核转录因子-κB在肝细胞生长因子介导的肝干细胞抗凋亡效应中的作用

目的:研究核转录因子-κB(NF-κB)在肝细胞生长因子(HGF)介导WBF-344细胞凋亡信号转导调控中的作用。方法:为明确HGF对肝干细胞的抗凋亡作用,在加或不加HGF情况下WBF-344细胞用放线菌素D(ActD)20ng/mL、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡,DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。为检测NF-κB的活性,用NF-κB报告基因质粒BD Great EscA PeTMSEAP vector瞬时转染WBF-344细胞,通过BD Great EscAPeTMSEAP荧光检测系统检测NF-κB的转录活性。为明确NF-κB活化在HGF介导抗凋亡效应中的作用,我们用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和aspirin(ASA)预处理WBF-344细胞,然后用HGF刺激,再通过ActD20ng/mLTNF-α诱导细胞凋亡效应。为证实这一结论,我们用NF-κB抑制质粒转染WBF-344细胞,筛选稳定表达株。转染细胞用HGF刺激48h,然后检测抗凋亡效应。结果:TNF-α可以诱导ActD致敏的WBF-344细胞凋亡。HGF对WBF-344细胞的凋亡具有保护作用。HGF能够明显促进NF-κB活...     

灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠睾丸细胞凋亡及核转录因子NF—κB／P65表达的影响

目的观察灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠睾丸细胞凋亡及核转录因子NF-κB／P65表达的影响。方法Wistar雄性大鼠50只,随机分成3组（对照组、模型组、灵芝组）。TUNEL法检测睾丸细胞凋亡率,免疫组化法检测核因子-κB转录（NF—κB／P65）蛋白的表达。结果模型组细胞凋亡率和NF-κB／P65的表达均明显高于对照组和灵芝组（P〈0．05）。结论灵芝孢子粉对糖尿病大鼠睾丸组织具有保护作用,可抑制睾丸细胞凋亡,可能与其减轻氧化应激、减少糖尿病睾丸过度表达NF-κB／P65有关。     

急性炎症反应中真核细胞转录因子-κB的信号转导作用

真核细胞转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种普遍存在于真核细胞中具有序列特异性二聚体结构的转录因子,是所有Rel家族DNA结合蛋白的总称,在调节免疫应答、炎症反应及细胞增殖、分化及凋亡等方面起关键作用[1] .NFκB转录复合体包括一系列由p50、p52、Rel A(p65)、Rel B和c-Rel等亚基构成的同型或异型二聚体,这些复合体结合到DNA的调控区域(称为κB位点)后,激活特异靶基因的表达活性[2].通常情况下,NF-κB存在于细胞浆中,并与其抑制蛋白(inhibitory-κB,I-κB)家族相结合,后者遮蔽了NF-κB的细胞核定位信号位点,并阻止了细胞核摄取NF-κB.     

三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡与核因子-κB活化的关系

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导白血病细胞凋亡与核因子-κB（NF-κB）活化以及血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP9）表达的关系,应用流式细胞仪Annexin V FITC法检测白血病细胞系K562-n凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析K562-n细胞NF-κB、VEGF、MMP9表达的动态变化.结果显示：As2O3在诱导K562-n细胞凋亡的过程中可活化NF-κB,而VEGF、MMP9的表达也随之增强.地塞米松（DXM）1μmol/L能显著增加As2O3诱导K562-n细胞凋亡的作用和抑制K562-n细胞NF-κB活化,细胞凋亡增加率为43.04%,（P＜0.05）,NF-κB活化抑制率为31.15%（P＜0.05）,VEGF、MMP9变化与NF-κB一致.结论：As2O3诱导K562-n细胞凋亡的过程中可使NF-κB活化,VEGF、MMP9表达亦随之增强;DXM可通过抑制NF-κB活化增强其诱导K562-n细胞凋亡的作用,VEGF、MMP9的表达也随之下降.     

亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡的过程中抑制了转录因子NFκB的激活

本实验研究亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡过程中对转录因子NFκB活性的影响。用Western印迹法检测细胞核提取物中NFκB亚基P65的含量；用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡；用MTT法观察对细胞的生长抑制。结果显示：亚硒酸钠(≥5μmol／L)可抑制NB4细胞生长和诱导细胞凋亡，同时亚硒酸钠作用时间和浓度相关性地抑制了转录因子NFκB的激活。结论：抑制NFκB激活可能是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的途径之一。     

核转录因子-κB在急性肾损伤细胞凋亡中的作用

急性肾损伤是临床常见的危重症,病死率高,缺乏有效的防治措施.研究发现,细胞凋亡在急性肾损伤的发生机制中起着重要作用.核转录因子-κB (NF-κB)是具有多向转录调节作用的核蛋白因子,与细胞凋亡关系密切,参与多种凋亡相关基因的转录调控,具有抑制和促进细胞凋亡的双向作用.本文就NF-κB信号传导在急性肾损伤细胞凋亡中的作用作一综述.     

α-黑素细胞刺激素诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用

目的:研究α-黑素细胞刺激素对恶性黑色素瘤细胞凋亡特性的影响。方法:实验于2002-10/2004-05在解放军第二军医大学完成。采用流式细胞检测分析、电镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测α-黑素细胞刺激素作用后恶性黑色素瘤细胞的凋亡情况,应用电泳迁移改变分析方法检测NF-κB相对活性。结果:α-黑素细胞刺激素作用1,3,24h恶性黑色素瘤细胞NF-κB相对活性分别为91.2%,52%,31%;细胞凋亡率分别为14.9%,33.7%,46.7%,各组间差异均具有显著性意义(P<0.05);α-黑素细胞刺激素作用24h组细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯状”条带。结论:α-黑素细胞刺激素能下调NF-κB的活性表达并诱导恶性黑色素瘤细胞的凋亡。     

Ad5F35嵌合腺病毒载体介导的突变性IκBα对白血病细胞凋亡的诱导作用

多种不同类型的白血病均存在持续活化的核转录因子κB(NF-κB),而抑制NF-κB活化诱导细胞凋亡有可能成为治疗白血病新的方法。本研究探讨修饰的5型腺病毒载体即Ad5F35嵌合腺病毒载体(Ad5F35 Vec)介导的突变性IκBα(IκBαDN)对白血病细胞凋亡的作用。将携带缺失5’端1-70个氨基酸编码序列的人IκBαAd5F35-IκBαDN Vec转染HL-60细胞。采用流式细胞术、DNA结合试验、实时定量PCR和Western blot技术分别检测细胞凋亡、NF-κB DNA结合活性、IκBα,cIAP-2和xIAP的表达。结果显示,转染48小时后,转染Ad5F35-IκBαDN Vec细胞、空白载体Ad5F35-EGFP Vec细胞以及未转染细胞的凋亡率分别为(22.53±2.999)%,(6.08±2.464)%和(4.86±1.366)%,其差异具有显著意义(Ad5F35-IκBαDN Vec vs未转染:p<0.001;Ad5F35-IκBαDNVec vs Ad5F35-EGFP Vec:p<0.001,p<0.002)。同时,NF-κB DNA结合活性降低,IκBα表达增加,但cIAP-2和xIAP mRNA的表达降低。结论:Ad5F35 Vec能够有效介导IκBαDN cDNA在HL-60细胞的表达,IκBαDN可抑制HL-60细胞NF-κB DNA结合活性并诱导其凋亡。     

NF-κB与糖尿病关系的研究进展

核因子-κB（NF-κB）是一种能与免疫球蛋白轻链基因启动子或增强子κB位点特异性结合并促进基因转录的核蛋白因子,它参与调控免疫反应、炎症反应、细胞生长分化、细胞粘附和细胞凋亡。近年来研究表明,NF-κB在糖尿病及其并发症的发生中起着重要的作用。     

柔红霉素对HL-60细胞的促凋亡作用及其与ROS、CER、NF-κB关系的实验研究

目的：探讨柔红霉素（DNR）在体外作用于HL－60细胞时细胞发生凋亡的规律及一些相关机制。方法：应用光镜、流式细胞仪（FCM）及DNA电泳检测DNR诱导HL－60细胞的凋亡作用；用免疫细胞化学（IC）、FCM观察相关蛋白的变化。加入活性氧（ROS）抑制剂四氢吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）或神经酰胺（CER）合成酶抑制剂马廉菌素B1（FB1）后，观察DNR诱导的HL－60细胞凋亡率的变化。结果：当DNR浓度为0．2－2．0μmol/L时，HL－60细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的DNA梯度条带。当1．0μmol/L DNR作用于HL－60细胞后，细胞中Bcl-2与C－myc蛋白的荧光强度指数（FI)总的趋势降低，Bax、caspase-3的FI值在作用2h时上升，而5h时降低，核因子κB（NF-κB）的FI值持续升高。PDTC可抑制DNR对HL－60细胞的凋亡诱导作用，而FB1无影响。结论：一定浓度的DNR在体外诱导HL－60细胞凋亡，发生凋亡的机制可能是通过抑制Bcl-2和C－myc蛋白的表达、激活Bax、caspase-3蛋白诱导的；此凋亡过程与ROS、NF－κB有关，而与CER合成酶无关。     

中药露蜂房蛋白对人红白血病细胞株K562细胞影响的实验研究

目的：研究中药露蜂房中蛋白成份抗白血病作用的机理，为中药露蜂房治疗白血病的临床应用和开发新的抗白血病药物提供实验和理论依据。方法：采用细胞培养和透射电子显微镜技术，观察中药露蜂房蛋白成份对人红白血病细胞（K562细胞）的生长抑制作用和形态结构的影响，采用免疫组织化学方法测定露蜂房蛋白对K562细胞凋亡相关信号转导蛋白NF-κBp65、β-catenin及iNOS表达的影响。结果：（1）与生理盐水对照组比较，露蜂房蛋白处理组白血病细胞生长饱和密度降低，细胞增殖活性减弱（P＜0．05）；（2）露蜂房蛋白处理组白血病细胞呈典型的凋亡形态学改变；（3）与生理盐水对照组比较，露蜂房蛋白处理组白血病细胞中NF-κBp65、β-catenin及iNOS表达减弱，NF—κBp65和β-catenin细胞核内转导减少（P＜0．05）。结论：中药露蜂房蛋白成份有明显抑制K562细胞的作用，其作用机制可能是通过调节凋亡相关信号传导因子NF-κBp65、β-catenin及iNOS的表达，从而诱导白血病细胞凋亡。     

硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）,用RT—PCR法检测药物孵育前后NF—κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的袁达水平下调。结论：硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF—κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。     

转录因子核因子-kappa B抑制剂硼替佐米防治移植物抗宿主病的研究进展

移植物抗宿主病（GVHD）是造血干细胞移植后的主要并发症和造成患者死亡原因之一,是体内源于供者的免疫活性细胞介导的攻击宿主细胞和器官的一种过度的炎症反应。转录因子核因子-kappa B（NF-κB）是一种具有多项转录调节作用的DNA结合蛋白,在各种免疫细胞激活的获得性免疫或固有免疫过程中以及细胞因子的产生中都起着关键作用,从而引起机体免疫和GVHD的发生和进展。国内外多项研究表明,硼替佐米可作用于NF-κB细胞信号通路,抑制免疫细胞的活化,从而抑制GVHD的产生和发展,对预防和治疗GVHD起着重要作用,具有广阔的应用前景。本文将就NF-κB的信号通路,以及硼替佐米在预防和治疗GVHD的作用机制和研究进展进行综述。     

东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-κB表达的影响

目的 探讨东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法 72只健康SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和东菱迪芙组，采用大脑中动脉线栓法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，在大鼠脑缺血2h再灌注22h时，用免疫印迹法检测海马核因子-κB（NF-κB）、抑制蛋白-κB（IκB）、Bel-2、Bax的活性。用氯化三苯四氮唑染色和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别观察脑梗死体积比和凋亡细胞数。结果 脑缺血．再灌注后，NF-κB、Bcl-2、Bax的活性明显升高，IκB的活性明显下降，凋亡细胞数、梗死体积比明显增高。东菱迪芙可明显降低NF-κB的活性、Bax的表达、凋亡细胞数、梗死体积比，增加IκB和Bcl-2的表达。结论 东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，抑制IκB的降解及NF-κB的活性，从而减轻脑细胞凋亡是其脑保护机制之一。     

α—黑素细胞刺激素诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用

目的：研究α—黑素细胞刺激素对恶性黑色素瘤细胞凋亡特性的影响。方法：实验于2002—10／2004—05在解放军第二军医大学完成。采用流式细胞检测分析、电镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测α—黑素细胞刺激素作用后恶性黑色素瘤细胞的凋亡情况，应用电泳迁移改变分析方法检测NF-κB相对活性。结果：α—黑素细胞刺激素作用1，3，24h恶性黑色素瘤细胞NF—κB相对活性分别为91.2％，52％，31％；细胞凋亡率分别为14．9％，33．7％，46．7％，各组间差异均具有显著性意义(P&;lt;0．05)；α—黑素细胞刺激素作用24h组细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯状”条带。结论：α—黑素细胞刺激素能下调NF—κB的活性表达并诱导恶性黑色素瘤细胞的凋亡。     

MG132、顺铂联合用药对Caov-3细胞中NF-κB、VEGF表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132与DDP联合用药前后卵巢癌细胞株Caov-3细胞内NF-κB、VEGF表达情况。方法免疫组化SP法测定用药前后Caov-3细胞中NF-κB、VEGF的表达情况。结果免疫组化结果显示MG132、DDP联合用药作用24 h后Caov-3细胞中NF-κB、VEGF表达均下调,与对照组、DDP组比较差异有显著性（P〈0.01）,联合用药组各组间两两比较差异有显著性（P〈0.01）。结论 MG132能通过抑制NF-κB活性诱导卵巢癌细胞Caov-3凋亡,抑制肿瘤血管生长。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

LHRH-PE40诱导分化胃癌细胞凋亡的研究

目的研究NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA及其蛋白在诱导分化BGC-823细胞中的表达,探讨LHRH-PE40与胃癌细胞凋亡的关系。方法应用RT-PCR、Western blot法检测BGC-823细胞中NF-κB P65mR-NA、Caspase-3mRNA表达及其蛋白的表达情况。结果 LHRH-PE40诱导BGC-823细胞凋亡时,NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA表达水平有所增加,NF-κB P65和Caspase-3P20活性片段也增加。结论 LHRH-PE40可以诱导胃癌细胞内NF-κB的活化;引起Caspase-3级联反应,促进细胞凋亡。     

以Ref-1为靶点的基因治疗在大肠癌5-FU化疗增敏中的作用及机制研究

目的探讨以Ref-1为靶点的基因治疗在大肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗增敏中的作用及其可能机制。方法构建Ad5/F35-Ref-1小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒(siRef-1)敲低Ref-1蛋白表达,MTT法检测不同剂量5-FU作用LOVO细胞存活率的改变;TUNEL法检测LOVO细胞凋亡;Western blot检测Ref-1蛋白表达;EMSA测定核转录因子κB(NF-κB)的DNA结合活性。结果感染siRef-1腺病毒较感染对照腺病毒的LOVO细胞对5-FU的敏感性明显增强,半数抑制浓度(IC50)分别为1.69、7.04μmol/L;且siRef-1显著增加5-FU诱导的细胞凋亡。5-FU呈剂量依赖性诱导LOVO细胞Ref-1蛋白表达,同时伴有NF-κB活性增强。siRef-1抑制5-FU诱导的LOVO细胞Ref-1蛋白表达以及NF-κB激活。结论以Ref-1为靶点的治疗显著增强大肠癌细胞5-FU化疗敏感性,其机制可能主要是通过抑制大肠癌细胞NF-κB活性和碱基切除修复功能。     

男性不育与生精细胞凋亡

目的 探讨男性不育与生精细胞凋亡之间的关系。方法 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记技术（TUNEL）及免疫组化技术，检测168例男性不育患者的睾丸组织中生精细胞凋亡指数和Bcl-2及Fas的阳性表达率。结果 与正常睾丸生精细胞对比，男性不育患者生精细胞凋亡指数明显升高（P〈0．05），Fas阳性表达率差异有显著性（P〈0．01），但Bcl-2的阳性表达率差异无显著性（P〉0．05）。结论 男性不育与生精细胞凋亡调控基因Fas过高表达，促进生精细胞凋亡密切相关。