薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

薯蓣皂苷元对U-2OS细胞MMP-9/TIMP-1 mRNA的影响

为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA所发生的变化,结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显的抑制作用,IC50(24h)为45 μmol／L:薯蓣皂苷元抑制U-2OS细胞MMP-9基因转录,而TIMP-1基因转录不受影响。说明薯蓣皂苷元明显抑制U-2OS细胞生长,抑制其MMP-9基因转录,对骨肉瘤侵袭和转移有一定抑制作用。     

薯蓣皂苷元体外抗肿瘤作用

探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用，采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM3株肿瘤细胞、HUCB和hRPE2株正常细胞体外生长的作用。结果：薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM、HUCB和hRPE等5种细胞的生长均有不同程度的抑制作用，1C250（24h）分别为45μmol／L、21．7μmol／L、15μmol／L、108．1μmol／L和78．5μmol／L。结论：薯蓣皂苷配基明显抑制肿瘤细胞生长的同时，对正常细胞也有毒性作用。     

薯蓣皂苷元抗骨肉瘤机制及与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的探讨薯蓣皂苷元抗骨肉瘤机制及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法通过动物实验检测薯蓣皂苷元对移植人骨肉瘤荷瘤鼠肿瘤增重的影响,用RT-PCR法、Envision法研究薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞及荷瘤裸鼠β-catenin的影响。结果 400、200、100 mg/kg薯蓣皂苷元灌胃对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,呈量效关系,抑瘤率30%～60%;100～400 mg/kg呈剂量依赖性抑制U-2OS细胞β-catenin的表达;400 mg/kg抑制荷瘤裸鼠β-catenin的表达。结论薯蓣皂苷元抗骨肉瘤机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的抑制及凋亡诱导作用

目的 探讨薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长抑制、诱导凋亡及其对细胞周期的影响.方法 体外MTT法测生长抑制率.Hochest染色观察药物作用后的细胞核形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对细胞周期、凋亡率和细胞DNA的影响.结果 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长.药物浓度为6.25、12.5、25和50μmol/L作用72 h的抑制率分别为:5.3%、5.5%、18.6%和77.8%,IC50为37.4μmol/L;薯蓣皂苷元50μmol/L作用24、48、72和96 h的抑制率分剔为:23.2%、66.1%、80.5%和89.3%.Hochest染色后,加药组细胞有明显的凋亡形态特征.流式细胞仪检测显示,薯蓣皂苷元25、50μmol/L组细胞凋亡率分别为19.06%和29.67%,细胞周期S期和G2-M期阻滞增加,彗星电泳显示,12.5、25和50μmol/L加药组形成拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者改变有剂量依赖关系.结论 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长和诱导其凋亡.     

薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。     

全反式维甲酸对骨肉瘤细胞OS732生长的影响

目的 观察全反式维甲酸（all—trails—retinoic acid，ATRA）对骨肉瘤细胞OS732生长的影响，并探讨其作用的分子机制。方法 用10^-5 MATRA作用骨肉瘤细胞OS732，6d后，进行细胞形态学观察、活细胞计数、流式细胞仪分析细胞周期、半定量RT—PCR检测细胞周期调控蛋白CyclinD（D1、D2、D3）、CD比、P21^WAF1 mRNA表达的改变。结果 ATRA作用后，OS732细胞胞浆展开，细胞核变小，核浆比例变小；瘤细胞生长减慢，细胞计数为正常对照组的39．5％；G0／G1期细胞明显增多，S期细胞减少，细胞阻滞于G0／G1期；CyclinD1、CyclinD2、CDK4mRNA表达均下降，尤以CycfinD2、CDK4下降最明显，CyclinD3、P21^WAF1mRNA未见明显改变。结论 10^-5M全反式维甲酸可明显抑制骨肉瘤细胞OS732的增殖，并使细胞周期出现G1／G0期阻滞，该作用可能与维甲酸处理后OS732细胞中CyclinD2、CDK4表达的下调以致低磷酸化pRb积累有关。     

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤Mg63细胞生长的研究

【目的】 探讨去甲二氢愈创木酸对骨肉瘤细胞Mg63的生长抑制作用及其机制. 【方法】 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)和克隆形成法测定去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞的生长抑制作用,检测其抑制骨肉瘤细胞生长的时间效应和剂量效应;用流式细胞技术进行细胞周期分析;用Western blot法检测药物对Mg63细胞mTORC1信号通路活性的影响.【结果】 去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞具有明显的生长抑制作用,且呈时间依赖和剂量依赖关系,72 h IC50值为(48 ± 2)μmol/L?10?20?50 μmol/L可显著抑制Mg63克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强?细胞周期阻滞于G0/ G1 期,mTORC1信号通路蛋白p-S6和p-4E-BP1与对照组相比明显下调. 【结论】 去甲二氢愈创木酸明显抑制骨肉瘤细胞mg63增殖,诱导细胞周期阻滞于G0/ G1 期,这一作用可能是通过对mTORC1信号通路的抑制完成.     

DADS对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响

目的：探讨二烯丙基二硫(DADS)对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响。方法将人骨肉瘤U-20S细胞随机分为DADS处理组与空白组,DADS处理组又分为15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L 4个不同浓度小组,每组分别作用于U-20S细胞24 h、48 h、72 h后进行相关检测,每组实验重复3次。采用MTT比色法测量不同的吸光值以检测DADS对人骨肉瘤细胞U-20S的抑制作用;Annexin V-FITC/PI染色法及流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期变化情况;Transwell侵袭实验通过计量同一视野下细胞数量以检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTT比色法结果显示,浓度为60 mg/L DADS处理组作用于U-20S细胞24 h后其吸光值比对照组低(P<0.05)。随着浓度的增加,DADS对骨肉瘤细胞抑制作用无明显增强,表明DADS对骨肉瘤细胞有抑制作用,但并不呈剂量-效应依赖关系;染色法及流式细胞术结果显示,60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h凋亡率为15.89%,高于空白组细胞的8.65%;60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h,G2/M期的细胞为10.44%,高于空白组G2/M期的细胞8.18%(P<0.05);侵袭试验结果显示,DADS处理组细胞计数为(63±2)个,较空白组细胞计数(104±3)个显著减少(P<0.05),表明DADS处理组能抑制细胞侵袭能力;细胞划痕试验结果显示,60 mg/L DADS处理组细胞划痕之间的距离大于空白组,以作用48 h抑制作用最为显著(P<0.05),表明DADS (浓度为60 mg/L)能抑制U-20S细胞的迁移,并且随着时间的增加,48 h抑制作用更加显著。结论 DADS能抑制骨肉瘤细胞株U-20S增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭和转移。     

人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用的研究

目的　探讨人参单体皂甙Rh2对体外培养的人喉癌细胞株Hep - 2的抗增殖作用及其作用机制。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)实验、流式细胞技术及免疫组织化学S -ABC法分别检测人参单体皂甙Rh2对喉癌细胞株Hep - 2的增殖、细胞周期的影响。 结果　 (1)人参单体皂甙Rh2可明显抑制Hep - 2细胞的生长 ,并呈剂量、时间依赖性作用。 (2 )人参单体皂甙Rh2 (30 μg/ml)处理细胞 2 4h :G1期细胞由 6 0 0 9%增加至6 8 86 % (P <0 0 1) ,S期细胞由 18 89%减少至 12 30 % (P <0 0 1) ,G2 /M期细胞及凋亡细胞无明显变化 (P>0 0 5 ) ,细胞阻滞于G1期。结论　人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep - 2具有明显的生长抑制作用 ,并可导致其G1期细胞周期阻滞。G1期细胞周期阻滞可能是人参单体皂甙Rh2抗肿瘤作用的机制之一     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

内毒素对睾丸功能影响的研究进展

众所周知生殖道感染、炎症和其他疾病可抑制雄性生殖功能,但对系统性炎症和疾病引起男性不育的具体机制却所知甚少。内毒素是一种高效炎症激活物,可诱导炎症感染、内毒素血症、败血症休克及多组织器官损伤等,虽然内毒素广泛用于其他系统的炎症研究,但对其在生殖系统炎症的研究较少,因而深入了解内毒素对睾丸功能的影响,有助于进一步理解内毒素所致疾病对雄性生殖功能的影响。本文就内毒素的结构和生物学功能及其对睾丸生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞功能的影响进行了相关研究。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法用MTT法测定莪术醇对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测莪术醇对SGC7—901细胞周期和细胞凋亡的影响。结果10、30、100μg／mL莪术醇均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;莪术醇能使S和G2／M期肿瘤细胞比例减少,G0／G1期肿瘤细胞比例增加,其中100μg／mL浓度的莪术醇作用最强（F=88．14,P〈0．01）;莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,其中100μg/mL浓度的莪术醇凋亡作用最强（F=34．14,P〈0．01）。结论莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。