神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

目的：观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组，每组10只；损伤组和移植组制作成L4平面的脊髓全横断模型，将培养的大鼠NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处，损伤组注射等量的生理盐水。术后2个月，采用BBB评分、皮层体感诱发电位(CSEP)和辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。结果：术后2个月BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复，但都未达到正常水平，其中移植组的大鼠恢复较好，评分较高，与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后，损伤组、移植组的CSEP波消失，术后2个月移植组的波形有所恢复，但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元，损伤组未见阳性神经元，移植组可见有阳性神经元，但数目较对照组少。结论：NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。     

督脉电针与NSCs移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤组织NT-3含量及受体表达的影响

目的：探讨督脉电针与神经干细胞（NSCs）联合应用对大鼠脊髓全横断损伤组织神经营养素-3（NT-3）含量及其受体表达的影响。方法：将30只成年大鼠分为对照14d组、督脉电针14d组（电针14d组）、神经干细胞移植14d组（NSCs 14d组）、督脉电针＋神经干细胞移植14d组（电针NSCs 14d组）、神经干细胞移植30d组（NSCs 30d组）和督脉电针＋神经干细胞移植30d组（电针NSCs 30d组）6组，所有动物均实施T10段脊髓全横断手术．其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。结果：①电针NSCs 14d组受损伤的脊髓组织含有较高水平的NT-3，其次是电针14d组和NSCs 14d组，对照14d组受损伤的脊髓组织含有较低水平的NT-3。②NSCs30d组和电针NSCs30d组脊髓全横断处的移植神经干细胞均有TrkC表达。结论：督脉电针与神经干细胞移植联合应用能够明显增高大鼠脊髓全横断损伤处邻近组织的NT-3水平；在大鼠脊髓损伤处及邻近组织有些移植神经干细胞表达TrkC。     

神经营养素-3基因修饰骨髓间充质干细胞的明胶海绵圆柱体支架移植促进大鼠全横断脊髓损伤部分结构和功能修复的研究

目的:探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)的明胶海绵圆柱体支架移植对大鼠全横断脊髓损伤部分结构和功能修复的影响。方法:选取15只SD大鼠,随机分成3组:①NT-3基因修饰MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植组(NT-3-MSCs组);②MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植组(MSCs组);③单纯明胶海绵圆柱体支架移植组(control组)。在脊髓全横断后施行上述支架移植,在一定时间点比较3组动物功能恢复情况及其脊髓损伤区的结构变化。结果:NT-3-MSCs组BBB功能评分、移植的MSCs存活数、神经丝蛋白-200(NF-200)阳性纤维计数和平均空洞面积均优于其余组别(P<0.05)。结论:NT-3基因修饰MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植能够促进大鼠脊髓损伤部分结构和功能的修复,为临床治疗脊髓损伤提供实验依据。     

神经营养素-3基因修饰雪旺细胞和神经营养素-3受体基因修饰脊髓间充质干细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠神经元存活的研究

目的：探讨神经营养素-3 (NT-3) 基因修饰雪旺细胞（SCs）和神经营养素-3受体 (TrkC) 基因修饰骨髓间充质干细胞（MSCs）联合移植对全横断脊髓损伤（SCI）大鼠的大脑皮质感觉运动区、红核和背核受损伤神经元存活的影响,为细胞治疗和基因治疗的临床应用提供依据。方法：将含有NT-3-SCs和TrkC-MSCs的PLGA高分子支架移植到大鼠脊髓全横断损伤处。在术后第67天,取其大脑和脊髓进行冷冻切片。用免疫荧光组织化学染色方法,检测SCI处SCs和MSCs的存活及其外源性基因的表达,并计算大脑皮质感觉运动区内锥体细胞层、中脑红核和L1脊髓背核的神经元数量。结果：2个月后,可见SCI处有移植的SCs和MSCs,其中转染的外源性基因NT-3和TrkC可在移植细胞内表达。NT-3-SCs+TrkC-MSCs移植组大脑皮质感觉运动区内锥体细胞层、中脑红核和L1脊髓背核的神经元数量明显高于其他组。 结论：NT-3基因修饰SCs和TrkC基因修饰MSCs联合移植能够促进全横断SCI大鼠的大脑皮质感觉运动区、中脑红核和脊髓背核受损伤神经元的存活。     

骨髓间充质干细胞移植脊髓全横断模型大鼠运动和体感诱发电位的评价

背景：临床常用皮质运动诱发电位和皮质体感诱发电位来分别评价脊髓损伤后运动传导路和感觉传导路的损伤或修复情况。目的：以脊髓诱导电位监测骨髓间充质干细胞移植后急性脊髓完全性损伤大鼠下肢神经功能的变化。方法：选取健康Wistar大鼠50只,分成5组,即生理盐水组、骨髓间充质干细胞移植组、脑源性神经营养因子修饰组、神经营养素3＋骨髓间充质干细胞移植组和假手术组。除假手术组外,其余各组均制作Allen’s脊髓完全性损伤动物模型,造模后各组均行相应治疗。治疗后4,8和12周行大鼠后肢运动功能评分,并于造模后24h,3,7,14d行运动和体感诱发电位检测。结果与结论：运动诱发电位检测结果提示,各治疗组的运动功能均有不同程度的恢复,与生理盐水组间差异均有显著性意义（P〈0.05）,大鼠后肢BBB评分也证实了各治疗组后肢运动功能明显优于生理盐水组（P〈0.05）。提示经脑源性神经营养因子修饰的骨髓间充质干细胞可移植到脊髓损伤处,可改善大鼠的后肢运动,神经营养素3蛋白有可能提高骨髓间充质干细胞在体内的生存率,促进受损脊髓的轴突再生。     

督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进SCI横断大鼠前角运动神经元存活及减轻后肢肌萎缩的研究

目的：探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤的前角运动神经元存活以及减轻后肢肌萎缩有无促进作用。方法：将正常组、对照组、督脉电针组（电针组）、神经干细胞移植组（NSCs组）和督脉电针＋神经干细胞移植组（电针NSCs组）成年大鼠T10脊髓段做全横断损伤，其中NSCs组和电针NSCs组在损伤处移植神经干细胞，电针组和电针NSCs组在术后开始接受督脉电针治疗。所有实验动物在脊髓损伤后存活65天。结果：电针NSCs组大鼠其腰段脊髓受损伤运动神经元的存活数量明显多于其他实验对照组大鼠。电针NSCs组大鼠后肢的股二头肌萎缩程度明显小于其他实验对照组大鼠。结论：督脉电针与神经干细胞移植联合应用能够促进大鼠脊髓全横断损伤后受损伤的脊髓前角运动神经元存活，以及减轻大鼠脊髓全横断损伤后瘫痪的后肢股二头肌的萎缩状况。     

周围神经联合生长因子移植治疗急性脊髓损伤

背景:目前促进神经再生与修复的策略也主要是通过促进神经内在的再生能力和改善再生的微环境两大途径,已有的研究表明联合应用一些治疗手段能更好地促进神经轴突的再生生长.目的:探讨周围神经联合生长因子移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性及效果.方法:健康成年雌性SD大鼠60只,随机数字表法分为4组;神经移植组、神经移植联合生长因子组、脊髓横断组、椎板切除组.以T_9为中心纵行切开大鼠皮肤,显露硬膜囊,水平切断脊髓并切除3mm,神经移植组、神经移植联合生长因子组取双侧第8～10对肋间神经各2 cm,将自体肋间神经修剪成合适长度后交叉移植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),神经移植组用纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,神经移植联合生长因子组用含有2.1 mg/L酸性成纤维细胞生长因子的纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,缝合硬膜.脊髓横断组断端间旷置,椎板切除组仅行椎板切除术.术后90 d进行体感及运动诱发电位检测,术后70 d进行Basso.Beattie.Bresnahan(BBB)后肢运动功能评分.结果与结论:椎板切除组均引出了体感及运动诱发电位;脊髓横断组未引出体感及运动诱发电位波形;神经移植组3只引出双侧体感诱发电位,4只引出单侧体感诱发电位,4只引出双侧运动诱发电位,3只引出单侧运动诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧体感诱发电位,2只引出单侧体感诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧运动诱发电位,2只引出单侧运动诱发电位.神经移植组、神经移植联合生长因子组大鼠体感及运动诱发电位潜伏期及波幅明显优于脊髓横断组(P<0.01),自体肋神经移植联合生长因子组优于神经移植组(P<0.01).椎板切除组大鼠麻醉清醒后运动恢复正常,脊髓横断组在3个月的生存期内后肢持续伸展、旋转,神经移植组和神经移植联合生长因子组大鼠后肢功能术后3周开始明显恢复,并在整个观察期内逐渐恢复.神经移植组和神经移植联合生长因子组BBB后肢运动功能评分较脊髓横断组明显提高(P<0.01),并且神经移植联合生长因子组较神经移植组高(P<0.01).提示单纯周围神经移植能部分恢复脊髓功能,联合生长因子则能更好地恢复脊髓功能.     

骨髓间充质干细胞移植脊髓全横断模型大鼠运动和体感诱发电位的评价

背景:临床常用皮质运动诱发电位和皮质体感诱发电位来分别评价脊髓损伤后运动传导路和感觉传导路的损伤或修复情况。目的:以脊髓诱导电位监测骨髓间充质干细胞移植后急性脊髓完全性损伤大鼠下肢神经功能的变化。方法:选取健康Wistar大鼠50只,分成5组,即生理盐水组、骨髓间充质干细胞移植组、脑源性神经营养因子修饰组、神经营养素3+骨髓间充质干细胞移植组和假手术组。除假手术组外,其余各组均制作Allen’s脊髓完全性损伤动物模型,造模后各组均行相应治疗。治疗后4,8和12周行大鼠后肢运动功能评分,并于造模后24h,3,7,14d行运动和体感诱发电位检测。结果与结论:运动诱发电位检测结果提示,各治疗组的运动功能均有不同程度的恢复,与生理盐水组间差异均有显著性意义(P<0.05),大鼠后肢BBB评分也证实了各治疗组后肢运动功能明显优于生理盐水组(P<0.05)。提示经脑源性神经营养因子修饰的骨髓间充质干细胞可移植到脊髓损伤处,可改善大鼠的后肢运动,神经营养素3蛋白有可能提高骨髓间充质干细胞在体内的生存率,促进受损脊髓的轴突再生。     

低强度超声联合神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤功能恢复的影响

目的研究大鼠脊髓横断损伤（SCI）后神经干细胞（NSCs）移植联合应用低强度超声（LIU）对其功能恢复的影响。方法32只成年SD大鼠随机分为：A组,对照组;B组,损伤组（SCI组）;C组,单纯移植NSCs组（NSCs）;D组,NSCs移植联合应用超声组（NSCs＋LIU）。每组8只。除A组外,其余3组制作T8平面脊髓全横断模型,将含有NSCs悬液的明胶海绵植入C组和D组横断损伤脊髓处,B组在损伤处移植含细胞培养液的明胶海绵,D组同时应用超声治疗。2个月后,实验各组采用BBB（Basso,Beatti,Bresnahan）评分、电镜和皮层体感诱发电位（CSEP）观察大鼠运动传导功能恢复的作用。结果术后2个月BBB评分,B组为（2.5&#177;1.05）分,C组为（5.0&#177;0.89）分,D组为（6.8&#177;0.75）分。C和D组评分明显高于B组,以D组最高（P〈0.05）。但未达到正常。脊髓损伤2个月后,B组波形仍完全消失,C组D组的波形有所恢复,但潜伏期延长,波幅幅度降低。电镜显示,C组D组损伤区见再生髓鞘、轴突及神经元。而B组仍见明显的髓鞘细胞变性及瘢痕组织。结论NSCs移植联合应用低强度超声能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。     

神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理盐水。术后个2月,采用BBB评分、皮层体感诱发电位CSEP和辣根过氧化物酶()()逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。HRP结果:术后个月2BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复,但都未达到正常水平,其中移植组的大鼠恢复较好,评分较高,与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后,损伤组、移植组的CSEP波消失,术后2个月移植组的波形有所恢复,但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元,损伤组未见阳性神经元,移植组可见有阳性神经元,但数目较对照组少。结论:NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。     

Mesenchymal stromal cells as universal donor cells

Stem cell transplantation is a promising approach for improving cardiac function after severe myocardial damage for which use of autologous cells have been preferred to avoid immune rejection. Recently, however, rodent as well as human mesenchymal stromal cells (MSCs) have been reported to be uniquely immune tolerant, both in in vitro as well as in vivo transplant models. In this editorial, we briefly summarize the current understanding of the underlying immunologic mechanisms, which can facilitate the use of such cells as “Universal Donor Cells.”     

视网膜细胞诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的探索乳鼠视网膜细胞体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的可行性。方法以大鼠BMSCs为研究对象，利用分层共培养的乳鼠视网膜细胞作诱导剂，进行增殖培养、分化诱导；免疫组化法进行细胞性质鉴定。结果加入乳鼠视网膜细胞共培养第7天有神经元样细胞形成，经nestin、NF鉴定为神经元样细胞。结论BMSCs在体外培养条件下，经过新生乳鼠视网膜细胞诱导，可以分化为神经元样细胞。     

干细胞向卵母细胞样细胞分化研究进展

胚胎干细胞和成体干细胞如骨髓间充质干细胞等在特定的培养条件下可向卵母细胞样细胞分化,但形成的卵母细胞样细胞能否进行减数分裂并进一步生成有受精能力和发育潜能的配子尚不清楚。若能在体外将成体干细胞向有功能的卵母细胞样细胞诱导分化,并通过体外受精的方式生成健康的子代,将为卵子缺乏所致不育女性提供一条新的治疗途径。本文对近年发表的有关干细胞体外向卵母细胞样细胞分化的文献进行综述,以探讨其临床应用的可行性。     

Perivascular cells as mesenchymal stem cells

Importance of the field: Mesenchymal stem cells are multipotent adult stem cell populations that have broad differentiation plasticity and immunosuppressive potential that render them of great importance in cell-based therapies. They are identified by in vitro characteristics based on their differentiation potential for clinical approaches while their biological properties and in vivo identities are often less understood.

Areas covered in this review: Recent research carried out in the last decade on mesenchymal stem cell biology suggests that mesenchymal stem cells from various tissues reside in a perivascular location and these can be identified as pericytes that function as mural cells in microvessels.

What the reader will gain: This review covers recent progress on understanding the link between pericytes and mesenchymal stem cells discussing specific points such as response to injury and tissue-specific functions.

Take home message: Despite a long and controversial history, there is a growing acceptance that perivascular cells are connected with mesenchymal stem cells, all that is really lacking is genetic evidence to show differentiation of pericytes into different cells types.     

Mast cells and fibroblasts: two interacting cells

Summary Mast cell (MC) fibroblast interactions may have a role in health and disease. We analyzed the relationships between these cells by utilizing our in vitro model in which mucosal (MMC) and connective tissue (CTMC) type MC were cocultured long-term with different fibroblasts. Mouse 3T3 fibroblasts were used to provide a normal iicroenvironment for MC, while fibroblasts derived from mouse with chronic graft-versushost disease (cGVHD) provided a fibrotic one. We found that both 3T3 and cGVHD fibroblasts maintain CTMC viability, phenotype and functional activity. When MMC were cocultured with 3T3 or cGVHD fibroblasts, they changed their phenotype towards that of CTMC. On the other hand, MCs were found to affect fibroblast properties. Coculture of MMC on 3T3 monolayers was shown to increase Forsmann antigen production and collagen synthesis and stimulate fibroblast proliferation. Resting CTMC or CTMC activated by anaphylactic stimuli induced 3T3 and cGVHD fibroblasts to proliferate more. In addition, CTMC activation increased collagen production by 3T3 fibroblasts. In conclusion, fibroblasts were found to regulate MC survival and differetion, whereas MCs were shown to affect the biochemical properties of fibroblasts, which can lead to fibrosis.     

Defining human endothelial progenitor cells

Summary.  There is no specific marker to identify an endothelial progenitor cell (EPC) and this deficiency is restricting the ability of an entire field of research in defining these cells. We will review current methods to define EPC in the human system and suggest approaches to define better the cell populations involved in neoangiogenesis. PubMed was used to identify articles via the search term 'endothelial progenitor cell' and those articles focused on defining the term were evaluated. The only human cells expressing the characteristics of an EPC, as originally proposed, are endothelial colony forming cells. A variety of hematopoietic cells including stem and progenitors, participate in initiating and modulating neoangiogenesis. Future studies must focus on defining the specific hematopoietic subsets that are involved in activating, recruiting, and remodeling the vascular networks formed by the endothelial colony forming cells.     

体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展

背景：克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。目的：探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以＂重编程,方法,体细胞,干细胞,分化＂或＂reprogramming,method,somatic cell,stem cell,differentiation＂为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。结果与结论：一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经样细胞的机制

目的探索骨髓间充质干细胞 (MSCs)在体外诱导分化为神经样细胞的机制。方法分离培养大鼠MSCs ,用二甲基亚砜 (DSMO)和丁羟茴醚 (BHA)诱导分化 ,检测诱导分化前、预诱导 2 4h、诱导分化后 6h、2 4h和 48h神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果诱导分化后 ,大部分MSCs变成双极、多极和锥形 ,并相互交织成网络结构 ,巢蛋白 (Nestin)在诱导分化前不表达 ,在诱导分化后 6h达到最高 ,2 4h和 48h逐渐降低。神经元特异性核蛋白 (NeuN )在诱导分化前不表达 ,在诱导分化后 6h出现表达 ,2 4h和 48h表达增强。结论MSCs经体外诱导先分化为神经干细胞 ,然后分化为神经元样细胞。     

返回式卫星搭载肿瘤细胞和生物工程细胞的初步研究

目的初步探讨空间环境对细胞生长特性的影响。方法利用细胞生存装置将肿瘤细胞及生物工程细胞于我国第 18颗返回式卫星返回舱内进行无源搭载。对返回细胞进行单克隆化 ,光学显微镜观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,MTT法测定细胞生长曲线。结果空间飞行后 ,肿瘤细胞与生物工程细胞存活率相比明显不同 ,均出现多种细胞形态 ;单克隆株与地面对照相比 ,倍增时间及增殖速度出现快慢不一的变化 ;细胞周期分布改变 ,G1期细胞增多 (P <0 0 5 ) ,S期细胞减少 (P <0 0 5 )。结论空间环境可导致细胞产生多种变异 ,但并非均为可遗传性变异 ,是否能够筛选出所需要的细胞株 ,需做进一步研究。     

NK 细胞上清液提高CTL 细胞对肝癌细胞杀伤力的研究

目的：研究用白细胞介素2（IL‐2）联合IL‐12、IL‐18以及三者共同活化NK细胞所提取的上清液与肝癌细胞共培养是否能提高AFP特异性的细胞毒性T细胞（CTL）对小鼠肝癌细胞的杀伤性。方法提取NK 细胞,分别用IL‐26000 IU／mL、IL‐26000 IU／mL＋ IL‐1210 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐l8100 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐1210 ng／mL＋IL‐18100 ng／mL活化NK细胞,3 d后提取上清液,ELISA检测上清液IFNγ表达量,然后将上清液与Hepa1‐6细胞培养过夜,流式细胞仪检测肿瘤细胞表面I类组织相容性抗原（M HC I）表达,以其为靶细胞检测AFP特异性的CTL细胞对 Hepa1‐6细胞杀伤率。结果NK＋IL‐2＋IL‐12、NK＋IL‐2＋IL‐18、NK＋IL‐2＋IL‐12＋IL‐18上清液的IFNγ含量高于NK＋IL‐2上清液的IFNγ含量（P＜0．05）,并且上述三组能有效提高小鼠 Hepa1‐6细胞表面M HC I的表达（P＜0．05）,从而显著提高了AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性,然而阻断IFNγ分泌,AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性降低。结论 NK 细胞上清液能够增强AFP特异性的CTL对肝癌细胞的杀伤作用。