系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中Brn-3a mRNA 表达及其与疾病活动性的关系.方法 以β-actin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测92例SLE患者(活动期46例,缓解期46例)、其他结缔组织病(CTD)患者30例(疾病对照组)、健康体检者30例(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMCs)中Brn-3a mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于缓解期SLE患者(P<0.01);活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平明显高于正常对照组与疾病对照组(P<0.01);缓解期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平与正常人及疾病对照组差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 活动期SLE患者Brn-3a mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示Brn-3a的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性有关.     

哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子检测及意义

目的探讨共刺激分子在哮喘发病免疫学机制中的作用。方法选取28例哮喘患者和15名对照者,采用三色标记的流式细胞术检测哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子的表达水平。结果与对照组相比,哮喘患者T细胞各亚群所占比例及B细胞、单核细胞占外周血单个核细胞的比例差异未见显著性,但CD4/CD8明显高于对照组(P<0.05)。CD4和CD8阳性T细胞表达的CD28及CTLA-4分子在两组间差异无显著性。哮喘组单核细胞(CD14阳性)CD80表达水平低于对照组(P<0.05)。而B细胞(CD19阳性)表面表达的CD86低于对照组(P<0.05)。结论哮喘患者体内存在的T淋巴细胞功能紊乱可能与T淋巴细胞活化过程中共刺激信号的异常有关。     

哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子检测及意义

目的 探讨共刺激分子在哮喘发病免疫学机制中的作用。方法 选取28例哮喘患者和15名对照者,采用三色标记的流式细胞术检测哮喘患者外周血单个核细胞表面共刺激分子的表达水平。结果 与对照组相比,哮喘患者T细胞各亚群所占比例及B细胞、单核细胞占外周血单个核细胞的比例差异未见显著性,但CD4／CD8明显高于对照组（P〈0．05）。CD4和CD8阳性T细胞表达的CD28及cTLA_4分子在两组间差异无显著性。哮喘组单核细胞（CD14阳性）CD80表达水平低于对照组（P〈0．05）。而B细胞（CD19阳性）表面表达的CD86低于对照组（P〈0．05）。结论 哮喘患者体内存在的T淋巴细胞功能紊乱可能与T淋巴细胞活化过程中共刺激信号的异常有关。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素表达增高的意义

目的研究急性乙型肝炎患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集确诊急性乙型病性毒肝炎患者、无症状乙肝病毒(HBV)携带者和体检健康者全血,分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提总RNA,采用MGB探针,以18sRNA为内参,经荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。对照组为90例体检健康者和90例无症状HBV携带者。结果急性期乙肝患者PBMC颗粒溶素表达水平(拷贝/μg)(2.8±3.1)×109显著高于体检健康者(2.2±1.4)×107和HBV携带者缓解期病人(4.5±5.2)×108(P<0.05)。结论采用FQ-PCR检测颗粒溶素的表达水平,有助于临床上监测感染性疾病的病情,为临床诊治提供一些依据。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达水平的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系。方法以pactin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法,在LightCycler RealtimePCR检测仪上检测70例SLE患者（活动期32例、缓解期38例）、其他结缔组织病（CTD）患者30例（疾病对照组）、健康体检者30例（正常对照组）外周血单个核细胞（PBMCs）中MBD4 mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-Ct（内参基因）来比较基因表达水平的高低。结果SLE患者PBMC中MBD4mRNA表达水平高于正常对照组与疾病对照组（P〈0．05）,且疾病不同病期（活动期与缓解期）MBD4 mRNA表达水平差别有统计学意义（P〈0．01）。结论结果显示SLE患者PBMC中MBD4 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组,提示MBD4 的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SEE的发病过程并与疾病的活动性有关。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞IL-21R mRNA的检测及其临床意义

目的建立检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-21R mRNA的巢式实时荧光定量PCR的方法,研究IL-21R mRNA在RA PBMC中的表达水平并探讨其临床意义。方法根据IL-21R mRNA序列,跨内含子设计外引物,采用巢式实时荧光定量PCR方法。首次扩增以增加原始模板浓度,并以减少引物、酶的浓度及循环次数的方法保持扩增片段的特异性,再以首次扩增产物为模板,进行二次PCR扩增作实时荧光定量检测;以β-actin作内参,以二者比值作为IL-21R mR-NA表达水平的指标。结果60例RA患者与30例健康人对照相比,RA患者组IL-21R mRNA表达上调(P<0.01);将RA患者关节功能分级作IL-21R mRNA表达水平比较,Ⅰ级、Ⅱ级相比无显箸差异(P(0.05);Ⅰ级、Ⅱ级分别与Ⅲ级以上相比,差异显著(P(0.01);RA活动期IL-21R mRNA水平较非活动期增高,治疗后IL-21R mRNA的表达明显下降,治疗前后比较有显著差异(P<0.01)。结论IL-21R mRNA在RA患者PBMC中高表达,其表达水平对RA的诊断和治疗具有重要的参考价值。本文建立的检测方法重复...     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素mRNA定量测定及临床意义

目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测乙型肝炎（简称乙肝）患者外周血单个核细胞（PBMC）中颗粒溶素（GNLY）mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组（P〈0.01）,恢复期GNLY基因表达与正常对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。乙肝患者GNLYmRNA与血清ALT、AST呈正相关。结论实时荧光定量RT-PCR检测GNLY mRNA的表达准确可靠。患者外周血GNLY基因表达水平与急性乙肝的发生发展存在一定的相关性。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素mRNA定量测定及临床意义

目的应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测乙型肝炎(简称乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中颗粒溶素(GNLY)mRNA的表达,探讨GNLY基因表达水平与急性乙肝的关系。方法实时荧光定量RT-PCR分别检测40例急性乙肝患者及100名正常对照的PBMC的GNLY基因表达水平,同时检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果急性乙肝患者发病期mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.01),恢复期GNLY基因表达与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。乙肝患者GNLYmRNA与血清ALT、AST呈正相关。结论实时荧光定量RT-PCR检测GNLY mRNA的表达准确可靠。患者外周血GNLY基因表达水平与急性乙肝的发生发展存在一定的相关性。     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞p170和CD38的表达及意义

我们检测了17例多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞p170和CD(38)的表达,以期探讨二者表达的相关性及其意义。材料和方法1 研究对象1.1 实验组:17例MM住院患者,根据Durie和Salm-on标准诊断,无急性感染,形态学未发现外周血中有浆细胞,其中男性14例,女性3例,初治9例,复发8例,年龄40～73岁,平均年龄60岁,Ⅱ期5例,Ⅲ期12例。1.2 对照组:11名健康献血员,男性9名,女性2名,年龄31～48岁,平均年龄39岁。1.3 化疗方案:检测患者p170和CD_(38)后,无论初治和     

胃癌患者外周血单个核细胞HLA基因表达研究

目的探讨胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因的表达水平及对胃癌的临床应用价值。方法设计HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系,在ABI7500实时荧光定量PCR仪上检测43例胃癌患者和22例健康人PBMC内基因表达水平并分析其差异。结果(1)胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G的mRNA相对表达量分别为0.71±0.26、0.61±0.37、0.91±0.33、0.90±0.38、0.77±0.27。健康组分别为1.23±0.60、1.17±0.60、1.07±0.68、1.12±0.55、0.98±0.37。与健康组相比,胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-G表达水平降低,差异有统计学意义。HLA-DP和HLA-DR则无明显差异。(2)在不同分化的胃癌患者中,HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR和HLA-G的mRNA表达水平无明显差异。胃癌Ⅰ期+Ⅱ期的HLA-G表达水平高于Ⅲ期+Ⅳ期,差异有统计学意义。不同分期的HLA-A和H...     

类风湿关节炎患者外周血白细胞介素-32的表达及临床意义

目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血白细胞介素-32(IL-32)的表达及临床意义。方法选取122例RA患者,根据活动度积分(DAS28)将其分为高活动组45例(DAS285.1)、中低活动组42例(DAS28≥2.6~≤5.1)和缓解期组35例(DAS282.6)。选取同期50例非RA结缔组织病患者作为非RA组,选取同期50名健康志愿者作为对照组。对5组研究对象血清IL-32、TNF-α水平及外周血单核细胞(PBMC)中的IL-32、TNF-α基因相对表达量进行检测和比较。结果高活动组患者PBMC中IL-32、TNF-αmRNA相对表达量和血清IL-32、TNF-α水平最高,其次为中低活动组患者,非RA组患者的血清TNF-α水平显著高于缓解期组和对照组(P0.05)。缓解期、非RA组和对照组PBMC中IL-32、TNF-αmRNA相对表达量和血清IL-32水平的差异均无统计学意义(P0.05),缓解期组和对照组研究对象的血清TNF-α水平的差异无统计学意义(P0.05)。RA患者血清和PBMC中的IL-32、TNF-α水平与RA患者的病情指标均具有相关性(P0.05)。结论 RA患者表现为外周血IL-32水平的显著升高,其水平与其疾病严重程度和活动性程度指标具有相关性,提示了IL-32可能在RA的活动性增强过程中具有重要的作用,可作为评价RA病情的辅助指标。     

The clinical significance of spondin 2 eccentric expression in peripheral blood mononuclear cells in bronchial asthma

BackgroundBronchial asthma (BA) was a heterogeneous disease characterized by chronic airway inflammation. Spondin 2 (SPON2) was reported to be implicated in the integrin pathway, protein metabolism, and drug‐induced lupus erythematosus. The purpose of this study was to evaluate the significance of SPON2 in BA diagnosis and treatment.MethodsPeripheral blood samples were obtained from 137 BA pediatric patients (61 mild‐to‐moderate BA and 76 severe BA) and 59 healthy children. Subject''s information, clinical indexes, pulmonary ventilation functions were recorded in the two groups. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated from patients’ samples. qRT‐PCR and ELISA assays were employed to examine the levels of SPON2 and inflammatory cytokines, respectively. Pearson''s correlation analysis confirmed the association between SPON2 and inflammatory cytokines. Receiver operating characteristic (ROC) analysis was used to evaluate the potentials of SPON2 in terms of BA detection and discriminating against the severity of BA.ResultsBioinformatics analysis showed that SPON2, OLFM4, XIST, and TSIX were significantly upregulated, while KDM5D and RPS4Y1 were reduced in BA. GO analysis verified that these six genes were mainly involved in neutrophil degranulation, neutrophil activation involved in immune response, neutrophil activation, and neutrophil‐mediated immunity. After isolating PBMCs, we found that SPON2 was remarkably increased in BA pediatric group compared with healthy children, and the relative levels of SPON2 were related to the severity of BA. The receiver operating characteristic (ROC) analysis revealed the high potentials of SPON2 in BA diagnosis (AUC was 0.8080) and severity distinctions (AUCs were 0.7341 and 0.8541, respectively). Also, we found that there were significant differences in fractional exhaled nitric oxide (FeNO), forced expiratory volume in 1 s (FEV1)%, FEV1/ forced vital capacity (FVC)%, immunoglobulin E (IgE), serum eosinophils, and serum neutrophils between mild‐to‐moderate BA group and severe BA group. Finally, SPON2 was negatively correlated with IL‐12 while positively associated with IL‐4, IL‐13, and IL‐17A.ConclusionsSPON2 was a viable biomarker for diagnosing and degree of severity in BA, providing more insight into exploring BA and treatment''s pathogenesis.     

初治白血病患者april mRNA的表达研究

本研究旨在检测27例确诊白血病患者april mRNA的表达水平,为april分子靶向治疗在白血病中的应用提供理论基础。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者april mRNA的相对表达水平,分析其在各型白血病中的表达变化。结果表明：急性白血病（AL）患者april mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）;急性髓系白血病（AML）患者april mRNA的表达高于正常对照组,其差异有统计学意义（p〈0.05）,且april mRNA的表达水平与外周血白细胞计数（WBC≥20.0×109/L）呈正相关（p〈0.05）,与患者的髓外侵犯及CD34表达无明显相关性（p〉0.05）。除外急性早幼粒细胞白血病（APL）病例,april mRNA的表达水平与AML患者的化疗敏感性呈负相关（p〈0.05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）患者april mRNA的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：AML患者存在着april mRNA的过表达。AML细胞产生的APRIL蛋白可能在AML细胞的异常增殖及化疗耐药中起着重要作用。     

Maf-b基因在初治白血病患者的表达及临床意义研究

本研究旨在检测白血病患者maf-b mRNA的表达水平并评估其临床意义。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者maf-b mRNA的相对表达水平,分析其在不同类型白血病中的表达差异及其与实验室指标、化疗反应的关系。结果表明,初治白血病患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01);分组分析的结果显示:急性髓系白血病(AML)患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01),且maf-b mRNA的表达水平与外周血白细胞计数、CD34表达呈正相关(p0.01)。AML(除外急性早幼粒细胞白血病)患者中,maf-b mRNA的表达水平与AML患者的化疗反应无明显相关(p0.01)。急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓系白血病(CML)患者maf-b mRNA的表达亦低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01)。结论:AML患者maf-b基因表达降低,而maf-b基因的异常表达可能与AML细胞的异常增殖有关,并可能成为AML新的预后因子。     

血清microRNA-141在结肠癌中的表达和临床意义

目的探讨microRNA-141(miR-141)在结肠癌患者血清中的表达及意义。方法用荧光定量PCR(SYBR Green法)检测60例结肠癌患者和60例健康对照组血清中miR-141的表达。结果 miR-141在结肠癌患者血清中的相对表达量为3.29±0.52,与健康对照组的1.02±0.23相比,显著升高(t=11.34,P0.05);随着结肠癌分化程度的降低,血清miR-141的表达增高;血清miR-141在淋巴结转移组的相对表达量为4.45±0.32,在无淋巴结转移组为2.39±0.23,差异有统计学意义(t=2.34,P0.05);结肠癌术后血清miR-141表达明显下降(t=8.53,P0.01)。结论 miR-141在结肠癌血清中高表达,且与结肠癌分化程度和淋巴结有无转移有关。有望作为一种新的生物标志物用于结肠癌辅助诊断。     

OGG1 mRNA在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的:探讨OGG1 mRNA表达在鼻咽癌发生发展过程中的作用,以及OGG1 mRNA表达与鼻咽癌患者的癌细胞分化程度和淋巴转移之间的关系.方法:通过HE染色从组织病理学上确定鼻咽组织的良、恶性以及恶性组织的分级.应用RT-PCR法检测45例鼻咽癌组织和17例正常鼻咽组织中OGG1 mRNA的表达情况.结果:鼻咽癌组织OGG1 mRNA表达的阳性率为57.78%,明显低于正常鼻咽组织(88.24%),两者比较差异有显著性(P<0.05).OGG1 mRNA表达随分化程度降低而降低(P<0.01),有淋巴转移的患者低于无淋巴转移的患者(P<0.05).结论:OGG1 mRNA在鼻咽癌组织中表达水平明显降低,提示它与鼻咽癌发生发展有关;鼻咽癌组织OGG1 mRNA表达水平的差异,对鼻咽癌的病理诊断及其分级有参考价值.     

肾透明细胞癌组织IGF-1和IGF-1R的表达及其临床意义

目的：探讨胰岛素样生长因子（IGF）-1及IGF-1受体（IGF—1R）在肾透明细胞癌组织的表达及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR法检测IGF-1及IGF-1R基因在肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果：IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率均为100％,在相应癌旁组织中均为80％。肾透明细胞癌组织中IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA的相对表达强度分别为0．42±0．05、0．38±0．02,对应癌旁组织中分别为0．05±0．01和0．06±0．01,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。肾透明细胞癌患者的AJCC分期越高,IGF-1、IGF-1R水平越高（P〈0．05）。结论：肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织普遍表达IGF-1和IGF-1R基因,其中肾透明细胞癌存在IGF-1和IGF-1R高表达;IGF-1和IGF-1R与肾透明细胞癌密切相关,可有助于预测患者病情进展。     

血中survivin mRNA表达水平的定量检测及其对食管癌预后的评估

目的探讨食管癌患者外周血中细胞凋亡抑制蛋白survivin mRNA定量检测对预后评估的价值。方法取36例食管癌患者在手术前、手术刚结束时和手术后第3 d的外周血;将实时荧光RT-PCR绝对定量和相对定量技术合理结合,创建新的标准曲线,用于检测外周血survivin mRNA的表达水平;22例胸部良性肿瘤患者的同期系列血样为对照组。结果survivin mR-NA阳性表达的平均值(拷贝数/μg总RNA)在3个取样时间点依次分别为:12 219(95%CI,7 826~16 612),6 595(95%CI,2 461~10 729)和15 018(95%CI,7 407~22 628)。术后一年的随访结果显示,当术后第3 d survivin mRNA的表达水平大于9000拷贝/μg总RNA时,患者的复发风险显著性增高(P=0.033)。结论术后第3 d外周血中survivin mRNA的表达水平可作为一个新的判断指标用于食管癌患者预后的评估。     

探讨性别和年龄在慢性丙型肝炎患者 外周血Toll样受体3和7基因表达中的影响

目的 观察不同性别和年龄慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体7(TLR7)mRNA表达,探讨性别和年龄在CHC患者外周血TLR3和TLR7基因表达中的影响。方法 选择CHC患者115例,健康人群113例,取抗凝全血,实时荧光定量PCR检测TLR3和TLR7 mRNA表达。结果 CHC患者TLR3和TLR7表达量与健康人群相比,差异均有统计学意义(t=38.73,6.16,P<0.05)。CHC患者中非绝经期女性TLR3和TLR7表达量与绝经期女性和青年男性相比,差异均有统计学意义(t=61.210,6.464,P<0.05; t=24.166,26.266,P<0.05)。CHC患者中老年男性TLR3和TLR7表达量与青年男性相比,差异均有统计学意义(t=86.349,19.583,P<0.05),而与绝经期女性相比,仅TLR3表达量差异有统计学意义(t=122.941,P<0.05)。不同性别和年龄CHC患者的TLR3,TLR7基因表达量与HCV-RNA载量均无相关性(|r|<0.40,P>0.05),但是青年女性CHC患者HCV含量均比青年男性和老年女性低,差异有统计学意义(t=3.49,2.51,P<0.05),老年男性患者HCV含量比青年男性低,差异有统计学意义(t=2.35,P<0.05),老年男性和女性CHC患者HCV-RNA含量差异无统计学意义(t=1.20,P>0.05)。结论 性别和年龄与CHC患者TLR的表达有一定的关系,为临床合理有效治疗CHC提供理论依据和新方法。