聚合酶链反应检测沙眼衣原体

聚合酶链反应检测沙眼衣原体孔繁荣，朱学骏，张耕耘，周骏马，陈受宜北京医科大学第一医院皮肤科（邮政编码１０００３４）我们建立了聚合酶链反应检测沙眼衣原体的方法，对１００例ＳＴＤ门诊患者进行了检测。材料与方法１．临床标本来源１９９３年２月～３月在北京市某...     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体

聚合酶链反应检测沙眼衣原体王宏伟综述王家璧审校北京协和医院（邮政编码１００７３０）衣原体属由肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和沙眼衣原体三种衣原体组成，其共同的特征是有一脂多糖抗原决定簇。沙眼衣原体按血清型分为１５型，Ａ、Ｂ、Ｂａ、Ｃ四型引起沙眼，血清型Ｄ、...     

聚合酶链反应检测宫颈沙眼衣原体感染

沙眼衣原体是一种专性细胞内微生物，可引起女性泌尿生殖道感染，而做细胞培养是相当困难的。我们借助于聚合酶链反应（ＰＣＲ）显著的敏感性及特异性，进行女性宫颈沙眼衣原体检测，报道如下。一、病例和方法１．病例：我院皮肤科和妇产科门诊的女性病例３８例，均有非婚性接触史，白带分泌物多。武汉市妇女收容所暗娟１６例。以上病例检测前两周内未服过抗沙眼衣原体的药物。２．取材方法：在女性宫颈内Ｉｃ；ｎ～Ｚｃｍ处，擦去表面分泌物，用一棉拭于在宫颈内壁转动拭子取上皮细胞进行明窗试验，另一棉拭于取材后放入ＺＳＰ转送培养基中…     

聚合酶链反应与细胞培养法检测临床标本中的沙眼衣原体

为了评价ＰＣＲ对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测结果，利用传统的细胞培养法进行了平行检测比较。泌尿生殖道标本经裂解液（主要成分为非离子去污剂）裂解１０分钟后，未经提纯ＤＮＡ而直接用于ＰＣＲ扩增。每份标本同时进行细胞培养。对ＰＣＲ与培养结果不相符合的标本，取标本沉淀经直接免疫荧光（ＤＦＡ）染色后进行确证。检测临床标本３０５份，其中有２４份标本ＰＣＲ阳性而培养阴性，经直接免疫荧光镜检证实为真阳性。另有５份培养结果阳性的标本未能被ＰＣＲ检出。综合ＰＣＲ、培养及ＤＦＡ的结果，共检出阳性９３例，阴性２１２例。以该结果作为“扩大的金标准”，ＰＣＲ的敏感性为９４．６２％（８８／９３），特异性为１００％（２１２／２１２），培养法的敏感性为７４．１９％（６９／９３），特异性为１００％（２１２／２１２）。结果表明ＰＣＲ是一高度特异和敏感的检测方法。     

实时聚合酶链反应定量沙眼衣原体

以往定量临床标本中的沙眼衣原体(Ct)依赖于细胞培养,即把标本接种于细胞单层上,72h后在显微镜下计数细胞内荧光单克隆抗体染色的衣原体包涵体。此法费时且受主观因素的影响。我们报告一种精确定量Ct的方法,应用Light Cycler仪(Roche公司生产)进行实时聚合酶链反应(PCR),通过检测结合于dsDNA产物上的SYBR GreenⅠ荧光来定量CtDNA拷贝数。该技术不需要PCR后分析过程,在3h内直接完成Ct的检测及定量,现报道如下。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体的研究进展

自从 1993年正式商业化以来 ,聚合酶链反应检测沙眼衣原体的许多方面有了长足的进展。检测标本除了拭子、尿液 ,还增加了棉塞标本。邮寄自取标本的应用有望提高沙眼衣原体筛查的普及率。已经明确许多原因可导致聚合酶链反应抑制 ,另一方面 ,对标本冻融、保存、稀释、提纯及加入特殊物质等均可不同程度地降低聚合酶链反应抑制率。内参照用于监测聚合酶链反应抑制情况 ,进一步提高了聚合酶链反应检测的敏感性。β -球蛋白基因扩增可以实现对标本质量的评价。聚合酶链反应方法中新出现了TETR -聚合酶链反应 ,Q -PNA聚合酶链反应 ,混合标本聚合酶链反应及自动化聚合酶链反应等     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体的研究进展

自从1993年正式商业化以来，聚合酶链反应检测沙眼衣原体的许多方面有了长足的进展，检测标本除了拭子，尿液，还增加了棉塞标本，邮寄自取标本的应用有望提高沙眼衣原体筛查的普及率，已经明确许多原因可导致聚合酶链反应抑制，另一方面，对标本冻融，保存，稀释，提纯及加入特殊物质等均可不同程度地降低聚合酶链反应抑制率，内参照用于监测聚合酶链反应抑制情况，进一步提高了聚合酶链反应检测的敏感性，β－球蛋白基因扩增可以实现对标本质量的评价，聚合酶链反应方法中新出现了TETR－聚合酶链反应，Q－PNA聚合酶链反应，混合标本聚合酶链反应及自动化聚合酶链反应等。     

竞争性聚合酶链反应定量检测沙眼衣原体

为了便于研究沙眼衣原体(CT)感染的致病机理,我们建立了一种竞争性聚合酶链反应(PCR)定量检测CT的方法。合成、克隆并定量了一与CT主要外膜蛋白基因(ompl)靶序列具有相同引物位点的内参标(IS),通过共同扩增已知数量克隆的CTompl野生型模板和IS,构建竞争性PCR标准曲线。恒定拷贝数(1000个分子)的IS与每一待测模板共同扩增,用靶序列与IS的PCR产物的密度比值定量标本中的CT.对11份培养阳性的泌尿生殖道标本进行了CT的定量检测。结果发现,一个培养包涵体形成单位大约相当于75个DNA分子。研究表明:竞争性PCR提供了一种可靠且敏感、可定量临床标本中CT的方法。     

细胞培养、连接酶链反应和六种聚合酶链反应试剂盒检测沙眼衣原体的比较研究

目的 与细胞培养和连接酶链反应（LCR）比较考察6种国产聚合酶链反应（PCR）试剂盒在检测性传播疾病门诊患者标本沙眼衣原体的诊断价值。方法 在北京、上海、南京、天津5家临床医院性病门诊收集到673份尿道／宫颈拭子标本,分别进行沙眼衣原体培养和PCR检测,对结果不相符合的标本采用LCR复检,将各种PCR检测结果分别与培养、LCR以及综合结果进行比较分析。结果 合格病例616例,培养法检测阳性率6．3％,PCR检测阳性率分别为23．5％－28．7％。与培养结果比较,各种PCR检测的敏感性均在90％以上,其中PCR1、PCR2和PCR5均达到100％。LCR复核标本200份,与之相比,PCR检测的敏感性为83．9％－98．6％,特异性66．7％－94．7％,YI指数0．523－0．881。其中PCR2结果符合性最好,其它依次为PCR4、PCR1、PCR5、PCR3及PCR6。综合分析证明国产PCR检测沙眼衣原体的敏感性增在85％以上,特异性均在95％以上。YI指数由高到低分别为PCR2、PCR1、PCR3、PCR5、PCR4、PCR6。结论 国产PCR检测尿道／宫颈拭子沙眼衣原体具有较高的敏感性与特异性,可以用于临床检验,实验室质控与监督是本方法得以正确应用的关键。     

聚合酶链反应和直接免疫荧光法检测沙眼衣原体感染的方法比较

沙眼衣原体所致泌尿生殖道感染是最常见的性传播疾病之一。对１１０例患者进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）与直接免疫荧光法（ＤＦＡ）检测，比较二者在临床检测中的优缺点。ＰＣＲ引物为主要外膜蛋白基因片段，阳性６５例（５９１％），阴性４５例（４０９％）。ＤＦＡ阳性４３例（３９１％），阴性６７例（６０９％），ＰＣＲ和ＤＦＡ阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１），病程长短对ＰＣＲ阳性率无明显影响（Ｐ＞００５），病程长短对ＤＦＡ阳性率有显著影响（Ｐ＜００１），病程长者ＤＦＡ阳性率低。ＰＣＲ特别适用于临床中病程长且ＤＦＡ阴性患者。     

连接酶链反应检测男性尿标本中沙眼衣原体

目的 评价连接酶链反应（LCR）检测男性尿标本中沙眼衣原体（CT）的敏感性和特异性。方法 取性病专科门诊162例男性就诊者尿道拭子作CT培养;同时取患者晨起或较长时间（2h以上）不排尿后的首次尿（FVU）标本,用质粒LCR检测CT。对培养和质粒LCR结果相异的标本,用另一针对CT主要外膜蛋白基因的LCR进行确证,参照“扩大的金标准”来确定检测结果。结果 质粒LCR检测的敏感性和特异性分别为100％和99．2％,而培养法分别为82．8％和100％。讨论 LCR是一种既敏感又特异的CT诊断方法。用尿标本作检测对象,可避免取尿道标本给患者带来的痛苦,可作为筛检男性CT感染的一种非损伤性方法。     

用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析进行沙眼衣原体的基因分型

为了研究泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的分子流行病学，我们建立了一种不需做培养的ＣＴ血清型鉴定方法。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＣＴ大部分主要外膜蛋白基因（ｏｍｐｌ），将扩增产物做限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，即用限制性内切酶ＡｌｕⅠ和ＭｓｐⅠ同时消化，产生的片段通过１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。经硝酸银染色后，１５个ＣＴ血清型标准株产生１３个特征性带谱。血清型Ｃ和Ｊ带型相似，用ＨｉｎｆⅠ酶切后区分；Ｈ和Ｌ３带型相同，用ＤｄｅⅠ和ＥｃｏＲⅠ同时酶切后区分。对１２份ＣＴ培养阳性的临床标本行ＰＣＲＲＦＬＰ分型检测。结果：Ｄ血清型为６份标本，Ｅ型２份，Ｆ型２份，Ｆ／Ｇ混合型１份，Ｂ型１份。研究表明对ｏｍｐｌ的ＰＣＲＲＦＬＰ基因分型方法能用于大范围ＣＴ感染的流行病学研究     

多重聚合酶链反应用于D－K型沙眼衣原体基因分型的研究

目的摸索一套泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型的多重聚合酶链反应法。方法选择某一型与其它各型均不同的可变区部位作为下游引物,以恒定区 1区的高度保守区作为各型的公用上游引物,优化反应条件,进行标准株和临床野生株的多重聚合酶链反应扩增,并与聚合酶链反应－限制性内切酶片段多态性方法比较。结果用摸索出的反应系统和条件,对 8个标准株进行扩增,扩增出与理论值一致的片段,并可直接在普通水平琼脂糖凝胶进行电泳。特异性检测证明：①衣原体各型之间没有非特异性交叉扩增,②对泌尿生殖道病原和寄生微生物进行扩增,未扩出任何 DNA带。对临床野生株分型结果证明：复合聚合酶链反应阳性率为 100％,而聚合酶链反应－限制性内切酶片段多态性为 94.44％。结论本套衣原体基因分型的多重聚合酶链反应法特异、敏感、快速、实用,最终能用于临床分型。     

男性无症状性病高危人群尿沉渣检测沙眼衣原体

目的　研究能否用尿沉渣代替尿道拭子检测沙眼衣原体 (Ct)。方法　分别用Wellcozymechlamydia法和PCR法对 35 2例男性无症状的性病高危人群首段尿沉渣进行Ct检测 ,两法经尿沉渣、尿道拭子配对研究。结果　以尿道拭子Ct培养为金标准 ,两种方法的敏感性和特异性分别为 5 0 98% (P <0 0 5 )和 10 0 % (P >0 0 5 ) ,98 0 4% (P >0 0 5 )和 96 6 8% (P >0 0 5 )。结论　对Ct的检测 ,用Wellcozymechlamydia法时 ,不宜用尿沉渣代替尿道拭子作标本 ;而用PCR法时 ,可用尿沉渣代替尿道拭子作标本。     

连接酶链反应检测性病患者沙眼衣原体感染

目的 评价连接酶链反应(LCR)诊断性病患者尿道/宫颈中沙眼衣原体(Ct)的意义。方法 STD门诊尿道(宫颈)炎患者276例,取尿道/宫颈拭子,以LCR分析法检测Ct。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,其中56例患者同时进行尿道/宫颈拭子Ct细胞培养。差异性结果由PCR法扩增Ct的主要外膜蛋白基因来进行确认,确定LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性。结果 LCR分析法检测尿道/宫颈拭子Ct的敏感性、特异性分别为96.7%和100%。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,与单独用每份标本逐一进行LCR检测比较,结果完全一致,符合率为100%。结论 以尿道/宫颈拭子为标本,LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性高。适用于诊断泌尿生殖道Ct感染。用标本相混合的方法LCR分析检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,适用于Ct感染的普查。     

连接酶链反应检测宫颈沙眼衣原体感染

为评价连接酶链反应（LCR）诊断宫颈沙眼衣原体（CT）感染的意义,用质粒LCR和聚合酶链反应（PCR）检测170例STD门诊女性就诊者宫颈试子标本中的CT,对两项检测结果不一致的标本进行校正,对PCR阳性而LCR阴性者,将LCR标本稀释10倍重复LCR或用PCR反应的DNA模板作LCR检测。对PCR阴性而LCR阳性者,用另一对针对沙眼衣原体主要外膜蛋白（MOMP）基因的引物作PCR测试。将以上两项检测结果阳性的标本判断为真阳性,确定LCR和PCR的敏感性和特异性。发现170例患者中24例LCR检测阳性（14.2%),26例PCR阳性（15.3%）,对8例两项结果不一致的标本作了校正。LCR检测的敏感性和特异性分别为92%,99.3%;而PCR分别为92%,97.9%。结果提示LCR诊断女性宫颈CT感染具有较高的敏感性和特异性。     

聚合酶链反应检测生殖支原体的研究

具有致病性的生殖支原体（Ｍｇ）生长缓慢，不易培养，而血清学诊断与肺炎支原体又有交叉反应，这给Ｍｇ的临床诊断带来困难。为了进一步解决Ｍｇ的临床检测问题，本研究采用Ｍｇ粘附因子基因序列合成一对引物ＭｇＰａ１和ＭｇＰａ３，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测Ｍｇ。结果表明，对Ｍｇ能产生特异性扩增，片段大小为２８１ｂｐ，而对肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体及淋球菌等则不能扩增出任何片段。作者认为，ＰＣＲ为一种高度特异和敏感性的方法，它为Ｍｇ的临床检测提供了重要的手段。我们还对引物浓度、退火温度及模板量对ＰＣＲ扩增结果的影响进行了初步探讨。