况,并分析c-Met基因与临床病理特征的关系及其与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的关系。结果 NSCLC中c-Met基因扩增率为1.85％,其在吸烟和非吸烟患者中扩增率分别为2.94％和1.35％;腺癌c-Met基因扩增率为1.23％,鳞癌未发现c-Met基因扩增;仅Ⅰ期和Ⅲ期中分别有1例c-Met基因扩增。NSCLC中EGFR、K-Ras基因突变及EML4-ALK融合基因的阳性率分别为42.59％、5.56％和12.04％。结论 FISH法对c-Met基因扩增检出率与qRT-PCR检测的c-Met基因表达水平基本一致;c-Met基因扩增与EGFR、K-Ras突变及EML4-ALK融合基因之间几乎是不共存的,c-Met扩增与NSCLC患者年龄、性别、吸烟状态、肿瘤组织类型及临床分期无关。     

非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测结果的初步分析

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因的突变情况,及其与NSCLC临床病理特征和预后的关系。方法 采用突变扩增阻滞系统检测26例NSCLC组织中EML4-ALK融合基因的9种突变和表皮生长因子受体（EGFR）的18、19、20、21外显子突变,进一步分析EML4-ALK融合基因突变与NSCLC临床病理特征和总生存期（OS）的关系。结果 26例NSCLC患者中检测到6例EML4-ALK融合基因突变。EML4-ALK融合基因突变与年龄、吸烟史、临床分期、组织分化和EGFR突变有关,与病理类型、性别、标本类型和血清癌胚抗原无关（P＞0.05）。EML4-ALK融合基因阳性者的中位OS为9个月,低于阴性者的12个月,但差异无统计学意义（P=0.460）。结论 NSCLC中 EML4-ALK融合基因突变多见于无吸烟史或少量吸烟、年龄较小、临床分期较晚、组织分化较差、无EGFR突变的患者。     

Ⅳ期维吾尔族非小细胞肺癌组织EML4-ALK表达与临床病理特征的关系

目的 肺癌是目前发病率较高的肿瘤,是癌症相关死亡重要的原因之一.NCCN指南已将克唑替尼(Crizotin ib)作为EML4-ALK融合基因患者的标准一线治疗.本研究探讨维吾尔族Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small cell lung canc er,NSCLC)患者的EML4-ALK重排与临床病理特征之间的关系.方法 回顾性分析2015-01-01-2016-05-31,在新疆医科大学附属肿瘤医院采用Ventana全自动免疫组化法进行EML4-ALK检测的158例维吾尔族Ⅳ期NSCLC患者的临床资料,分析其临床病理特征与EML4-ALK重排的关系.结果 158例维尔族Ⅳ期NSCLC患者中,检测到EML4-ALK融合基因11例(6.96％).未检测到EML4-ALK融合基因的患者147例(93.04％). EML4-ALK突变与吸烟史、患者的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变状况、病理类型有关,P＜0.05;而与性别、年龄、有无淋巴结转移及分化程度无关,P＞0.05.无EGFR突变的不吸烟的腺癌患者EML4-ALK融合基因阳性率高.结论 EML4-ALK融合基因多表达于腺癌、不吸烟或既往有吸烟史,且同时无EGFR突变的维吾尔族Ⅳ期NSCLC患者.明确Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者中EML4-ALK的表达与临床病理学特征之间的联系,便于更好地发现相应的治疗优势人群,进行及时的检测与治疗.     

非小细胞肺癌患者EML4-ALK和EGFR共存突变的检测及其与临床病理特征的关系

目的:检测无锡地区非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变情况及突变亚型,并探讨其与临床病理特征的关系。方法:整群选取并回顾性分析2015年01月至2017年10月于无锡市人民医院诊治的NSCLC患者病例资料188例,采用实时荧光PCR技术检测EML4-ALK基因和EGFR基因的突变情况,并结合临床资料分析其与临床病理特征的关联。结果:在188例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因阳性率为9.0%。其中,女性阳性率高于男性,差异有统计学意义（14.9% vs 5.8%,P=0.036）,但阳性率与年龄（P=0.294）、远处转移（P=0.464）、病理类型（P=0.302）及吸烟史（P=0.096）无显著相关。纳入患者中184例同时完成EGFR突变检测,突变阳性率为39.1%。其中,女性阳性率显著高于男性（65.6% vs 25.0%,P<0.001）,腺癌显著高于其他病理类型（P<0.001）,无吸烟史患者高于有吸烟史患者（45.3% vs 28.4%,P=0.023）,Ⅰ期（P=0.045）和瘤体直径≤5 cm（P=0.020）的患者突变阳性率亦偏高。但EGFR突变阳性率与年龄（P=0.853）、远处转移（P=0.921）无显著相关。184例同时检测EML4-ALK基因和EGFR基因的患者中,有3例为双突变阳性,发生率为1.63%。结论:无锡地区NSCLC的EML4-ALK融合基因、EGFR基因突变、共存突变的阳性率及其与临床病理特征的关系与国内外报道相仿。EML4-ALK融合基因及EGFR基因突变对临床治疗具有重要指导价值,共存突变患者的临床治疗方案仍有待进一步研究提供循证依据。     

非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因突变研究

背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要类型,相关位点突变检测研究已经成为肺癌分子靶向治疗的热门方向,研究NSCLC肿瘤组织中动物微管相关蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因(echinodem microtubule associated protein like 4-Anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的基因突变状态,比较免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)与蝎形探针扩增阻滞突变系统(Scorpions amplification refractory mutation system,Scorpions ARMS)荧光定量PCR与荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变的敏感性。方法应用IHC、ARMS荧光定量PCR及FISH技术检测85例NSCLC石蜡包埋肿瘤组织以及癌旁正常肺组织中EML4-ALK融合基因状态,并应用ARMS方法检测EGFR基因第18、19、20和21外显子突变状态。结果 115例NSCLC中IHC显示32例有ALK(D5F3)表达,表达率为27.8%;ARMS检测27例存在EML4-ALK融合基因突变,突变检出率为23.5%;53例检出EGFR突变,突变率为46%。而FISH检测23例存在EML4-ALK融合基因突变,检出率为20%,稍低于ARMS检测结果,提示ARMS的敏感度更高。结论联合运用IHC/ARMS荧光定量PCR/FISH技术能够对EML4-ALK融合基因状态做出快速、准确评价。     

肺癌EGFR和EML4-ALK基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨肺癌患者标本表皮生长因子受体(EGFR)和棘皮动物微管结合蛋白样4与间变性淋巴激酶融合基因(EML4-ALK)突变与临床病理特征的相关性。方法选取2016年8月至2018年7月间上海市同济大学附属东方医院收治的212例肺癌患者标本,包括腺癌165例和其他组织学类型47例,均采用荧光PCR法检测EGFR和EML4-ALK突变,对EML4-ALK突变阳性的标本行FISH融合基因检测及AB-PAS特殊染色,分析基因突变的特点及与临床病理特征的相关性。结果EGFR总突变率36. 8%(78例),女性高于男性,年龄<60岁者高于≥60岁者,腺癌高于非腺癌患者,与低分化腺癌相比,中、高分化腺癌EGFR突变率更高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。EML4-ALK突变7例,总突变率为3. 3%(7例),年龄<60岁患者阳性率高于≥60岁患者,腺癌高于非腺癌(P <0. 05)。突变主要见于含有细胞内或细胞外黏液成分的腺癌患者。212例标本中,手术标本突变率41. 0%,活检小标本突变率29. 6%,细胞学样本突变率33. 3%,但三者之间差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论肺癌EGFR突变率高于EML4-ALK突变率,但两者在临床和病理特征上有一定相似性,女性、年龄较小和腺癌患者更常见。与低分化腺癌相比,中、高分化腺癌EGFR突变率更高,EML4-ALK突变患者一般含小灶细胞内或细胞外黏液成分,但送检标本类型对基因突变无较大影响。     

EML4-ALK在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 探讨EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学SP法及组织芯片技术检测245例NSCLC及80例癌旁组织中EML4-ALK的表达情况,并分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果 EML4-ALK蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率为7.35％（18／245）,而在癌旁组织中无表达。EML4-ALK在NSCLC中的表达与性别、吸烟史、病理类型及临床分期密切相关（P＜0.05）。结论 EML4-ALK可能在NSCLC的发生、发展过程中起到了重要作用,可作为潜在的治疗靶点。     

Ventana免疫组化检测非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因及其结果判读难点分析

目的 分析Ventana免疫组织化学染色（IHC）检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中EML4-ALK融合基因的突变情况。解析Ventana IHC结果 判读的难点和陷阱,为此项检测的开展提供参考。方法 回顾性分析695份Ventana IHC检测NSCLC标本,对部分标本进行了实时定量PCR（qRT-PCR）对照研究。结果 EML4-ALK在腺癌中的突变率为8.78%,鳞状细胞癌中的突变率为4.49%,总突变率为8.48%。10例Ventana IHC为（-）和（+）标本qRT-PCR检测为阴性;5例Ventana IHC染色（+++）标本qRT-PCR检测均为阳性;5例Ventana IHC（++）标本qRT-PCR检测1例阳性。结论 EML4-ALK融合基因主要发生在肺腺癌。Ventana IHC检测结果 存在判读难点和陷阱,判读需要谨慎。EML4-ALK IHC检测阳性（++）的需要qRT-PCR或其它方法 进一步证实。     

KIF5B-RET融合基因在非小细胞肺癌中的研究进展

KIF5B-RET融合基因存在于部分非小细胞肺癌(NSCLC)中,是除EGFR、k-ras、EML4-ALK驱动基因之外另一个重要的酪氨酸激酶抑制剂作用靶点。该融合基因在不吸烟或少量吸烟、腺癌、无EGFR及k-ras突变、无EML4-ALK融合基因的NSCLC患者中发生率较高,并且对RET抑制剂(如凡德他尼)有较好的治疗反应。全文就KIF5B-RET融合基因的基本结构、功能、检测及其在NSCLC中的研究进展进行综述。     

EML4-ALK与EGFR基因突变共存型非小细胞肺癌研究进展

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)占肺癌的80%-85%。分子靶向治疗是目前NSCLC最热门也是最具前景的领域之一,其中的热点分子包括表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(echinoderm microtubuleassoci atedprotein like4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)等。既往研究认为EML4-ALK融合基因与EGFR突变不能共存。近期陆续报道了EML4-ALK融合基因与EGFR突变共存的病例。本文就EML4-ALK融合基因及EGFR突变基因的分子结构、发生率和目前已报道双突变患者的临床特点等进行综述。     

非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的生物学特性及其治疗

在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中已发现棘皮动物微管相关蛋白样4(echinoderm microtubule-associated protein-like 4,EML4)和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)的融合基因.在不吸烟的NSCLC患者中大多可检测出EML4-ALK,其具有独特的病理学特征.EML4-ALK在体内外均有致癌性.ALK抑制剂(crizotinib)在EML4-ALK阳性的NSCLC患者中已取得较好的治疗效果.本综述重点阐述NSCLC中EML4-ALK的生物学特性、临床特征和治疗.     

山东地区非小细胞肺癌分子靶向治疗驱动基因表达情况及临床特征分析

背景与目的分子生物学靶向治疗已逐渐成为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的一个重要治疗手段,本研究通过分析山东地区NSCLC多种驱动基因表达情况及临床病理特征,为筛选分子靶向治疗目标人群提供理论依据。方法采用荧光探针PCR法检测表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）、棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase, EML4-ALK）、肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶（ROS proto-oncogene 1, receptor tyrosine kinase, ROS1）、鼠类肉瘤病毒癌基因（Kirsten rat sarcoma viral oncgene, KARS）基因表达情况,回顾性分析阳性病例的临床病理特征。结果 EGFR基因突变阳性率为36.70%,主要为19、21外显子突变,突变人群主要为女性、腺癌、不吸烟患者,组间差异有统计学意义。EML4-ALK融合基因重排阳性率为9.37%。人群特征主要为60岁以下不吸烟人群,组间差异有统计学意义,基因突变与病理类型和性别间无明显差异。ROS1融合基因重排阳性率为3.67%,均为60岁以下患者,组间差异有统计学意义。23份病例标本开展KRAS基因检测,阳性标本数2例,阳性率为8.70%。2份阳性标本均为60岁以上病例,男女各占1例,病理类型均为腺癌,均无吸烟史。此外,未发现有两种基因同时突变的病例。结论 EGFR、EML4-ALK、ROS1、KARS基因在NSCLC患者中存在较高的突变率,且具有不同的人群特征,在选择靶向治疗人群中具有重要意义。     

Detection of EML4-ALK fusion genes in a few cancer cells from transbronchial cytological specimens utilizing immediate cytology during bronchoscopy

The presence of fusion genes between the anaplastic lymphoma kinase (ALK) and echinoderm microtubule-associated protein-like 4 (EML4) genes is useful for determining appropriate molecular-targeted therapies in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). The diagnosis of NSCLC is often judged from transbronchial cytological specimens. The efficacy of RT-PCR for detection of EML4-ALK fusion genes in transbronchial cytological specimens has not been studied. Here, we evaluated the detection rate of EML4-ALK fusion genes in transbronchial cytological specimens positive for NSCLC by immediate cytology during bronchoscopic examination. Various numbers of H2228 cells carrying EML4-ALK variant 3 were combined with 1×10(6) wild-type WBCs. The RNA was extracted and the sensitivity of detection of the EML4-ALK fusion gene was determined using a nested RT-PCR. A total of 161 cell samples, from cases without available tissue samples, obtained by bronchoscopic examinations utilized for immediate cytology in patients with NSCLC were subsequently analyzed for EML4-ALK fusion genes using a nested multiplex RT-PCR. EML4-ALK variant 3 was detected in a small number of H2228 cells (10 cells), even in the presence of 1×10(6) WBCs (sensitivity: 0.001%). In the patient cytological samples, EML4-ALK fusion genes were detected in five of 161 NSCLCs (3.1%) and four of 88 adenocarcinomas (4.5%). Sequencing confirmed that these samples included three variant 1 genes, one variant 2 gene and one variant 3 gene. Using the same cytological samples, EGFR mutations were detected in 39 of 161 NSCLCs (24.2%) and 36 of 88 adenocarcinomas (40.9%). There was no case in which both EML4-ALK fusion and EGFR mutation were simultaneously detected. Rapid diagnosis during bronchoscopy utilizing immediate cytology contributed to the selection of the best samples for genetic analysis. EML4-ALK fusion genes as well as EGFR mutations were successfully detected in a small number of cancer cells from transbronchial cytological specimens using a nested multiplex RT-PCR. Our present strategy can be integrated into the clinical process without additional invasive examination of patients. In the era of molecular-targeted treatments for NSCLC, the combination of rapid diagnosis during bronchoscopic examination and stocking samples as cDNA could further correspond to genetic analyses of accumulating driver genes in NSCLC.     

EML4-ALK Rearrangement and Its Clinical Significance in Chinese Patients with Advanced Non-Small Cell Lung Cancer

Objective: To identify the clinicopathological characteristics and clinical outcomes of Chinese patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) and to investigate possible associations of NSCLC with echinoderm microtubule-associated protein-like 4 (EML4)-anaplastic lymphoma kinase (ALK) and epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations. Methods: Patients with stage IV NSCLC were screened for EML4-ALK rearrangement and EGFR mutations at the Peking University Cancer Hospital. EML4-ALK was identified using fluorescent in situ hybridization and confirmed by immunohistochemistry. EGFR mutations were determined using denaturing high-performance liquid chromatography. Results: The incidence of EML4-ALK was 9.7% (11/113). Patients with EML4-ALK were more likely to present the EGFR wild type (WT; p = 0.033). Response to EGFR-tyrosine kinase inhibitor (TKI) was similar between patients with EML4-ALK rearrangement and EGFR mutation (33.3 vs. 46.9%, p = 0.451), but progression-free survival (PFS) was inferior compared to those with EGFR mutation (2.1 vs. 8.8 months, p = 0.032), and similar to patients with WT/nonrearrangement (2.1 vs. 2.2 months, p = 0.696; and general p = 0.023 between the three cohorts). Moreover, 2 patients with concurrent EML4-ALK and EGFR mutations had superior PFS after EGFR-TKI compared to patients with single EML4-ALK rearrangement. Conclusions: Patients with EML4-ALK conferred similar objective response rates after EGFR-TKI although inferior PFS compared to those with EGFR mutation. Coexistence of EML4-ALK and EGFR mutation might represent a separate NSCLC genotype.