甲型流感病毒天然免疫机制研究进展CSCD

流行性感冒病毒,简称流感病毒,属于正粘病毒科.流感病毒感染宿主后,急性高热、全身疼痛、显著乏力和呼吸道症状是其典型的临床症状.感染宿主后,可引起Toll样受体、RIG-Ⅰ样受体和NOD样受体等宿主模式识别受体介导的抗病毒信号通路的激活,诱导干扰素和IL-1,IL-18等细胞因子表达,起到抗病毒的作用.本文对这三类PRRs的作用机制进行阐述.     

多重RT-PCR方法检测甲型流感病毒

目的建立一种快速、敏感、特异的多重RT-PCR,同时检测甲型流感病毒中的3个分型:甲型H1N1流感病毒,季节性H1N1流感病毒,季节性H3N2流感病毒,并将此方法应用到实验室流感病毒核酸检测技术中。方法利用甲型流感病毒3个分型病毒的引物,在同一个RT-PCR反应体系中,对疑似流感咽拭子标本进行检测。结果多重RT-PCR对甲型流感病毒中分型病毒有较高的灵敏度和特异性,可直接从疑似流感标本中同时进行甲型流感病毒分型检测。结论此实验中采用的多重RT-PCR具有与常规RT-PCR一样的特异性和敏感度,而且比普通RT-PCR和病毒分离法更快速,也更简便。     

荧光定量PCR在筛查甲型流感病毒中的诊断价值

目的:探讨荧光定量PCR技术在筛查甲型流感病毒中的诊断价值。方法:用荧光定量RT-PCR方法检测150例疑似流感患者咽拭子中的甲型流感病毒RNA,用XT-1800全自动血液分析仪检测150例疑似流感患者EDTA抗凝全血中的白细胞计数,用胶体金法检测54例甲型流感病毒RNA阳性患者的甲型流感病毒核心蛋白。结果:在150例患者中,甲型流感病毒RNA检测阳性者有54例,阳性率为36%。54例甲型流感病毒RNA检测阳性者采用胶体金法检测甲型流感病毒核心蛋白,结果均为阴性。甲型流感病毒RNA检测阳性者白细胞计数为(6.81±2.12)×109/L,阴性者为(6.64±3.13)×109/L,白细胞计数在甲型流感患者和非甲型流感患者中无统计学差异(P0.05)。结论:荧光定量RT-PCR在检测甲型流感病毒RNA中有较好的阳性检出率,其敏感性和特异性明显优于胶体金方法和白细胞计数,能快速有效筛选出甲型流感患者,防止疫情爆发流行。     

甲型流感病毒跨种传播机制研究进展

甲型流感病毒可感染多种宿主,包括禽以及雪貂、猪、马等哺乳类动物和人类,水禽是甲型流感病毒的天然宿主,大部分亚型病毒都已经从水禽中分离。一般来说,流感病毒感染具有较严格的宿主限制性,目前只有H1、H2、H3三种亚型流感病毒在人群中流行,禽流感病毒H5N1、H9N2、H7N2、     

汕头市濠江区甲型H1N1流感病毒感染状况

目的了解汕头市濠江区甲型H1N1流感感染状况,为防控措施提供科学依据。方法在2010年1-9月期间,开展3次人群甲型H1N1流感病毒感染状况横断面调查,采用血凝抑制法检测居民甲型H1N1流感病毒血清抗体,对结果进行统计分析。结果 3次人群甲型H1N1流感病毒感染血清学检测,共检测480人,总阳性率为15%,各月份阳性率逐次下降（1月为20%、3月为15.2%、9月为9.4%）;各年龄组人群中,6～岁组阳性率（30.2%）最高,16～岁组阳性率（15.1%）次之,0～岁组幼儿阳性率（8.3%）再次之,≥60岁老人组阳性率（6.3%）最低。结论濠江区人群甲型H1N1流感病毒感染率较低,人群免疫屏障尚未完全建立,适当接种甲流疫苗仍有必要。     

抗禽流感(H5N1)免疫球蛋白制备及体外抑制甲型流感病毒FM1株的试验研究

目的:制备抗禽流感(H5N1)卵划黄免疫球蛋白(IgY),探讨其体外阻断甲型流感病毒FM1株的作用.方法:对经过禽流感疫苗免疫后产生并富集在卵黄中的卵黄免疫球蛋白进行提纯,用辛酸-硫酸氨二步盐析-凝胶色谱法进行纯化,利用细胞病变(CPE)抑制实验,在狗肾细胞系(MDCK)检测抗禽流感(H5N1)免疫球蛋白无毒浓度(TD0)范围及阻断甲型流感病毒FM1株攻击MDCK细胞的最小阻断浓度.结果:抗禽流感免疫球蛋白对DMCK的无毒浓度为1.764 mg/ml,当浓度为0.082 8mg/ml对流感病毒仍有阻断作用.结论:利用辛酸-硫酸氨二步盐析-凝胶色谱法成功制备卵黄免疫球蛋白,抗禽流感(H5N1)免疫球蛋白体外对流感病毒有较强的抑制作用.     

抗甲型流感病毒血凝素通用抗体的制备及鉴定

目的 建立针对甲型流感病毒血凝素的通用抗体.方法 通过对流感病毒数据库中血凝素基因的分析,寻找保守的序列并合成多肽.将多肽耦联在载体匙孔血监蛋白(KLH)上,多次皮下免疫家兔,制备高效价抗体.结果 序列分析发现血凝素第二亚单位(HA2)上氨基端14个氨基酸极端保守,耦联多肽经4次免疫后效价达到1:80000,以免疫印迹方法证明此通用抗体能与流感病毒H1～H13亚型的血凝素蛋白特异反应.结论 通过寻找保守蛋白并耦联在合适载体上,免疫家兔获得了针对甲型流感病毒血凝素抗原的通用抗体.     

不同年龄人群感染甲型H1N1流感病毒临床特征分析

目的 述不同年龄患者感染甲型H1N1流感病毒临床特征.方法研究对象为北京佑安医院2009年5月至2009年7月收治95例甲型H1N1流感确诊患者,按患者年龄分组并进行回顾性分析.结果 甲型H1N1流感患者平均年龄23.44±14.73岁.其中儿童及青壮年患者累计百分率达74.7%,为患者主体.从低龄组到高龄组患者,隐性感染率有逐渐增高趋势,差异无统计学意义.儿童组淋巴细胞比率明显高于其他年龄组,差异有统计学意义（P=0.039）.患者咽拭子核酸检测阴转时间为6.5±2.10（2～12）d,不同年龄组间咽拭子阴转时间无统计学差异（P=0.272）.13例（13.7%）患者出现并发症,6例合并肺炎患者中4例发生在儿童组患者.结论 甲型H1N1流感患者年龄分布明显不同于季节性流感,以儿童、青壮年为发病主体,在儿童患者中流感症状明显,肺炎是该人群的主要并发症.     

检测甲型流感病毒的绿色荧光蛋白报告系统的构建与鉴定

目的 构建pDZ-EGFP的真核表达重组质粒,转染MDCK细胞,建立增强型绿色荧光蛋白稳定转染的报告细胞系,提供更为直观、快速的检测甲型流感病毒的新途径.方法 将PCR扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因插入到pDZ载体中,将获得的pDZ-EGFP重组质粒用lipo-fectamine 2000转染MDCK细胞,通过G418进行选择培养,建立稳定转染的细胞系.传至3代,提取细胞总DNA,用EGFP的特异性引物进行PCR扩增及测序,鉴定细胞报告系统的稳定性;接种标准甲型流感毒株,用荧光显微镜和蛋白免疫印迹法检测EGFP的表达情况验证其应用性;另外,接种临床样本100份,用EGFP细胞报告系统检测的结果与Real-time RT-PCR检测结果进行比较,鉴定细胞报告系统的特异度和灵敏度.结果 稳定细胞系经传至3代,特异性EGFP引物利用PCR扩增到816bp的目的条带,测序结果与扩增的EGFP基因序列100％符合;稳定细胞系接种标准甲型流感毒株,24h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的增强表达,72h后用细胞裂解产物与EGFP的特异性抗体反应,获得目的条带;EGFP细胞报告系统检测的100份临床样本与Real-time RT-PCR检测结果相比,其特异度和灵敏度分别为88.52％和89.74％.结论 成功构建了pDZ-EGFP真核表达载体及稳定转染的MDCK细胞系,为甲型流感病毒的细胞培养鉴定及后期的致病机制的研究奠定了基础.     

不同年龄人群感染甲型H1N1流感病毒临床特征分析

Objective To describe the feature of different age patients with A-H1N1.Methods Cross-sectional study was performed in 95 patients who were confirmed to be infected with A-H1N1 from May,2009 to July,2009,in according to their age.Results The average age of patients with A-H1N1 infection was 23.44±14.73.Accumulative prevalence in children and young adult reached 74.7% of total patients.There was a trend that the subclinical infection rate raised gradually from 0-15 years group to over 45 years group.The percent of lymphocyte in 0-15 years group was significantly higher than other age groups,P=0.039.The average time of virus shedding were 6.5±2.10 days (from 2 days to 12 days),and there were no significant difference in diverse age groups,P=0.272.13 out of 95(13.7%)patients presented complications related with A-H1N1 infection,and 4 of 6 patients complicated with pneumonia were in the 0-15 years group.Conclusion The distribution of age in A-H1N1 infection is markedly different from seasonal influenza,with more cases in school children and young adults and fewer cases in older adults. Flu-like symptoms in children were apparent and pneumonia was the major complication in children.     

不同年龄人群感染甲型H1N1流感病毒临床特征分析

Objective To describe the feature of different age patients with A-H1N1.Methods Cross-sectional study was performed in 95 patients who were confirmed to be infected with A-H1N1 from May,2009 to July,2009,in according to their age.Results The average age of patients with A-H1N1 infection was 23.44±14.73.Accumulative prevalence in children and young adult reached 74.7% of total patients.There was a trend that the subclinical infection rate raised gradually from 0-15 years group to over 45 years group.The percent of lymphocyte in 0-15 years group was significantly higher than other age groups,P=0.039.The average time of virus shedding were 6.5±2.10 days (from 2 days to 12 days),and there were no significant difference in diverse age groups,P=0.272.13 out of 95(13.7%)patients presented complications related with A-H1N1 infection,and 4 of 6 patients complicated with pneumonia were in the 0-15 years group.Conclusion The distribution of age in A-H1N1 infection is markedly different from seasonal influenza,with more cases in school children and young adults and fewer cases in older adults. Flu-like symptoms in children were apparent and pneumonia was the major complication in children.     

人禽流感研究现状

人禽流行性感冒(人禽流感)(avian-human influenza)是由禽甲型流感病毒中某些亚型的毒株引起的急性呼吸道传染病。禽流感(avian influenza，AI)这个名称在我国可能已家喻户晓。然而，过去一段时间曾把它称之为鸡瘟(fowl plague)，因它在禽中所表现出的症状为全身系统中毒症状或急性呼吸窘迫综合征，与人流感症状相差甚远。鸡瘟于1878年首次报道于意大利，1901年证实其病原为滤过性病原体，1955年才证实其病原为甲型流感病毒的一员。     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位的表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定

目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定。方法将ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用纯化的CRDH1对人源噬菌体抗体库进行4轮固相筛选,阳性克隆用表达标记(Trx-His-stag)进行差异筛选。取阳性噬菌体C3感染宿主菌HB2151,37℃振荡培养过夜,终浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE与Westernblot鉴定以及免疫组化鉴定纯化的单链抗体C3与肝细胞结合的特性。结果CRDH1/pET-32c在原核系统经诱导表达出相对分子质量(Mr)约35×103大小的融合蛋白,以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白;经4轮筛选和差异筛选后,有2株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的单链抗体,DNA序列分析表明单链抗体重链基因和轻链基因分别属于人免疫球蛋白VH3家族和VKI家族。噬菌体C3经诱导表达出Mr约28×103大小的融合蛋白,可溶性分泌表达于培养基中;通过Ni2+亲和柱纯化获得单链抗体,ELISA、Westernblot表明单链抗体C3能较好结合rCRDH1,免疫组化显示该单链抗体可与肝癌细胞、肝细胞特异结合。结论成功表达ASGPR并筛选出其人源单链抗体。该单链抗体可与表达的rCRDH1以及肝细胞和肝癌细胞特异性结合,提示对肝脏疾病的靶向治疗有潜在的应用价值。     

唐山市甲型H1N1流感病毒血凝素基因序列分析

目的 分析2010—2016年唐山市甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列进化特征.方法 选取唐山市3家哨点医院流感样病例分离到的24株甲型H1N1病毒,通过RT-PCR和测序方法获得HA基因的全长序列,运用分子生物学软件和统计学软件对序列进行拼接、比对和分析.结果 同源进化分析显示,24株甲型H1N1流感病毒HA基因与疫苗株A/California/7/2009的核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.0%~99.0%和97.0%~98.5%.进化分析显示,2010—2016年唐山地区流行的甲型H1N1流感病毒属于1、7、6三个基因分支,其中6分支毒株分为6C、6B、6B.1和6B.2亚支.氨基酸位点分析显示,不同毒株与疫苗株比较存在8~16处氨基酸位点改变,其中7个变异涉及3个抗原表位:H138Q/Y和S203T突变位于Ca区,N125S、K153E、S162N、K163T/Q突变位于Sa区,S185T突变位于Sb区同时也位于受体结合部位;2015—2016流行季6B.1分支毒株抗原位点S162N突变增加了新的潜在糖基化位点.结论 与疫苗株比较,随着时间推移唐山地区甲型H1N1流感病毒发生了抗原漂变,未来仍应关注6B分支流行株的变化.     

表达人去唾液酸糖蛋白受体分子细胞系的建立

目的 构建稳定表达人肝细胞表面分子去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)的细胞系.方法 逆转录PCR扩增人肝组织ASGPR大亚基H1全编码序列,插入到真核表达载体pIRES2EGFP中,重组质粒pIRES2EGFP/ASGPRH1转染HeLa细胞,G418筛选,RT-PCR,Western印迹及免疫荧光检测ASGPRH1的表达.结果 成功构建了pIRES2EGFP/ASGPRH1重组质粒,该质粒转染HeLa细胞后,Western印迹及免疫荧光均检测到ASGPRH1蛋白的表达.结论 成功建立了稳定表达人ASGPRH1的细胞系,为进一步研究ASGPR分子奠定了基础.     

炎性体及其在流感病毒感染过程中的作用

炎性体是胞液中感受危险信号、启动介导下游免疫防御或细胞死亡(pyroptosis)的多分子复合物,是细胞内天然免疫的重要受承信号转导的中介体.炎性体识别流感病毒后诱导先天免疫反应甚至pyroptosis样细胞死亡.流感病毒高尔基体表达的M2蛋白和P2X7、ATP、ROS在炎性体的调节过程中发挥了重要作用,微生物也可以通...     

甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理探讨

目的 研究甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理探讨分析.方法 选择回顾性研究方法,选取2010年10月到2014年11月之间来我院进行甲型H1N1流感病毒感染治疗的患者42例,其中男25例,女17例,年龄28 ～ 48岁,平均年龄(34.5±1.4)岁.按1∶1的随机方式分为治疗组和对照组,每组21人.接受气管插管护理后比较2组患者的并发症情况.结果 治疗组经气管插管后发生并发症有3例(14.3％),未发并发症的有18例(85.7％);对照组经气管插管后发生并发症有10例(47.6％),未发并发症的有11例(52.4％),治疗组患者在接受气管插管护理后并发症少于对照组(P＜0.05).结论 甲型H1N1流感病毒感染患者气管插管的护理可能与插管气道评估、气管清洁及医患之间的配合等因素有关.     

甲型H1N1流感病毒(2009)及其核酸诊断试剂的研发与临床应用

流感是一种至今尚无法完全控制的急性呼吸道传染病,可周期性地引起世界性大流行。自20世纪以来,有明确记载并有病原学依据的世界流感大流行一共有4次。其中发生于1918—1919年的西班牙大流感,由H1N1亚型流感病毒引起,这是目前所知最大的一次流感大流行,估计有2500万～4000万人死亡;发生于1957年的亚洲流感,由H2N2亚型流感病毒引起,导致了数百万人的死亡,H2N2病毒是由当时流行的H1N1病毒与禽流感病毒H2N2病毒重配而来;     

江门市居民甲型H1N1流感病毒血清抗体的调查分析

目的了解江门市各年龄段人群甲型H1N1流感病毒抗体水平,为完善甲型H1N1流感疫情防控措施提供科学依据。方法采取多阶段分层随机抽样方法抽取研究对象480人,进行血清标本采集和问卷调查,应用红细胞血凝抑制方法检测甲型H1N1流感病毒抗体。结果人群甲型H1N1流感病毒抗体阳性率为19.38%,0～、6～、16～、25～和60岁以上组的甲型H1N1流感病毒抗体阳性率分别为22.09%、27.36%、24.47%、14.58%和8.16%。6～24岁的甲型H1N1流感病毒抗体阳性率较高,为51.83%,无症状抗体阳性率达12.61%。抗体阳性率在不同年龄、性别和职业上差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论江门市甲型H1N1流感病毒感染状况各年龄段不同,青少年抗体阳性率较高,老年人抗体阳性率相对较低,男性抗体阳性率高于女性。