多重荧光定量PCR快速诊断唐氏综合征患儿

摘要:目的：探讨用多重荧光定量聚合酶链反应（QF-PCR）对唐氏综合征（DS）患儿进行快速诊断的可行性。 方法：对21号染色体上D21S1442、D21S1432、D21S11、D21S1435、D21S1412和D21S1809 6个短串联重复序列（STR）位点进行多重QF-PCR扩增,PCR产物进行毛细管电泳,用GeneMapper软件对STR DNA进行多态性分型,并对患儿外周血进行淋巴细胞培养和染色体核型分析。 结果：6个STR位点检测198例DS患儿的敏感性为99.0%,特异性为100%;181例标准型DS患儿共检出180例,检出率为99.5%;14例异位型DS患儿的检出率为100%;2例嵌合型DS患儿,检出1例;另检出1例特殊核型DS患儿。 结论：多重QF-PCR检测具有快速、准确等特点,可用于DS患儿的临床诊断。     

多重荧光定量PCR法快速鉴定MRSA的临床研究

目的 构建mecA、nuc、内标基因3种基因联合检测的单管多通道Taqman探针荧光定量PCR法,用于鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),并与传统细菌培养和鉴定方法进行比较,评估其临床应用价值.方法 以169例临床标本和经常规细菌培养和VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定的金黄色葡萄球菌(SA)15...     

多重荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交（M-FISH）技术存骨髓增牛异常综合征（MDS）患者复杂核型异常检测中的应用价值。方法 对10例常规R显带具有复杂染色体异常（CCA）的MDS患者应用M-FISH确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成，识刖并确定微小易位。结果 M-FISH共检出37种结构重排，包括插入易位、缺夫、易值及衍生染色体，其中34种为不平衡重排；3种为平衡重排，包括：t（6；22）（q21；q12）、t（9；19）（q13；p13）和t（3；5）（？；？），有7种重排文献未见报道，涉及17号染色体的异常及-5／5q-最为常见（10例患者中两种异常各占7例）。结论 对伴有CCA的MDS患者M-FISH技术可以明确常规细胞遗传学（CC）分析中复杂染色体异常，并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常，为MDS患者染色体异常的分析提供了一种较理想的方法。     

鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法的建立与应用评价

  目的  建立一种鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法,并进行应用效果评价。  方法  选择鼠疫菌染色体YPO0393基因与pMT1质粒caf1基因为靶基因,设计合成YPO0393-内标模板、特异性引物和TaqMan荧光探针,构建鼠疫多重荧光定量PCR内标检测体系;对非鼠疫菌DNA、不同稀释浓度鼠疫菌DNA、野外监测样本进行检测,评价该方法的特异性、灵敏性、重复性和应用效果。  结果  采用多重荧光定量PCR内标方法,8株鼠疫菌DNA均出现明显的扩增曲线,12株非鼠疫菌DNA未显示扩增曲线,提示该方法特异性良好。 不同浓度的鼠疫EV76疫苗株DNA,检测最低限为22.5×10?4 ng/μL,变异系数为0.99～3.42,提示灵敏性、重复性较好。 105份野外监测样本中,荧光定量PCR内标方法检测阳性的6份,与普通PCR方法检测结果一致,4份样本分离培养出鼠疫菌且采用PCR方法检测阳性。  结论  通过设置双靶基因与内标对照,本研究建立的鼠疫多重荧光定量PCR内标方法可降低检测假阳性率,特异性、灵敏性和重复性理想,可用于鼠疫快速检测。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的临床意义

目的 评价荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA对辨别病毒复制的临床意义.方法 采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测258例乙型肝炎患者及100例健康对照血清的HBV-DNA和免疫学指标.结果 123份HBsAg、HBeAg、HBcAb三项均阳性的标本中FQ-PCR检测HBV-DNA阳性120份,阳性率为97.6%.在108份三项HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本中FQ-PCR阳性43份,阳性率为39.8%.在100例乙肝血清免疫指标全阴的对照血清中,FQ-PCR全部阴性.结论 FQ-PCR在乙肝治疗方案选择和疗效观察方面具有广泛的应用前景.     

79例Turner综合征染色体核型及荧光原位杂交分析

目的：探讨Turner综合征不同核型的细胞遗传学特征、分布情况及临床表现。方法：对79例Turner综合征患者进行外周血淋巴细胞培养及染色体核型分析,部分患者结合荧光原位杂交检测。结果：79例中共检出18种不同类型核型,其中含Y及双着丝粒idic(X)的核型均经荧光原位杂交检测证实为Y染色体及双着丝粒X染色体。结论：Turner综合征中X染色体数目及结构变异多样,其中以XO及i(Xq)较为常见。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的临床研究

目的 :建立荧光定量PCR检测HBV DNA的方法 ,探讨荧光定量PCR在乙型肝炎病毒检测方面的临床价值。方法 :采用荧光定量PCR技术 ,对不同类型乙型肝炎患者及无症状健康者血清HBV DNA进行定量检测。对30例慢性乙型肝炎拉米夫啶治疗前后血清HBV DNA含量进行定量监测。结果 :(1)血清HBV DNA的检出率与HBeAg阳性率呈正相关 ,无症状健康者仍有 3%的检出率。 (2 )慢性乙型肝炎和乙肝后肝硬化的血清HBV DNA含量明显高于无症状HBV感染者和急性乙型肝炎 (P <0 .0 1)。 (3) 30例慢性乙型肝炎 ,经拉米夫啶治疗 12个月 ,HBV DNA阴转率为 73.3% (2 2 / 30 ) ,明显高于HBeAg阴转率 (46 .2 % ) (P <0 .0 5 )。结论 :荧光定量PCR检测HBV DNA ,能直接反映血清HBV DNA含量 ,在判断体内HBV是否复制、复制的程度 ,HBV是否被清除以及HBV血清标志阴性肝炎的诊断等方面明显优于HBV血清标志物检测。荧光定量PCR检测HBV DNA是抗病毒治疗选择和考核抗病毒疗效的最直接最可靠的指标 ,具有重要的临床价值 ,值得推广应用     

妊娠早期超声标记预测胎儿常见三体综合征的价值

目的探讨妊娠早期超声标记预测胎儿常见三体综合征（21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征）的价值。 方法分析2014年9月至2016年5月在首都医科大学附属北京妇产医院行妊娠早期（11~13^＋6周）产前超声检查且染色体检查判定为21-三体、18-三体、13-三体综合征（染色体异常组173例）及同期染色体检查判定为正常（对照组1391例）共1564例胎儿的超声影像学指标,通过计算受试者工作曲线下面积、敏感度、特异度、约登指数等比较不同超声指标组合预测染色体异常的效果。 结果多元Logistic回归预测模型提示：孕妇年龄（OR=1.05,95%CI：1.01~1.10）、鼻骨发育不全（OR=14.54,95%CI：2.28~92.75）、颈项透明层（NT）增厚（OR=12.46,95%CI：8.27~18.78）、头臀径小于孕周（OR=12.79,95%CI：1.45~113.14）、胎儿水肿（OR=9.69,95%CI：3.55~26.48）为常见三体综合征的危险因素,建立模型（Model A）的效果为：曲线下面积0.770、敏感度0.630、特异度0.904、约登指数0.534;NT增厚及年龄作为自变量,建立多元Logistic回归模型（Model B）的效果为：曲线下面积0.756、敏感度0.618、特异度0.907、约登指数0.525;NT增厚和年龄作为单独变量,将其他8个超声标记组合成新变量"其他异常" ,建立多元Logistic回归模型（Model C）的效果为：曲线下面积0.775、敏感度0.642、特异度0.902、约登指数0.543。 结论妊娠早期超声标记中的NT增厚对预测胎儿常见三体综合征有重要意义,其他超声指标联合可一定程度上优化预测效果。     

人类性别决定基因（SRY）的检测及其临床应用

目的 探讨SRY基因与两性性别发育的关系. 方法 提取40例健康人外周血总DNA,加入SRY基因的特异性扩增引物和内参引物,运用聚合酶链式反应（PCR）技术进行SRY基因扩增,后经琼脂糖凝胶电泳进行检测. 结果 40例的基因组DNA经 PCR扩增后在500 bp和600 bp之间出现β-actin条带,与预期的大小为517 bp的β-actin片段相吻合,说明本实验的实验条件的可靠性和准确性.其中20例男性在600 bp至700 bp之间出现条带,与预期的SRY的677 bp片段大致相符,而20例女性则无677 bp片段产生.用该方法检测一例外生殖器异常,染色体为46,XY社会性别为女性的患者,其SRY检测结果为阳性. 结论 SRY基因阳性是雄性决定基因,用PCR技术扩增SRY 基因能快速准确检出Y染色体.SRY基因的检测对性连锁遗传性疾病和单基因突变病的无创性产前诊断有重要意义.     

SYBR GreenI染料法定量PCR检测疟原虫感染及鉴别虫种的临床应用

目的评价一种可以快速定量检测疟原虫及虫种鉴别的荧光定量PCR法。方法将SYBRGreenI法与TaqMan探针法检测疟原虫进行比对,评价定量的准确性及方法的敏感度。以PCR-DNA测序法为金标准,评价SYBRGreenI法分型的准确性。结果两个方法的定量拷贝检测数无显著性差异（P〉0．05）。SYBRGreenI法检测疟原虫的最低检测下限为1×10^2copy／mL至5×10^2copy／mL之间。与PCR-DNA测序法比较,SYBRGreenI法能准确的对感染的疟原虫虫种做准确的鉴定。结论SYBRGreenI染料法定量可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别,且成本低廉,操作简便快速,可以在疟疾的高发地区推广使用。     

Usage of and attitudes about green tea extract and Epigallocathechin-3-gallate (EGCG) as a therapy in individuals with Down syndrome

ObjectiveUsage of and views concerning alternative therapies in the DS community are not well documented. Some positive effects of green tea extracts (GTE) containing Epigallocathechin-3-gallate (EGCG) have been reported in individuals with DS and DS mouse models, but minimal improvements or detrimental effects of pure EGCG treatment have been reported in DS mouse models. Given the uncertainty about the effectiveness of these supplements, the goal of this study was to determine the relative prevalence of and attitudes about GTE/EGCG treatments among DS caregivers.MethodsAn anonymous survey about attitudes and usage of GTE/EGCG in individuals with DS was completed by caregivers of these individuals.ResultsGTE/EGCG treatment was provided by 18% of responding caregivers who were mostly younger, highly educated, and utilized scientific sources and other parents to influence their decision to use GTE/EGCG. Individuals with DS who received GTE/EGCG were characterized as less severely disabled. Most caregivers who did not give GTE/EGCG reported concerns about potential side effects and lack of effectiveness. Few caregivers consulted with medical providers about GTE/EGCG usage.ConclusionsThese results demonstrate a need for communication between caregivers, medical providers, and scientists about potential benefits and risks for adverse effects of GTE, EGCG, and other nutritional supplements in individuals with DS.     

用实时荧光定量PCR选择急性呼吸窘迫综合征患者血清microRNA内参照基因

目的探讨用实时荧光定量PCR检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小RNA(microRNA,miRNA)的表达并选择最优内参照基因。方法用实时荧光定量PCR检测40例ARDS患者及20例体检健康者血清中5个miRNA候选内参照基因miR-16-5p、miR-93-5p、miR-101-3p、miR-191-5p和U6,并用ge Norm法、Norm Finder法、bestkeeper法和相对△Ct法4种算法分析内参照基因稳定性,通过对4种算法稳定值进行排序并计算几何均数的方法分析综合稳定值。结果比较5个候选内参照基因在ARDS患者和体检健康者的表达水平,差异均无统计学意义(P均0.05)。4种算法综合分析显示,miR-16-5p以最小的稳定值1.32成为综合稳定性最高的内参照基因,其次是miR-101-3p、U6、miR-93-5p和miR-191-5p。结论实时荧光定量PCR法确定ARDS患者血清miRNA最优的内参照基因为miR-16-5p。     

应用QF-PCR和CNV-seq以及染色体核型分析检测羊水的染色体畸变及结果分析

目的评价定量荧光PCR(QF-PCR)在染色体畸变中诊断的准确性,探讨QF-PCR、基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)和染色体核型分析(核型分析)这3种技术在染色体畸变的产前诊断中的应用价值以及多方法联合诊断的优势和必要性。方法采用QF-PCR检测106例产前筛查高风险孕妇的产前羊水的染色体畸变,同时使用CNV-seq(102例)及核型分析(4例)检测;统计QF-PCR与后两者之间的阳性符合率。结果在21、18、13、X、Y共5种染色体非整倍体检测方面,QF-PCR与CNV-seq及核型分析的阳性符合率均为100%。对于所有46条染色体畸变的检测,CNV-seq阳性但QF-PCR无法检出的共21例,其中20例微缺失或微重复均小于5 Mb,核型分析可能均无法检出。结论QF-PCR对5种染色体非整倍体的检测具有很高的准确性。QF-PCR结合CNV-seq,相互补充和印证,快速且覆盖面广,具有部分替代核型分析的潜力;多方法联合诊断对染色体畸变的检出具有很大的优势和必要性。     

The effect of progressive resistance training on leg strength,aerobic capacity and functional tasks of daily living in persons with Down syndrome

Purpose.?The purpose of this study was to examine the effect of progressive resistance training on leg strength, aerobic capacity and physical function in persons with Down syndrome (DS).

Method.?Thirty persons with DS (age 28 SD 8 years) were assigned to an intervention or control group. The intervention group performed resistance training 2 days per week for 10 weeks. Participants performed tests to measure isometric and isokinetic knee extensor and flexor peak torque, peak aerobic capacity and timed performance on chair rise, walking and stair ascent and descent.

Result.?Persons with DS receiving the intervention significantly increased their isokinetic knee extensor and flexor peak torque [[Absolute change (post minus pre-value) was 17.0 SD 29.6 and 12.6 SD 18.9 N m, respectively]] and isometric knee extensor peak torque at angles of 45° (2.9 SD 23.2 N m), 60° (3.0 SD 22.9 N m) and 75° (14.2 SD 30.0 N m). These changes were significantly greater than in the control group. In addition, the time to ascend (?0.3 SD 0.8?s) and descend (?0.6 SD 0.9?s) stairs significantly decreased in the intervention group compared to the control group.

Conclusion.?These findings show that progressive resistance training is an effective intervention for persons with DS to improve leg strength and stair-climbing ability.     

Multiplex PCR for the detection and differentiation of Vibrio parahaemolyticus strains using the groEL,tdh and trh genes

Vibrio parahaemolyticus is a significant cause of human gastrointestinal disorders worldwide, transmitted primarily by ingestion of raw or undercooked contaminated seafood. In this study, a multiplex PCR assay for the detection and differentiation of V. parahaemolyticus strains was developed using primer sets for a species-specific marker, groEL, and two virulence markers, tdh and trh.Multiplex PCR conditions were standardised, and extracted genomic DNA of 70 V. parahaemolyticus strains was used for identification. The sensitivity and efficacy of this method were validated using artificially inoculated shellfish and seawater. The expected sizes of amplicons were 510 bp, 382 bp, and 171 bp for groEL, tdh and trh, respectively. PCR products were sufficiently different in size, and the detection limits of the multiplex PCR for groEL, tdh and trh were each 200 pg DNA. Specific detection and differentiation of virulent from non-virulent strains in shellfish homogenates and seawater was also possible after artificial inoculation with various V. parahaemolyticus strains.This newly developed multiplex PCR is a rapid assay for detection and differentiation of pathogenic V. parahaemolyticus strains, and could be used to prevent disease outbreaks and protect public health by helping the seafood industry maintain a safe shellfish supply.     

甲基化特异性多重连接探针扩增及甲基化特异性PCR诊断Prader-Willi综合征方法比较

  目的  应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MS-PCR)和甲基化特异性多重连接探针扩增(methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification, MS-MLPA)方法对Prader-Willi综合征(Prader-Willi syndrome, PWS)进行诊断并比较两种方法的差异。  方法  回顾性研究2005年10月至2014年2月到北京协和医院就诊的患儿及正常对照共102例, 男57例, 女45例。其中正常对照16例; 荧光原位杂交或高分辨染色体确诊PWS阳性对照2例; 临床疑似PWS患儿84例。提取受试者外周血基因组DNA分别应用MS-PCR及MS-MLPA方法进行基因分析, 对疑似患儿进行确诊和遗传类型分型, 并计算两种方法的特异性、敏感性及准确度, 应用卡方检验对两种方法进行比较。  结果  MS-PCR结果示正常对照及阳性对照与其表型全部相符, 84例疑似患儿中有39例提示为PWS, 45例提示正常。MS-MLPA结果示除正常对照外的86例受试者中, 29例提示为父源缺失型PWS; 9例提示为母源二体型PWS; 47例提示为正常; 1例因DNA过于陈旧未检出有效结果。对比两种方法检测结果, 有2例MS-PCR结果显示为PWS, 但MS-MLPA结果显示为正常, 通过增加DNA用量重新进行MS-PCR检测后, 除外PWS。结合临床表现, 受试者中明确诊断PWS的患儿39例, 非PWS者63例。MS-PCR方法共出现2例假阳性, 假阳性率为3.17%(2/63)。MS-PCR方法敏感性100%, 特异性96.83%, 准确度98.03%;MS-MLPA方法敏感性97.43%, 特异性100%, 准确度99.02%。两种方法的敏感性、特异性及准确度差异无统计学意义(P均 > 0.05)。  结论  MS-PCR及MS-MLPA敏感性、特异性及准确度皆佳, 均可用于PWS诊断, MS-MLPA可区分父源缺失型及母源二体型。MS-PCR应保证DNA用量充足以避免假阳性出现。MS-MLPA应使用新鲜提取的DNA, 且实验条件要求更为严格。建议同时使用两种方法检测以获得准确结果。     

染色体核型分析与Y染色体微缺失联合检测无精子或少精子症的临床应用研究 ',2(1.,四川泸州646000;2.西南医科大学医学检验系，四川泸州646000)

摘要:目的对男性无精子或少精子症 患者进行染色体遗传学病因诊断与分析,探讨染色体核型分析与Y染色体微缺失联合检测对无精子或少精子症的临床应用价值。方法收集四川泸 州地区240例男性无精子或少精子症患者的临床资料及外周 血样本。外周血淋巴细胞按常规染色体培养G显带行核型分析,Y染色体微缺失检测采用多重PCR技术。结果240 例男性无精子或少精子症患者中无精子症患者179例、严重少精子症患者61例。单一染色体核型分析异常检出率为22.92% (55/240),包括单纯染色体数目异常30例、单纯染色体结构异常21例和合并异常4例。单一Y染色体微缺失异常检出率为10.42%(25/240),其中AZFc缺失异常率最高为7.08%。采用核型分析与Y染色体微缺失联合检测的异常检出率为30.83% (74/240),其中6例患者两项结果均异常,两种方法联合应用时较单一方法的检出率高(x2= 30.24,P<0.001)。结论系统地报道了泸州地区男性无精子或少精子症患者的染色体核型及Y染色体微缺失的发生率及类型,同时提出两种方法联合应用可提高异常检出率,对男性不育症患者的病因诊断、遗传咨询及生殖治疗提供了重要指导作用。