淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝(MTT)比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果:作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及内毒素作用下IL-6表达的影响

目的初步研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLC)增殖以及在内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)作用下淫羊藿苷对h PDLC白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法组织块法原代培养并鉴定h PDLC,采用MTT方法检测淫羊藿苷(0、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)作用下h PDLC增殖的变化;利用PCR、ELISA方法检测淫羊藿苷对在LPS刺激下的人牙周膜细胞IL-6分泌的情况。结果一定浓度范围下(10-6~10-7mol/L)淫羊藿苷对h PDLC的增殖具有积极作用;在10μg/m L LPS作用下h PDLC的IL-6表达增多、活性增强,加入10-6mol/L淫羊藿苷处理后,对此加强效果有一定的抑制作用。结论在一定浓度范围作用下淫羊藿苷可促进h PDLC的增殖;同时,淫羊藿苷对LPS导致h PDLC的IL-6表达增强有一定的抑制作用。     

淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLC）增殖及对内毒素（Lipopolysaccha-ride,LPS）干扰下碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。方法：原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度（0、10^-5～10^-9mol／L）淫羊藿苷对PDLC增殖的影响;RT—PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALPmRNA表达和分泌的影响。结果：淫羊藿苷在一定浓度下（10^-6～10^-7mol／L）可促进PDLC增殖;10υg／mLLPS可抑制PDLC的ALP活性;加入10^-6mol／L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性。结论：淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖;可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性。     

淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素表达的影响

目的 探讨不同浓度淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素（OPG）表达的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,用四唑盐（MTT）法检测不同浓度淫羊藿苷（0、0.001、0.01、0.1、1 μg/ml）及50μg/ml牙龈卟啉单胞菌超声提取物,不同时间（24、48、72h）作用下人牙周膜细胞的增殖水平.用RT-PCR及Western blot检测48h人牙周膜细胞骨保护素mRNA和蛋白的表达.结果 淫羊藿苷从0.01～1μg/ml对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白的表达有促进作用（P＜0.01）,浓度为0.1μg/ml作用最显著.结论 淫羊藿苷可抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,促进人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达.     

淫羊藿苷对体外培养的人牙龈成纤维细胞的作用研究

目的 研究淫羊藿苷对体外培养的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)的作用.方法 体外培养HGF,用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷(0.001、0.01、0.1 μg/ml)、不同时间(24、48、72、96 h)作用下HGF的增殖水平.结果 淫羊藿苷(0.001～0.1 μg/ml)对HGF增殖具有促进作用(P<0.01),0.01 μg/ml 浓度作用最明显.结论 淫羊藿苷有促进HGF增殖的作用.     

淫羊藿苷对小鼠骨髓腔中成骨和成脂分化作用的研究

目的 :通过建立小鼠骨质疏松模型,研究口服淫羊藿苷(Icariin,ICA)对小鼠骨髓腔中成骨分化和成脂分化中的作用。方法:将36只小鼠随机分为3组,分别为假手术组(SHAM组)、卵巢切除组(OVX组)和卵巢切除并灌服淫羊藿苷组(ICA组)。ICA组按每kg体质量25 mg的剂量给予淫羊藿苷每日灌服,SHAM组和OVX组每日给予等体积0.9%氯化钠溶液灌服,于术后9周收样。取左侧股骨和胫骨进行切片染色,提取右侧骨组织中mRNA和蛋白,分析成骨和成脂基因和蛋白的变化。结果:①术后5周,OVX组体重显著高于SHAM组和ICA组(P<0.05)。②HE染色显示,与OVX组相比,ICA组骨髓腔中骨小梁生成增加了50%,脂肪细胞生成减少了70%。③q-PCR和Western blot结果分析显示,与OVX组相比,ICA组骨组织中成骨相关的基因和蛋白表达量显著升高,而成脂相关的基因和蛋白表达量显著降低。结论:口服淫羊藿苷可以通过促进骨吸收并抑制骨髓腔中脂肪细胞的形成,从而对预防和治疗骨质疏松具有重要的意义。     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

人牙周膜干细胞是牙周组织中具有自我更新和多向分化潜能的一类成体干细胞,在特定诱导条件下可以成骨分化。牙周膜处于一个相对乏氧的环境,人牙周膜干细胞在牙周膜中承载着多种机械应力。探讨乏氧环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响更接近于体内环境,更有助于获得真实的牙周组织改建的实验室资料。该文对乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响做一系统性回顾。     

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化能力影响的研究

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs-HSA)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)骨向分化能力的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,流式细胞仪检测牙周膜细胞表型分子CD44、CD146、stor-1、CD90,对其进行干细胞鉴定,将培养出的牙周膜干细胞与不同浓度的AGE-HSA共同培养,并矿化诱导后茜素红染色观察钙结节形成情况、碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real timePCR)检测成骨基因表达情况。结果:流式细胞仪细胞表型分析CD44、CD146、stor-1、CD90表达呈阳性。成骨诱导21 d后茜素红染色,对照组和实验组均出现不同程度的矿化结节,定量分析显示1、10、100、200μg/mLAGEs组矿化能力均比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间矿化能力均有统计学差异(P<0.05),且随着AGEs浓度的升高,矿化能力逐渐降低。成骨诱导7 d ALP染色比较发现各实验组均比对照组减弱。成骨诱导1周后RT-PCR检测各实验组的成骨基因ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2 mRNA表达水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间各成骨基因的表达也有统计学差异(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的骨向分化,并在一定范围内呈浓度依赖性。     

Up-regulation of estrogen receptor-beta expression during osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells

Background and Objective: Estrogen has been shown to up‐regulate the expression of osteoblastic phenotypes of human periodontal ligament cells via binding to estrogen receptors and may also help periodontal tissue regeneration. However, which subtype of estrogen receptor (α or β) is predominately expressed in human periodontal ligament cells, and how estrogen receptor expression is regulated during the osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells, is still unclear. This study aimed to explore the expression and regulation of estrogen receptor subtypes in human periodontal ligament cells and during their osteogenic differentiation. Material and Methods: Human periodontal ligament cells derived from 10 individual age‐matched donors (five male and five female donors) were cultured. Human periodontal ligament cells under osteogenic induction (group M) and the corresponding controls (group C) were harvested on days 7, 14 and 21 for estrogen receptor detection. Results: Both estrogen receptor‐α and estrogen receptor‐β mRNAs were expressed in human periodontal ligament cells from all of the 10 donors. Protein only of estrogen receptor‐β (not of estrogen receptor‐α) was detected and was shown to be located in the nuclei of human periodontal ligament cells. The expression levels of estrogen receptor‐β mRNA and protein from both male and female donors in group M were significantly higher compared with group C during the 21‐d study period. In comparison, the expression level of estrogen receptor‐α mRNA of the donors was not significantly different from that of the controls during osteogenic differentiation and no estrogen receptor‐α protein was detected. Conclusion: The results suggest that estrogen receptor‐β may be the predominant subtype expressed in human periodontal ligament cells and may actively participate in the osteogenic differentiation process of human periodontal ligament cells, both in male and in female subjects.     

影响牙周膜干细胞成骨分化能力的因素

牙周膜干细胞(PDLSC)是维持牙周组织动态平衡和缺损修复的关键细胞,被认为是牙周组织工程的关键种子细胞之一.近年来的研究证明其有较强的的增殖和分化能力,然而在不同因素影响下其功能差异也较大.认识并研究这些影响因素不仅有助于深入了解和发掘PDLSC的生物学功能,而且对于今后基于PDLSC的牙周修复与再生治疗具有指导意义.该文就影响PDLSC成骨分化的多种因素作一叙述,展望其在牙周缺损修复治疗中的应用前景.     

Epigenetic regulation of osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells in periodontitis

Periodontitis is an inflammatory disease characterized by alveolar bone loss. Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) have osteogenic differentiation potential, which can be influenced by epigenetics regulation in periodontitis. Therefore, this review aimed to shed light on the role of different epigenetic mechanisms in the osteogenic differentiation of PDLSCs and to consider the prospects of their possible therapeutic applications in periodontitis. Databases MEDLINE (through PubMed) and Web of Science were searched for the current knowledge of epigenetics in osteogenic differentiation of PDLSCs using the keywords “periodontal ligament stem cells”, “epigenetic regulation”, “epigenetics”, “osteogenic differentiation”, and “osteogenesis”. All studies introducing epigenetic regulation and PDLSCs were retrieved. This review shows that epigenetic factors like DNMT, KDM6A, HDACi, some miRNAs, and lncRNAs can induce the osteogenic differentiation of PDLSCs in the noninflammatory microenvironment. However, the osteogenic differentiation of PDLSCs is inhibited in the inflammatory microenvironment through the upregulated DNA methylation of osteogenesis-related genes and specific changes in histone modification and noncoding RNA. Epigenetics of osteogenic differentiation of PDLSCs in inflammation exhibits the contrary effect compared with a noninflammatory environment. The application of epigenetic drugs to regulate the abnormal epigenetic status in periodontitis and focus on alveolar bone regeneration is promising.     

������Ĥ��ϸ���ɹǷֻ�ǰ��miRNA����ײ������

目的探讨人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）成骨分化过程中miRNA表达谱的变化,以期为揭示PDLSCs成骨分化的分子机制提供基础。方法本研究于2012年1—12月在同济大学口腔医学院口腔生物医学及转化医学实验室、复旦大学公共实验平台完成。原代培养人PDLSCs,经流式细胞仪检测鉴定其干细胞特性（表达干细胞表面标志物STRO-1）;体外诱导其往成骨方向分化,经茜素红S及碱性磷酸酶显色试剂盒染色检测其成骨特性。再采用表达谱基因芯片,分析成骨诱导前后PDLSCs的miRNA表达,筛选出分化前后差异表达的miRNA。结果与未经成骨诱导的细胞相比,PDLSCs在成骨分化14d后,有11个miRNA的表达上调,13个miRNA的表达下调。结论PDLSCs具有成骨潜能,其成骨分化的机制可能与miRNA表达的改变有关。     

生长激素释放肽对牙周膜干细胞增殖、凋亡影响的研究

目的 观察生长激素释放肽(Ghrelin)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)增殖、凋亡的影响,探究其可能机制。方法 通过流式细胞术对培养的PDLSCs进行表面抗原鉴定,采用茜素红及油红O染色鉴定PDLSCs多向分化能力。CCK-8检测Ghrelin对PDLSCs增殖效应的影响;活死细胞染色检测Ghrelin作用下细胞状态;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法、TUNEL染色分别检测Ghrelin及其受体GHS-R1α拮抗剂D-Lys3-GHRP-6(DLS)对饥饿诱导下PDLSCs凋亡的作用。结果 本研究中所培养的PDLSCs为间充质来源的多能干细胞。100、200 ng/mL Ghrelin能够显著促进PDLSCs的增殖(P<0.05)。Ghrelin可抑制饥饿诱导的细胞死亡及凋亡,且凋亡抑制效应可以被DLS所逆转。结论 Ghrelin促进PDLSCs增殖,抑制无血清饥饿诱导的细胞凋亡,可能与Ghrelin激活PDLSCs细胞表面受体GHS-R1α有关。