三种荧光Ca~(2+)指示剂用于血小板胞浆游离钙浓度测定的原理及应用比较

应用荧光Ca~(2+)指示剂研究活细胞中钙的变化是近年兴起的一门新技术。由于此技术可直接地测定胞浆内游离钙浓度(〔ca~(2+)〕i),从而使人们对细胞Ca~(2+)的转运及其与某些疾病发生,发展的关系有了进一步的认识。本文就目前应用的三种荧光Ca~(2+)指示剂在血小板〔Ca~(2+)〕i测定中的原理及应用比较作如下介绍。     

早期雾化吸入前列腺素E1对大鼠烟雾吸入性肺损伤的保护作用

目的:探讨早期应用前列腺素E1(PGE1)对烟雾吸入性损伤大鼠的肺保护作用及其可能的保护机制.方法:54只大鼠随机分为3组:正常组、损伤组和PGE1组,建立大鼠烟雾吸入性损伤模型.PGE1组于烟雾吸入伤后30 min即予PGE1雾化吸入治疗,每隔8 h雾化治疗1次.观测损伤组和PGE1组大鼠伤后6、24、48 h肺脏病理、动脉血气分析、肺湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血白细胞分类及计数、BALF总蛋白水平(TP)等指标的变化.结果:PGE1治疗后肺弥漫性充血、出血、水肿、大量中性粒细胞(PMN)浸润等改变范围及程度较损伤组均有所减轻;PaO2水平与氧合指数(PaO2/FiO2)明显提高;支气管肺泡灌洗液TP水平、W/D值较损伤组明显减低;外周血的WBC和PMN与损伤组相差不大,但BALF的WBC、PMN计数值较损伤组明显减少.结论:早期雾化吸入PGE1可以改善烟雾吸入导致的大鼠肺水肿、出血等急性肺损伤,其保护作用可能是通过减少肺部中性粒细胞"扣押"、降低肺部毛细血管通透性等途径实现的.     

粒细胞在犬烟雾吸入性肺损伤中的作用

利用重度犬烟雾吸入伤模型,观察了血中粒细胞的动态变化,及其在烟雾吸入性肺损伤中的作用。伤后血中粒细胞很快向肺内聚集和浸润;多核粒细胞(PMN)对自体细胞的毒性效应显著增强;PMN释放的髓过氧化物酶不断增加;代表氧自由基产生的PMN化学发光显著改变;这些变化均先于肺损伤,与其损伤时相基本一致。提示肺内粒细胞聚集和浸润在吸入性肺损伤中具有重要作用,颗粒酶和氧自由基可能是粒细胞介导肺损伤的效应因素。     

前列腺素E_1对烟雾吸入性肺损伤保护作用的实验研究

目的探讨早期雾化吸入前列腺素E1(PGE1)对烟雾吸入性肺损伤大鼠的肺保护作用及其可能的机制。方法 50只大鼠随机分为3组:正常组、损伤组和PGE1组,建立大鼠烟雾吸入性损伤模型。PGE1组于烟雾吸入伤后30 min即进行PGE1雾化吸入治疗,每隔8 h雾化治疗1次。观察损伤组和PGE1组大鼠伤后6 h、24 h、48 h肺脏病理、肺湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血白细胞(WBC)计数及中性粒细胞(PMN)计数、BALF总蛋白(TP)、肺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化。结果 PGE1组治疗后肺弥漫性充血、出血、水肿、大量中性粒细胞(PMN)浸润等较损伤组减轻;W/D值及BALF中TP水平、WBC、PMN计数低于损伤组(P0.05);肺组织中MDA水平低于损伤组(P0.05),但外周血WBC和PMN计数两组差异无统计学意义(P0.05)。结论早期雾化吸入PGE1可以减轻烟雾吸入导致的大鼠急性肺损伤的程度,其保护作用机制可能是通过减少肺部中性粒细胞浸润、降低肺部毛细血管通透性、减轻氧化损伤等途径实现。     

粉防己碱抑制心肌细胞〔Ca~(2 )〕_i的瞬间变化

用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ做荧光指示剂，测量粉防己碱对电刺激诱导的〔Ｃａ２＋〕ｉ瞬间变化的作用。粉防己碱３—１００μＭ浓度和时间依赖性地抑制电刺激诱导〔Ｃａ２＋〕ｉ的瞬间变化幅度，而没有影响静息〔Ｃａ２＋〕ｉ水平。该浓度的粉防己碱抑制ＫＣｌ除极化所致的细胞〔Ｃａ２＋〕ｉ增加。高浓度的粉防己碱（６０—１００μＭ）明显延长〔Ｃａ２＋〕ｉ衰减的时间，也减少Ｃａｆ－ｆｅｉｎｅ诱导〔Ｃａ２＋〕ｉ瞬间变化幅度。结果提示粉防己碱除了抑制Ｃａ２＋内流外，在高浓度也影响心肌细胞肌质网Ｃａ２＋的摄取或释放     

热性惊厥患儿血清Ca~(2+)水平与神经损伤、心肌损伤程度的关系

目的:探讨热性惊厥患儿血清Ca~(2+)水平与神经损伤、心肌损伤程度的关系。方法:选取在本院接受治疗的热性惊厥患儿32例作为观察组,另取同期在本院进行疫苗接种的健康小儿30例作为正常对照组。检测两组小儿血钙水平,根据观察组血钙水平中位数进一步分为高血Ca~(2+)组16例、低血Ca~(2+)组16例。对比观察组不同血钙患儿神经损伤、心肌损伤程度的差异。结果:观察组血清Ca~(2+)水平低于正常对照组(P<0.05);低血Ca~(2+)组外周血兴奋性氨基酸Glu、Asp、Lys、Ser含量高于高血Ca~(2+)组,抑制性氨基酸Gly、GABA含量低于高血Ca~(2+)组(P<0.05);低血Ca~(2+)组患儿心功能参数SV、CI、Vpk水平低于高血Ca~(2+)组,SVR水平高于高血Ca~(2+)组(P<0.05);低血Ca~(2+)组外周血心肌酶谱指标CK-MB、LDH、α-HBDH含量高于高血Ca~(2+)组(P<0.05)。结论:热性惊厥患儿血清Ca~(2+)水平较低,且Ca~(2+)水平与神经损伤、心肌损伤程度呈负相关。     

Experimental Study on the Protective Effect of Prostaglandin E1 on Lung Injury Induced by Smoke Inhalation

目的 探讨早期雾化吸入前列腺素E1(PGE1)对烟雾吸入性肺损伤大鼠的肺保护作用及其可能的机制.方法 50只大鼠随机分为3组:正常组、损伤组和PGE1组,建立大鼠烟雾吸入性损伤模型.PGE1组于烟雾吸入伤后30 min即进行PGE1雾化吸入治疗,每隔8 h雾化治疗1次.观察损伤组和PGE1组大鼠伤后6 h、24 h、48 h肺脏病理、肺湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血白细胞(WBC)计数及中性粒细胞(PMN)计数、BALF总蛋白(TP)、肺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化.结果 PGE1组治疗后肺弥漫性充血、出血、水肿、大量中性粒细胞(PMN)浸润等较损伤组减轻;W/D值及BALF中TP水平、WBC、PMN计数低于损伤组(P＜0.05);肺组织中MDA水平低于损伤组(P＜0.05),但外周血WBC和PMN计数两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 早期雾化吸入PGE1可以减轻烟雾吸入导致的大鼠急性肺损伤的程度,其保护作用机制可能是通过减少肺部中性粒细胞浸润、降低肺部毛细血管通透性、减轻氧化损伤等途径实现.     

粉防己碱抑制心肌细胞[Ca^2＋]i的瞬间变化

用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ做荧光指示剂，测量粉防己碱对电刺激诱导的〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化的作用。粉防己碱３－１００μＭ浓度和时间依赖性地抑制电刺激诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ的瞬间变化幅度，而没有影响静息〔Ｃａ＾２＋〕ｉ水平。该浓度的粉防己碱抑制ＫＣｌ除极化所致的细胞〔Ｃａ＾２＋〕ｉ增加。高浓度的粉防己碱（６０￣１００μＭ）明显延长〔Ｃａ＾２＋〕ｉ衰减的时间，也减少Ｃａｆｆｅｉｎｅ诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化     

犬烟雾吸入伤后多核粒细胞自体毒性的变化

许多研究表明,肺内粒细胞聚集和浸润是吸入性损伤和其他多种急性肺损伤早期的共同特征。同时,血中多核粒细胞(PMN)也处于活化状态。为了了解PMN在烟雾吸入伤中的病因学意义,我们在观察血中粒细胞数量和肺内粒细胞形态学变化的同时,设计了一种PMN体外溶血毒性试验,对犬烟雾吸入伤后,活化的PMN在肺损伤发病机理中的作用,作了初步探讨。     

粉防己碱对鼠脑缺血海马神经细胞的保护作用

采用全脑缺血再灌注模型,应用Fura-2荧光探针检测海马神经细胞游离钙（［Ca2+］i）水平,硫代巴比妥显色法检测海马匀浆中过氧化脂质（LPO）含量,同时电镜下观察海马CA1区神经细胞改变,以评价药物粉防己碱的作用。结果表明粉防己碱预处理后,能够显著抑制全脑缺血20min再灌注60min海马组织［Ca2+］i及LPO含量的升高,减轻神经细胞病理损伤。提示粉防己碱有一定程度的脑保护作用。     

Effects of tetrandrine on the changes of free calcium level in neutrophils after smoke inhalation injury in the rabbit

The changes of the cytoplasmic free calcium level in the neutrophils after smoke in-halation injury were observed in rabbits and then the effects of tetrandrine,a calcium antago-nist,on the changes of free calcium level were studied.It was found that the number of neu-trophils increased significantly preceded by a transient decrease in the blood and also increasedin the bronehoalveolar lavage fluid after smoke inhalation.and the level of cytoplasmic free calci-um in the blood neutrophil increased likewise.Administration of tetrandrine resulted in a reduc-tion of the neutrophils number in the lungs and the free calcium level in the blood neutrophils toalleviate the pulmonary injury due to smoke inhalation.It is believed that there is a close rela-tionship between the activation of neutrophils and the pathophysiological changes of the lungs,and tetrandrine can exert its therapeutic effects on the injury by decreasing the free calcium levelin the neutrophils to modulate their functions.     

烟雾吸入伤大鼠肺组织85KD磷脂酶A2变化初探

目的探讨85KD磷脂酶A2(85KDPLA2)在烟雾吸入伤大鼠肺组织中的表达与活性变化及其变化的可能机制.方法 85KDPLA2酶表达相对含量用酶联免疫吸附法测定;85KDPLA2活性用生化法测定.同时检测肺混合细胞浆钙浓度和肺匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性.结果烟雾吸入伤后,肺匀浆85KDPLA2OD值从伤后1～24h均高于正常对照组、肺匀浆85KDPLA2活性变化与OD值变化相似,而混合细胞胞浆钙浓度和MPO活性分别从伤后1h和3h明显高于正常对照组,并持续到伤后24h(P<0.05).结论肺组织85KDPLA2酶蛋白表达,特别是活性增加可能是烟雾吸入伤后磷脂酶A2激活的重要原因之一,肺实质细胞与中性粒细胞可能是85KDPLA2产生的重要来源,而胞浆钙浓度增加可能参与了85KDPLA2的激活过程.     

粒细胞NADPH氧化酶在犬烟雾吸入伤中的变化及意义

本实验利用犬烟雾吸入伤模型。观察了致伤前后粒细胞NADPH氧化酶活性的变化,显示其伤后活性增加,提示粒细胞及其活性氧代谢产物参与了犬烟雾吸入性肺损伤的发生发展,同时观察了血气、病检,肺含水量等指标,证实动物存在严重吸入性肺损伤。     

军用密闭舱室烟雾吸入致雄性大鼠心、肺、肝、肾损伤的观察

目的 探讨军用密闭舱室非金属材料燃烧释放的有毒烟雾对雄性大鼠心、肺、肝、肾损伤的特点.方法 建立密闭舱室内动物烟雾吸入模型,将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组及烟雾吸入后1、6、24、72 h和7d组,对照组动物于染毒箱内自由呼吸新鲜空气10 min,染毒组动物于染毒箱内连续吸入烟雾10 min,观察烟雾吸入后动物的中毒症状、血压、心率、血气、血清生化等指标.结果 烟雾吸入后,动物立刻出现呼吸节律改变、呼吸困难等CO中毒表现;烟雾吸入后1h大鼠心率显著下降(P＜0.05),pCO2显著升高(P＜0.05),pO2显著降低(P＜0.05);烟雾吸入后1～72 h组动物谷丙转氨酶(ALT)均显著升高(P＜0.05),其中6h时达峰值(P＜0.01);烟雾吸入后各组AST、LDH、α-HBDH、CK及CK-MB等心肌酶谱指标均持续升高,其中1h组各指标与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 密闭舱室火灾烟雾吸入首先对大鼠的肺脏造成原发性损伤,心、肝、肾产生继发性的功能损害,且上述功能损害主要发生在烟雾吸入后“24h”窗口期内,其后由于机体代偿可逐渐恢复至正常.     

烟雾吸入伤后肺内磷脂酶A2活性的变化及意义

采用大鼠烟雾吸入伤模型，动态观察了伤后支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）及肺组织中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性的变化，辅以动脉血气分析，肺水量及ＢＡＬＦ中总蛋白（ＴＰ）和白蛋白（Ａｌｂ）含量测定，结果发现，动物伤后出现急性呼吸衰竭和严重肺水肿，ＢＡＬＦ中ＴＰ及Ａｌｂ含量均显著增加：ＢＡＬＦ和肺组织中ＰＬＡ２活性亦明显升高，提示ＰＬＡ２可能通过直接作用及介导脂类介质生成而与烟雾吸入性肺损伤的发生发展。     

早期大容量肺灌洗对犬重度单肺吸入伤引起的对侧肺损害的影响

目的：研究大容量灌洗对犬一侧肺急性重度烟雾吸入伤引起的对侧肺损害的影响,求证早期肺灌洗减轻吸入伤犬肺继发性炎症反应的有效性。方法：建立犬左肺单侧急性重度烟雾吸入伤模型,伤后1h对伤肺进行生理盐水大容量灌洗。观察自主呼吸24h间灌洗组犬与未灌洗组犬双肺换气功能,比较24h后两组犬两侧肺标本之病理学和病理生理学变化程度。结果：左肺灌注总量250ml,简单负压吸引后单肺灌注液存留量90-140ml。伤后立即灌洗组与未灌洗组犬PaO2均显著下降,灌洗组犬灌洗后PaO2立即进一步下降,2h后逐渐回升,伤后24h时已反超未灌洗组犬;两组犬左肺均呈现重度肺水肿及肺出血,右肺呈轻-中度肺水肿,灌洗组犬右肺肺水含量小于未灌洗组犬,右肺动、静态顺应性大于未灌洗组犬。结论：早期大容量灌洗可减轻犬一侧肺急性重度烟雾吸入伤时对侧肺损害程度,即有效减少了吸入伤犬肺后续炎症反应。     

烟雾吸入伤大鼠肺组织抗氧化酶活性和谷胱甘肽含量变化

目的观察烟雾吸入伤大鼠肺组织抗氧化酶活性和谷胱甘肽含量变化.方法建立大鼠烟雾吸入伤模型,将60只Wistar大鼠随机分成正常对照组,烟雾吸入伤1、3、6、12h和24h组,分取肺组织测定过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量.结果肺组织匀浆CAT活性在烟雾吸入伤后3、6h明显高于正常对照组(P<0.05、P<0.01),伤后12h、24h已低于正常对照组;GSH-PX活性伤后1h已明显高于正常对照组(P<0.01), 伤后3h达峰值,伤后12、24h明显低于正常对照组(P<0.05);SOD活性和GSH含量从烟雾吸入伤后1h开始明显低于正常对照组,一直持续到伤后24h(P<0.05,P<0.01).结论烟雾吸入伤后肺组织CAT、GSH-PX活性先增后减,而SOD活性和GSH含量持续降低,反映了肺内氧应激的强度和抗氧化物质的不同作用.     

Effects of Ginsenosides and Ketoprofen on Smoke Inhalation Injury in Rabbits and Rats

Six hours after smoke inhalation injury in rabbits, the permeability of pulmonary vesselsand the aggregation of circulating platelets increased markedly accompanied with apparent patholog-ical changes in the trachea and lungs. Fifteen minutes after smoke inhalation injury in rabbits, an intravenous dose of ginsenosides or ketoprofenwas given to the animals respectively. 6 hours after medication, it was found that both the drugscould significantly alleviate the platelet aggregation, but only ginsenosides could alleviate theaugmentation of pulmonary vascular permeability and the pathological lesions in the trachea andlungs. In those rats injured by smoke inhalation, l hour after an intravenous dose of ginsenosides, theplasma PGI_2 level was elevated and TXA_2/PGI_2 ratio decreased significantly.     

人参皂甙和酮布芬对烟雾吸入性肺损伤的影响

家兔烟雾吸入伤后6h,肺血管通透性和循环中血小板聚集率均明显增加,气管和肺部也有明显病变。治疗组于伤后15min静注人参总皂甙或酮布芬后6h,虽然两种药物均使循环中血小板聚集率显著降低,但只有人参总皂甙能明显降低伤后增加的肺血管通透性和减轻气管和肺部的病变。大白鼠在类似的实验条件下,人参总皂甙给药后1h,可使血中PGI_2水平升高,TXA_2/PGI_2的比值明显下降。     

人参总皂甙对大鼠烟雾吸入性肺损伤的疗效与其抗氧化作用的关系

本实验采用大鼠烟雾吸入性肺损伤模型,观察了致伤后立即腹腔注射人参总皂甙(GS)对该损伤的作用。发现GS可明显减轻烟雾吸入所致PMVP增加,减少BALF中WBC计数和蛋白含量,使肺内WBC浸润,肺水肿,肺充血、出血等病变减轻。GS还可抑制致伤大鼠肺和血清MDA的升高,使已降低了的肺SOD活性恢复至正常水平以上。体外实验也发现,GS可有效地抑制肺匀浆过氧化脂质生成和清除O_2~-·、OH·。提示GS的治疗效果与其抗氧化作用有关。