活性维生素D3抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用的研究及其对TGF-β1,α-SMA表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用,研究该病理过程中转化生长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为三组,活性维生素D3组、假手术组、模型组,每组12只。造模后活性维生素D3组给予罗盖全(骨化三醇)灌胃(3ng/100g),假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。三组大鼠于给药后第14天,28d分批(n=6)处死,留取造模侧肾脏。用HE染色及Masson染色法观察肾小管间质纤维化程度,用免疫组化法测定TGF-β1,α-SMA在各组大鼠造模侧肾脏的表达情况。结果:免疫组织化学显示:UUO模型组大鼠的肾脏组织中TGF-β1及α-SMA的表达显著高于假手术组(P<0.05),而在活性维生素D3治疗组中,TGF-β1及的α-SMA表达低于UUO模型组(P<0.05),肾脏组织形态学显示:模型组肾间质纤维化程度明显高于假手术组,活性维生素D3组肾间质纤维化程度明显小于模型组(P<0.05)。结论:活性维生素D3能有效抑制UUO大鼠肾间质中TGF-β1及α-SMA的表达,从而减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度。     

阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用的实验研究

目的探讨阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用及其可能的机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、阿魏酸钠治疗组,每组20只。术后14 d处死动物并取梗阻侧肾脏,比较病理改变;采用免疫组化法检测3组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达。处死大鼠同时心脏取血,检测3组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平。结果与假手术组比较,模型组TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,治疗组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平明显降低(P<0.05);而肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著降低(P<0.05)。结论阿魏酸钠可能通过下调肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38及α-SMA的表达,起到延缓肾间质纤维化进程及保护肾功能的作用。     

转化生长因子β1在肾间质纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的了解转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾小管间质纤维化中的表达及其意义;探讨及比较科素亚及霉酚酸酯的肾脏保护作用及可能的作用机制。方法采用单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾小管间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、科素亚治疗组[30mg/(kg.d)]、霉酚酸酯治疗组[20mg/(kg.d)]。手术后第9天处死各组大鼠,分别经免疫组化方法观察各组大鼠肾组织的TGF-β1的表达部位、表达水平及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况;HE及Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组TGF-β1、α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.05);而科素亚治疗组、霉酚酸酯治疗组均明显低于模型组(P<0.05);科素亚治疗组与霉酚酸酯治疗组相比,各项指标差异均无统计学意义(P>0.05);TGF-β1与肾小管间质损伤指数(r=0.788,P<0.01)及α-SMA(r=0.940,P<0.01)呈正相关。结论TGF-β1在肾小管间质纤维化的病程进展中起重要的促进作用。而科素亚、霉酚酸酯则可能通过下调TGF-β1的表达而达到防治肾小管间质纤维化的作用。     

The protective effect of sodium ferulate on kidney of rats after UUO

目的 探讨阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用及其可能的机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、阿魏酸钠治疗组,每组20只.术后14 d处死动物并取梗阻侧肾脏,比较病理改变;采用免疫组化法检测3组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达.处死大鼠同时心脏取血,检测3组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平.结果 与假手术组比较,模型组TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著升高(P<0.05).与模型组比较,治疗组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平明显降低(P<0.05);而肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著降低(P<0.05).结论 阿魏酸钠可能通过下调肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38及α-SMA的表达,起到延缓肾间质纤维化进程及保护肾功能的作用.     

转化生长因子-β_1/Smad2/3介导肾小管上皮细胞转分化与幼鼠肾间质纤维化的相关性

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad2/3信号传导介导肾小管上皮细胞转分化(EMT)与幼鼠慢性肾间质纤维化的相关性,以及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的干预作用。方法本研究以80只幼年雌性SD大鼠为实验动物,制备7/8肾切除残肾慢性进展性肾功能衰竭模型。模型成功后随机将动物分为假手术组、7/8肾切除未治疗组和7/8肾切除干预治疗组。以模型制备后第2、4、8、12周为不同时间点。检测各时间点大鼠肾组织常规病理;采用免疫组织化学染色检测残肾组织中TGF-β1、Smad2/3:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白及纤维连接蛋白(FN)在肾组织表达趋势。结果实验第2周时未治疗组肾小管间质大量炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞肿胀、肾小管间隙加宽。至第12周未治疗组肾小管广泛扩张、基底膜增厚、皱缩或断裂,间质纤维化明显。而治疗组残肾组织病理变化较未治疗组有明显改善。免疫组织化学半定量分析显示未治疗组TGF-β1阳性细胞或阳性小管染色积分值呈逐渐升高趋势。对照组与未治疗组各时间点相比较差异有统计学意义(P<0.05)。Smad2/3表达趋势与TGF-β1相似。α-SMA蛋白表达趋势同步上调,E-钙黏连蛋白同步下调,未治疗组各时间点FN均呈现逐渐升高趋势(P<0.05)。未治疗组TGF-β1、Smad2/3、α-SMA、FN各指标不同时间点免疫组织化学蛋白染色积分值呈正相关,而与E-钙黏连蛋白表达趋势呈负相关(P<0.01)。干预组不同时间点TGF-β1、Smad2/3、α-SMA和FN蛋白表达趋势明显弱于未治疗组,但强于对照组,而E-钙黏连蛋白表达下调(P<0.01)。结论在幼年期肾损伤过程中,TGF-β1高表达与Smad2/3分子使其高表达,可能通过介导EMT导致肾小管间质区细胞外基质(ECM)异常合成与沉积,最终引起肾小管间质纤维化形成。早期给予ACEI干预可改善这种病理变化。     

黄芪山甲方抗肾间质纤维化的多靶点抑制作用

目的：动态观察黄芪山甲方（HQSJ）对大鼠肾间质纤维化（RIF）多靶点的治疗作用,探讨HQSJ方在不同阶段的可能作用机制。方法实验采用UUO大鼠模型,将雄性SD大鼠54只随机分成3组：假手术组（Sham）、模型组（UUO）、治疗组（HQSJ）。术后14、28、56d分别处死6只大鼠,观察肾功能变化;对肾小管基底膜（TBM）、肾小管萎缩、炎细胞浸润及间质纤维化情况进行半定量评分;采用免疫组织化学法及RT-PCR法检测肾组织TGF-β1、FN蛋白及mRNA的表达。结果（1）肾功能方面：与Sham组比较,UUO及HQSJ组大鼠BUN、SCr值在14～28d进行性升高,在28～56d相对稳定。HQSJ组大鼠BUN、SCr值在同一时相均较UUO组低（P＜0.05）。（2）病理改变方面：与Sham组比较,UUO及HQSJ组大鼠炎细胞浸润与肾间质慢性病变程度均有增高趋势,同一时相比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。UUO与HQSJ组比较,炎细胞浸润程度在14、28d有统计学意义（P＜0.05）,56d无统计学意义（P＞0.05）;肾间质慢性病变程度14、28、56d均有统计学意义（P＜0.05）。（3）TGF-β1、FN表达：与Sham组比较,UUO及HQSJ组TGF-β1、FN表达均增高,在同一时相比较均有统计学意义（P＜0.05）;与UUO组比较,HQSJ组TGF-β1、FN在14、28、56d的表达均不同程度下降（P＜0.05）;同一时相下降幅度比较：免疫组化示TGF-β1、FN蛋白阳性率分别下降64％、47％、7％及82％、72％、70％;RT-PCR法检测TGF-β1、FN的mRNA分别下降72％、57％、27％及83％、72％、68％。结论 HQSJ方抗肾间质纤维化的多靶点作用,可能与减少炎性细胞、抑制TGF-β1分泌,减轻肾脏固有细胞的活化及转分化,从而减少细胞外基质的沉积有关。其作用从病变早期开始,在14～28d主要是减少炎性细胞浸润和降低TGF-β1表达,对FN的抑制作用贯穿始终。     

转化生长因子β1和α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化模型中肾组织的表达。方法 36只小鼠平均分为假手术组与模型组,术后3、7、14d处死小鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色、免疫组化与RT-PCR检测。结果与假手术组比,模型组TGF-β1及α-SMA表达呈进行性升高,肾间质纤维化程度明显增高(P<0.O1)。结论 TGF-β1及α-SMA在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。     

幼鼠肾小管间质损伤不同时期缺氧诱导因子-1α的表达趋势及意义

目的探讨单侧输尿管结扎模型(UUO)幼年大鼠肾间质损伤过程中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)组织定位表达的趋势、相关性及潜在的病理意义,以及用苯那普利和氯沙坦联合治疗的效应。方法采用单侧输尿管结扎的方法制备实验性幼鼠梗阻性肾小管间质损伤模型,第3、7、14、28天作为观察点,用Masson染色评价各组各时间点肾小管间质损伤程度,免疫组织化学法分别检测各组幼鼠肾组织HIF-1α和TGF-β1定位、表达趋势及相关性。结果UUO模型组HIF-1α、TGF-β1蛋白表达及肾小管间质损伤的程度均明显高于假手术组(P<0.05);HIF-1α与TGF-β1均在持续了约14d左右的高表达后随纤维化的加重其表达反而有所下降;而在治疗组各指标的表达明显低于UUO模型组(P均<0.01),但各时间点比较其表达仍强于假手术组(P均<0.05);HIF-1α、TGF-β1及肾小管间质损伤指数之间呈正相关;治疗组各指标的表达水平明显低于UUO模型组(P<0.05)。结论在幼年大鼠肾小管间质损伤过程中,HIF-1α、TGF-β1的表达上调具有重要的致病意义,而苯那普利和氯沙坦治疗具有明显的干预效应。     

活性维生素D3对UUO模型大鼠肾间质OPN、TGF-β1表达的影响

目的:研究活性维生素D3在单侧输尿管梗阻模型(UUO)模型肾小管间质纤维化病理过程中对骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,寻找防治肾间质纤维化的方法.方法:36只清洁级雄性Wistar大鼠,随机分为3组,假手术组(n=12)、UUO模型组(n=12)活性维生素D3治疗组(n=12).于输尿管上1/3处用手术缝线结扎活性维生素D3治疗组及UUO模型组大鼠.罗盖全(骨化三醇)给予活性维生素D3治疗组灌胃,共28d.UUO模型组及假手术组等量生理盐水灌胃.于术后第14天、第28天分批处死各组大鼠,留取造模侧肾脏供病理分析.实验结束时,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)值和肌酐(Scr).HE染色及Masson染色法观察各组大鼠肾小管间质纤维化情况,OPN及TGF-β1在大鼠肾脏的表达情况应用免疫组化法测定.结果:随着梗阻时间延长,UUO模型组、活性维生素D3治疗组大鼠肾脏病理肾小管结构紊乱、周围肾间质增宽,肾间质纤维化面积明显高于假手术组,活性维生素D3治疗组的肾间质纤维化面积低于UUO模型组(P＜0.05).OPN、TGF-β1在UUO模型组和活性维生素D3治疗组表达高于假手术组,UUO模型组OPN、TGF-β1的表达高于治疗组(P＜0.05).结论:①OPN、TGF-β1的表达随着梗阻时间延长逐渐增加.提示OPN、TGF-β1参与了肾间质纤维化的发生及发展.②活性维生素D3治疗组肾间质纤维化程度较UUO模型组改善,且OPN、TGF-β1表达减少,表明活性维生素D3可减少TGF-β1、OPN表达,抑制肾间质纤维化.     

大黄酚对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织CTGF、α-SMA和FN的影响

目的探讨大黄酚对大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO)肾间质纤维化的影响。方法 27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄酚组。用单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化模型,大黄酚治疗14 d后检测血肌酐、尿素氮水平;采用免疫组织化学方法观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素氮的水平以及CTGF、α-SMA、FN的表达均显著增高。与模型组相比,大黄酚组血肌酐、尿素氮水平降低,CTGF、α-SMA、FN的阳性表达显著下调。结论大黄酚可能通过抑制UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、FN的表达,从而缓解肾间质纤维化的发生发展。     

Hirudin improves renal interstitial fibrosis by reducing renal tubule injury and inflammation in unilateral ureteral obstruction (UUO) mice

Renal interstitial fibrosis (RIF) often occurs in many chronic kidney diseases (CKD). Hirudin now is applied to treat fibrosis in some organs. In this study, we verified the treatment effects of hirudin on RIF in vivo and in vitro with the underlying mechanism. The RIF in vivo was the unilateral ureteral obstruction (UUO) model and RIF in vitro was the renal tubular epithelial cells induced by TGF-β. The renal pathological changes and renal fibrosis were observed by hematoxylin and eosin (H&E) staining and Masson staining. The α-SMA in renal tissues was detected by immunohistochemistry. The inflammatory factors were analyzed by the ELISA assay. The cell apoptosis was observed by TUNEL assay. The related proteins of fibrosis, epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis were assessed by western blot analysis. The experimental data demonstrated that hirudin decreased fibrosis, EMT, inflammation and cell apoptosis in renal tissues of UUO rats and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. Furthermore, hirudin also reduced the expression of collgen-I, FN, α-SMA, N-cad, slug, E-cad, IL-1β, IL-6 and TNF-α in mice serum and TGF-β-induced renal tubular epithelial cells. The apoptosis related proteins (pro-caspase3, pro-caspase9, bcl2 and bax) expression was also down-regulated in renal tissues of UUO rats. In conclusion, hirudin depressed the fibrosis in renal tissues and renal tubular epithelial cells by inhibiting the inflammation, regulating the related proteins of fibrosis and ETM and decreasing the apoptosis of renal tubular epithelial cells. These findings may offer an effective treatment method for RIF.     

Preventive effects and mechanisms of rhein on renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy

Renal interstitial fibrosis is a common outcome of a variety of chronic renal diseases. Here we evaluated the therapeutic efficacy of rhein on renal interstitial fibrosis induced by unilateral ureteral obstruction (UUO) and investigated the potential mechanisms. Mice underwent UUO, followed by orally administrated rhein (150 mg/kg/d) or control vehicle. Renal interstitial injury and the degree of fibrosis were evaluated by pathological staining and Western blot. The possible mechanisms were studied by Western blot, indirect immune-fluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay. Our results showed that rhein therapy markedly ameliorated renal interstitial fibrotic lesions, reduced α-smooth muscle actin (α-SMA) expression, attenuated deposition of fibronectin (FN). Rhein also suppressed transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and its type I receptor expression in obstructed kidneys. In vitro, rhein abolished the α-SMA and fibronectin expression of rat kidney interstitial fibroblasts cells (NRK-49F) induced by TGF-β1. These observations strongly suggest that rhein is a potent inhibitor of renal interstitial fibrosis, and its therapeutic mechanism is, at least in part, blocking interstitial fibroblasts cells activation.     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10天取术侧肾组织做HE,Masson染色及转化生长因子(TGF)β-1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学检测。结果丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化,下调TGFβ-1和α-SMA蛋白表达。结论丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。     

CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响.方法 选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1 R.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射.观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达.结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05).结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化.     

黄芪丹参茯苓龟板合剂对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的 探讨黄芪丹参茯苓龟板合剂对肾间质纤维化进展过程的干预作用及其机制.方法 通过单侧输尿管梗阻法建立肾间质纤维化的大鼠模型,实验分为假手术(Sham) 组、单侧输尿管梗阻 (UUO) 组、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI) 组及黄芪丹参茯苓龟板合剂(中药)组,术后第14天取大鼠肾组织进行常规HE、Masson染色及C...     

骨化三醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的观察幼年大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)肾组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)mRNA的表达,探讨骨化三醇对肾小管上皮细胞转分化(EMT)干预效应及机制。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、UUO模型组(B组)及UUO模型干预组(C组)各18只,灌胃满3、7、14d取肾。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组α-SMA、E-Cad、TGF-β1、BMP-7mRNA表达水平。结果与A组相比,B组E-Cad、BMP-7mRNA表达明显下降(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达显著增高(P<0.01);C组与B组相比,E-Cad、BMP-7mRNA表达明显上调(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论骨化三醇对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞转分化有抑制作用,这种抑制作用可能与下调TGF-β的表达及上调BMP-7的表达有关。