肺癌的抗血管生成基因治疗

血管生成 (ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ)是指从已存在的微血管床上芽生出新的以毛细血管为主的血管系统的过程。大量证据表明 ,恶性实体肿瘤是血管新生依赖疾病 ,实体肿瘤的生长如果没有新生血管 ,不会超过 1～ 2ｍｍ ,并且原发肿瘤的血管生长使肿瘤易于转移[1、2 ] 。肺癌是恶性程度较高的肿瘤之一 ,近年来 ,随着分子生物学和分子病理学的进展 ,抗肿瘤血管生成治疗作为治疗肺癌的一项重要手段 ,已经越来越受到人们的重视。研究发现 ,生长中的肺癌组织同样高度表达编码血管生成的基因[3～ 5] 。 1992年 ,Ｍａｃｃｈｉａｒｉｎｉ等又报道非小细…     

癌抑素Canstatin的抗肿瘤作用及其机制

Canstatin是一种来源于Ⅳ型胶原α2链非胶原(NC1)区的血管生成和肿瘤生长抑制因子.它能剂量依赖性抑制血管内皮细胞增殖和迁移,诱导内皮细胞凋亡,在体内实验中Canstatin显著抑制实体瘤的生长.Canstatin的抗肿瘤作用可能与诱导凋亡有关,其作用机制在于抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt(PI3-k/Akt)信号通路,并依赖膜死亡受体介导的信号事件.     

抗血管生成在小细胞肺癌治疗中的研究进展

小细胞肺癌是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤。虽然其对放化疗敏感程度高,但易发生复发转移,对于放化疗进展后的小细胞肺癌,目前尚缺乏有效的治疗手段,广泛期患者的总生存期不到一年,因此迫切需要探索一种具体有效的新药。目前,靶向治疗已引起人们的关注,抗血管生成药物通过阻断肿瘤生长所需的血管,已经在几种恶性肿瘤中有了证实的疗效,为目前小细胞肺癌的治疗提供了新的思路。同时,鉴于最近免疫疗法的成功,抗血管生成药物与免疫检查点阻断剂的组合也已成为值得研究的治疗方式。本文通过探讨抗血管生成药物的研究进展,以及联合免疫治疗取得的成果,以期对小细胞肺癌的治疗提供一些参考。     

血管能抑素重组基因表达载体抗肺癌效应研究

目的:通过构建人血管能抑制素(Canstatin)真核表达载体,转染裸鼠肿瘤局部,探索其对肺癌治疗作用.方法:RT-PCR法获取Canstatin cDNA全长,定向克隆法构建Canstatin基因表达载体pCMV-Script-Cans.荧光定量PCR法检测转染细胞Canstatin mRNA的表达.台盼蓝拒染法、3H-TdR掺入法检测细胞生长增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.基因枪转染重组载体到荷瘤裸鼠肿瘤局部,CD31单克隆抗体微血管记数检测抗血管生成效应.结果:成功构建pCMV-Script-Cans重组载体,并在转染的细胞株中检测到Canstatin mRNA的表达.人脐静脉内皮HUV-EC-C细胞株pCMV-Script-Cans质粒转染组比空载体组3H-TdR掺入量明显减低(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),重组载体转染肿瘤生长缓慢,微血管数显著低于对照组(P＜0.01).结论:pCMV-Script-Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达Canstatin,并抑制内皮细胞增殖,而且有很好的抗肺癌血管生成作用.     

重组IFN-α2a与HSV-tk/GCV系统协同作用增强对于卵巢癌细胞系SKOV3杀伤作用的体外研究

目的：在原核系统中表达并纯化人血管生成抑素（angiostatin),制备鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。方法：设计引物扩增angiostatin的cDNA,然后亚克隆入原核表达载体pQE,并转化入大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化,再用纯化的人血管生成抑素免疫小鼠并制备多抗。结果：通过重组质粒酶切和测序分析等方法,筛选出重组阳性克隆,转化入大肠杆菌BL21中诱导表在并纯化成功,再利用纯化的人血管生成抑素制备成功鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。结论：表达产物及多克隆抗体为下阶段深入研究提供了重要的实验材料。     

缺氧对HRE-TK/GCV系统杀伤骨肉瘤细胞的增强作用

目的:探讨缺氧条件下,缺氧反应元件启动子-胸苷激酶/丙氧鸟苷(HRE-TK/GCV)系统对骨肉瘤细胞系MG63靶向性杀伤作用.方法:构建由HRE启动子驱动的含潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Hygromycin phosphotransferase-thymidine kinase,HyTK)融合基因的真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,并将其转染入骨肉瘤细胞系MG63.应用PCR和RT-PCR方法检测TK基因的整合及表达;用MTT法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧状态下对GCV的敏感性以及HRE-TK/GCV系统的"旁观者效应";流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化探讨其作用机制.结果:成功构建了真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,得到转基因细胞系MG63TK.检测到MG63TK细胞内TK基因的DNA和mRNA.MG63TK细胞在不缺氧状态下对GCV不敏感,当GCV浓度达50μg/ml时,仅30%左右细胞被杀死;而缺氧状态下,GCV浓度1μg/ml时,50%左右细胞被杀死,GCV浓度50μg/ml时,90%以上细胞被杀死.混合共培养实验中,缺氧状态下,HRE-TK/GCV系统旁观者效应明显增强,MG63细胞存活率显著低于不缺氧状态下.缺氧和GCV共同作用使转基因细胞DNA合成抑制,细胞周期阻滞于G0G1期,细胞发生凋亡和坏死.结论:缺氧可以增强HRE-TK/GCV系统对体外培养骨肉瘤细胞系选择性的杀伤作用和旁观者效应,该系统为骨肉瘤靶向性基因治疗提供了新的有效途径.     

血管生成抑制因子的研究进展

血管生成与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关,目前,以抑制血管生成为靶点治疗肿瘤有望成为抗肿瘤新疗法之一。近年来,研究发现了多种内源性血管生成抑制因子,其中一些已进入了临床试验阶段。本文对内源性血管生成抑制因子的结构、功能、作用机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述。     

血管能抑素基因在淋巴细胞中的表达及其抗肺癌作用的实验研究

背景与目的近年来,肺癌分子靶向治疗取得了明显进展,其中抗血管生成分子靶向治疗已引起人们广泛关注。本研究的目的是探讨经人血管能抑素(canstatin)基因重组表达载体转染的人淋巴细胞培养上清对动物肿瘤生长和转移的抑制作用。方法将canstatin重组表达载体及空载体通过电穿孔的方法转染人淋巴细胞,行G418筛选获得转基因细胞克隆;用SDS-PAGE电泳检测canstatin蛋白在转基因细胞培养上清中的表达。将Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠皮下,成瘤后将30只小鼠随机分成3组,分别给予重组载体转染的淋巴细胞培养上清、空载体转染的淋巴细胞培养上清和生理盐水(NS)各0.2mL在腹股沟皮下注射,每天1次,连续14日,观察3组小鼠原位肿瘤生长情况及肺部转移情况。结果canstatin在转染重组载体的人淋巴细胞中表达并分泌至培养上清中。重组载体组小鼠肿瘤体积1.49cm3±0.18cm3明显小于空载体组(2.44cm3±0.19cm3)和NS组(2.53cm3±0.18cm3)(P=0.000)。重组载体组、空载体组和NS组的肺转移结节数分别为3.40±1.14、7.60±2.61和7.60±2.41,重组载体组明显少于后两组(P=0.013)。结论canstatin基因重组载体能在人淋巴细胞中表达并分泌至细胞外。canstatin可明显抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长与转移。     

抗血管生成药物治疗肺癌脑转移的研究新进展

晚期肺癌脑转移发生率高,预后差.近年来,随着肺癌总体治疗的发展,为晚期肺癌脑转移提供了更多的治疗手段和期待.目前的临床研究提示抗血管生成药物在肺癌脑转移的治疗中占有重要地位,从大分子的单克隆抗体,到泛靶点抗血管药物,再到小分子酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitor,TKI),均显示出一定的...     

中介素在肺癌患者中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　研究中介素（IMD）在肺癌患者血浆及组织中的表达及其与肺癌分期及病理类型的关系。方法　采用酶联免疫吸附法测定88例肺癌患者血浆中IMD含量,以健康体检者为对照;采用免疫组织化学法测定36例肺癌组织中IMD的表达,以癌旁组织作为对照,并进行统计学分析。结果　肺癌组血浆IMD含量（81.61±30.78）pg／ml显著高于健康对照组的（38.68±12.65）pg／ml,差异有统计学意义（t＝-5.818,P＜0.05）;小细胞肺癌组血浆IMD含量为（68.61±30.01）pg／ml和非小细胞肺癌组的（75.51±32.74）pg／ml差异无统计学意义（t＝-0.680,P＞0.05）,IMD在Ⅰ～Ⅲ期含量显著低于Ⅳ期（t＝-3.444,-3.093,-3.955,P＜0.05）;有远处转移组高于无远处转移组（t＝8.052,P＝0.000）;IMD在肺癌组织中的表达[23／36（63.9 %）]高于癌旁组织[5／21（23.8 %）]（χ2＝8.525,P＜0.05）,Ⅲ期[14／17（82.4 %）]显著高于Ⅰ期[1／5（20.0 %）],差异有统计学意义（χ2＝6.924,P＝0.009）。结论　IMD在肺癌患者中的表达显著高于对照组,并与肺癌分期及有无远处转移有关。IMD可能在肺癌的病理过程中起重要作用。     

Canstatin与tumstatin抑制甲状腺癌细胞SW579迁移的机制研究

目的:研究canstatin与tumstatin对甲状腺癌SW579细胞迁移的影响及其机制.方法:利用MTT实验和划痕实验检测SW579细胞增殖和迁移.Western blot技术检测运动相关蛋白的变化.结果:Canstatin与tumstatin可以明显抑制SW579细胞增殖和迁移.Canstatin与tumstatin处理后细胞的MMP 3、9和12蛋白水平明显下降.在canstatin作用下Wave2蛋白含量下降,而tumstatin没有类似作用.结论:Canstatin与tumstatin通过抑制MMP 3、9和12蛋白水平导致SW579细胞运动减弱.     

肺癌VEGF表达的免疫组化定量分析与预后的相关研究

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)肿瘤组织 (VEGF)表达程度与其组织学类型、淋巴结转移及预后的关系。方法 :对随访的 74例NSCLC术后病例采用免疫组化方法检测肿瘤组织切片中VEGF蛋白表达程度 ,并经图象分析系统对VEGF表达程度进行定量测定。结果 :肺腺癌组和淋巴结转移组中的VEGF表达程度分别比肺鳞癌组和淋巴结无转移组明显增高 ,差异具有显著意义 (P <0 0 5～ 0 0 1)。在腺癌中 ,淋巴结转移组的VEGF表达程度比淋巴结无转移组显著增高 (P <0 0 5 )。单变量生存分析显示 ,VEGF高表达组与VEGF低表达组相比 ,前者生存时间明显下降 ,具有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :NSCLC肿瘤组织VEGF表达程度与其肿瘤的生物学行为及预后密切相关。     

lncRNA ZFAS1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞生物学功能的影响及机制研究

目的:探究lncRNA ZFAS1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞生物学功能的影响,同时通过构建肺癌裸鼠移植瘤模型,探寻其可能存在的分子机制。方法:采用qRT-PCR检测ZFAS1在肺癌组织和细胞系中的mRNA表达水平及荧光原位杂交(FISH)技术检测肺癌组织中ZFAS1的阳性指标;受试者工作特征(ROC)曲线检测血清中ZFAS1在肺癌临床诊断中的灵敏度和特异度;Transwell侵袭实验、细胞划痕实验及Tunel细胞凋亡实验检测上调/下调ZFAS1对NCI-H1299和NCI-H460细胞侵袭、迁移及凋亡的影响;检测肺癌裸鼠皮下移植瘤生长情况;Ki67和PCNA免疫荧光和PCNA免疫组化实验检测裸鼠体内细胞增殖情况。结果:ZFAS1 mRNA表达在肺癌组织和各细胞系中均上调;ROC曲线显示当ZFAS1的相对表达量取值为0.84时,其敏感度和特异度分别为86.7%和76.7%;过表达ZFAS1促进NCI-H1299细胞侵袭、迁移及抑制细胞凋亡,而干扰ZFAS1则抑制NCI-H460细胞侵袭、迁移及促进细胞凋亡;ZFAS1促进裸鼠皮下瘤体生长;ZFAS1在裸鼠皮下肺癌组织中的阳性指标显著增加...     

Neural-cadherin expression associated with angiogenesis in non-small-cell lung cancer patients

An immunohistochemical analysis for E(epithelial)-cadherin and N(neural)-cadherin expression in relation to tumour angiogenesis was performed in 150 patients with nonsmall cell lung cancer (NSCLC). In all, 71 carcinomas (47.3%) were E-cadherin-negative. Epithelial-cadherin-negative tumours had lymph node metastases significantly more frequently than E-cadherin-positive tumours (P=0.0100). On the other hand, 46 carcinomas (30.7%) were N-cadherin-positive. Regarding tumour vascularity, there was no significant correlation between E-cadherin expression and tumour vascular. In contrast, the frequency of hypervascular tumours was significantly higher for N-cadherin-positive carcinomas than for N-cadherin-negative carcinomas (P=0.0373). Regarding prognosis, the 5-year survival rate of patients with E-cadherin-negative NSCLCs was significantly lower than that of patients with E-cadherin-positive NSCLCs (P=0.0146). In contrast, of the patients with large cell carcinomas, the 5-year survival rate of patients with N-cadherin-positive tumours was significantly lower than that of patients with N-cadherin-negative tumours (P=0.0013). A multivariate analysis demonstrated that E-cadherin status (P=0.0339) and tumour vascularity (P=0.0295) were significant indicators for survival. In conclusion, E-cadherin expression and tumour vascularity are significant prognostic factors of NSCLC patients. Furthermore, N-cadherin expression is associated with tumour angiogenesis, and its expression is one of prognostic factors of patients with large cell carcinomas. Thus, N-cadherin also might play a specific role in undifferentiated large cell carcinomas.     

Inflammatory breast cancer shows angiogenesis with high endothelial proliferation rate and strong E-cadherin expression

Inflammatory breast cancer (IBC) is the most aggressive form of breast cancer. Improved understanding of the mechanisms responsible for the differences between IBC and non-IBC might provide novel therapeutic targets. We studied 35 consecutive patients with IBC, biopsied prior to the initiation of chemotherapy. Angiogenesis was evaluated by Chalkley counting and by assessment of endothelial cell proliferation (ECP) and vessel maturity. The presence of fibrin, expression of the hypoxia marker carbonic anhydrase IX (CA IX) and epithelialcadherin (E-cadherin) expression were immunohistochemically detected. The same parameters were obtained in a group of 104 non-IBC patients. Vascular density, assessed by Chalkley counting (P<0.0001), and ECP (P=0.01) were significantly higher in IBC than in non-IBC. Abundant stromal fibrin deposition was observed in 26% of IBC and in only 8% of non-IBC (P=0.02). Expression of CA IX was significantly less frequent in IBC than in non-IBC with early metastasis (P=0.047). There was a significant positive correlation between the expression of CA IX and ECP in IBC (r=0.4, P=0.03), implying that the angiogenesis is partly hypoxia driven. However, the higher ECP in IBC and the less frequent expression of CA IX in IBC vs non-IBC points at a role for other factors than hypoxia in stimulating angiogenesis. Strong, homogeneous E-cadherin expression was found at cell-cell contacts in all but two IBC cases, both in lymphovascular tumour emboli and in infiltrating tumour cells, challenging our current understanding of the metastatic process. Both the intense angiogenesis and the strong E-cadherin expression may contribute to the highly metastatic phenotype of IBC.     

溶瘤性腺病毒携带canstatin基因对肺癌A549细胞小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究溶瘤性腺病毒介导的canstatin基因表达对A549细胞的抑制作用。方法:将构建的溶瘤性腺病毒载体CRAd-canstatin感染A549细胞。Western blot方法鉴定canstatin基因在A549细胞中的表达;结晶紫染色法和MTT法检测重组病毒体外对细胞的生长抑制作用;将腺病毒注射入荷瘤的裸鼠体内,通过测量肿瘤体积,形态学观察等方法验证CRAd-canstatin对肿瘤的抑制效果。结果:体外结果显示腺病毒介导的canstatin基因在A549细胞中有效表达。体内结果显示相比对照组而言,肿瘤体积明显缩小。结论:初步的实验表明溶瘤性腺病毒介导的CRAd-canstatin基因有望用于肺癌细胞的治疗。     

中期因子蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨中期因子(MK)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平、特点及其与NSCLC血管生成和预后的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测44例NSCLC组织中MK蛋白表达和微血管密度(MVD),并与临床病理及预后指标作对照分析。结果:在癌旁及周围正常组织中,MK无表达;而在NSCLC癌细胞胞质中存在着MK的高表达,其表达阳性率为59.1%。MK表达与微血管密度增高、淋巴结转移显著相关(P<0.01),术后生存时间较MK阴性患者显著缩短(P<0.05)。MVD水平升高与淋巴结转移显著相关(P<0.01),且患者生存期显著缩短(P<0.05)。结论:MK蛋白在NSCLC中过表达,与肿瘤侵袭及血管生成有关,其表达水平能反映NSCLC的恶性程度,有可能作为NSCLC转移和预后分析的指标。     

JAM-A在肺癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的：探讨连接粘附分子A（junctional adhesion molecule A,JAM-A）在人肺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组化SP法检测65例肺癌组织和52例癌旁组织JAM-A的表达,分析其与临床病理特征之间的关系。结果：JAM-A 在65例肺癌组织中的表达率为56．9％,明显高于癌旁组织21．2％（P＜0．05）。与患者淋巴结转移及 TNM分期相关,而与年龄、组织学类型、肿瘤分化程度无关（P＞0．05）。结论：JAM-A在非小细胞肺癌中高表达,提示其可能发挥癌基因的功能。