焦磷酸测序法在幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因检测及药物疗效评价中的应用

目的本研究建立了幽门螺杆菌(Hp)克拉霉素耐药基因检测的焦磷酸测序方法,在获知耐药情况的同时根据半定量结果初步评估治疗效果。方法通过考察最合适的扩增引物、体系、退火温度建立最优的PCR扩增体系。分别对方法的灵敏度,特异性及一致性进行了评价。通过对44例临床标本的检测,比较本方法与快速尿素酶试验和13 C呼气试验的检出率。结果最优的PCR扩增体系为HiFi体系,最佳退火温度为59.8℃。本方法特异性良好,灵敏度达到100 copies/μL,与Sanger测序结果100.0%一致。36例标本快速尿素酶和焦测序法的检出率分别为48.7%和81.1%,耐药率为10.81%。8例标本13 C呼气试验和焦测序法的检出率分别为75.0%和87.5%,阳性标本检出一致率为100.0%。结论焦测序检测方法具备灵敏度高、快速、半定量的特点,为临床Hp克拉霉素耐药检测及初步疗效评价提供了一种新的方法。     

3种方法对儿童幽门螺杆菌感染检测的比较

目的对大便幽门螺杆菌(Hp)抗原检测方法、血清Hp抗体检测方法及13 C尿素呼气试验3种方法的灵敏度、特异性和诊断符合率进行比较,为儿童Hp感染检测适宜方法的选择提供依据。方法采集64例Hp感染患儿大便及血清分别进行大便Hp抗原、血清Hp抗体检测,并同时进行~(13)C尿素呼气试验。结果大便Hp抗原检测、血清Hp抗体检测及~(13)C尿素呼气试验的灵敏度分别为95.9%、95.6%、97.9%;特异性分别为93.3%、77.8%、93.8%;诊断符合率分别为95.3%、90.6%、96.9%。结论 ~(13)C尿素呼气试验及大便Hp抗原检测对儿童Hp感染的灵敏度、特异性及诊断符合率均较高,其中大便Hp抗原检测对儿童依从性更好,适于儿童Hp感染的检测。     

PCR扩增16S rRNA基因检测幽门螺杆菌的特异性研究

为了评估 PCR扩增 1 6S r RNA基因检测幽门螺杆菌的特异性 ,对 Hp和非 Hp临床分离菌株、胃活检组织、胃黏液、大便、淋巴细胞及其它非胃组织进行了 Hp的检测。 49株 Hp均出现 1 0 9bp特异扩增条带 ,而 7株非 Hp菌株为阴性 ;77份胃活检组织中 ,细菌培养阳性 48份 ,PCR阳性 50份 ;550份吞线取样的胃黏液标本 PCR扩增 Hp阳性 2 61份 (47.5% ) ;2 0份淋巴细胞、2 0份大便、5份乳房组织、4份肌肉组织、7份肺组织、2份脾组织和 3份肝组织标本 ,PCR扩增均阴性。结果显示 ,PCR法扩增 1 6S r RNA基因有较高的特异性 ,可用于临床标本 Hp的检测。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因克隆表达及临床应用

目的 获得重组表达的人幽门螺杆菌（Hp)尿素酶B亚单位蛋白（UreB),并将其运用于Hp感染的临床检测。方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术从临床分离的Hp菌株基因组中扩增出编码UreB的基因（ureB),将其克隆于质粒PinPoint^TMXa-Ⅲ上进行序列分析和蛋白表达,通过亲和层析得到纯化的重组UreB蛋白并用于113例消化性溃疡患者Hp感染的酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测。结果 克隆的ureB基因核苷酸序列与GenBank公布的序列相比较,同源性为96.44%,推定氨基酸序列同源性为99.65%。纯化的重组UreB蛋白相对分子量约为66000,纯度为90%以上,并保持较好的免疫原性。应用纯化的重组UreB蛋白联合ELISA法检测113例消化性溃疡患者Hp感染的灵敏度和特异性分别为92.0%、98.5%。结论 重组UreB蛋白作为抗原用于ELISA法检测Hp感染,保持了较高的灵敏度和特异性,可用于Hp感染的临床检测与诊断、疗效判定及流行病学研究。     

快速诊断幽门螺杆菌感染的研究

用4种方法检测131份胃黏膜活检标本，结果：幽门螺杆菌(Hp)阳性率分别为：快速尿素酶试验76．6％，分离培养71％，直接涂片48．1％，聚合酶链反应(PCR)78．5％。提示PCR的敏感性和特异性高于其他方法，可作为Hp感染的可靠的分子诊断方法。快速尿素酶试验特异性较差，但其简便和敏感，可作为常规检查。直接涂片阳性率过低，一般不适合单独诊断方法。     

半巢式PCR检测胃黏膜幽门螺杆菌与其它四种方法的比较

目的:建立一种半巢式PCR方法检测幽门螺杆菌(helicobacterpylori,HP)感染。方法:利用半巢式PCR方法(heminestedPCRassay)扩增磷酸葡萄糖胺变位酶基因(phosphogluco-saminemutasegene)内部片段,从而特异性地检测临床消化道标本中低拷贝数的幽门螺杆菌。并对其特异性和敏感性进行了分析,同时与临床常用的快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养4种方法进行了比较。结果:半巢式PCR方法敏感性和特异性分别为98.2%and96.0%,采用半巢式PCR方法、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验、细菌培养检测HP的阳性率分别为69.5%,61.0%,53.7%,67.1%,48.8%。结论:半巢式PCR是一种简便、高敏感性和特异性检测HP的方法。     

云南地区肿瘤患者CRE菌株的表型筛选与耐药基因相关性研究

目的探讨云南地区肿瘤患者碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)菌株的表型筛选与耐药基因的相关性。方法收集2015年1月至2018年12月云南省肿瘤医院临床科室送检标本中分离得到的31株CRE,采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)、乙二胺四乙酸碳青霉烯类灭活试验(eCIM)进行碳青霉烯酶表型筛选,PCR特异性扩增CRE耐药基因A、B、D类,比较分析CRE菌株mCIM、eCIM表型筛选与耐药基因扩增的相关性。结果31株CRE中,26株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其mCIM检测全部为阳性。以碳青霉烯酶PCR检测结果为“金标准”,mCIM检测碳青霉烯酶的灵敏度和特异度分别为100.0%、80.0%,与PCR检测的一致性程度为“几乎完全一致”(Kappa=0.870,P<0.001);eCIM检测金属酶的灵敏度和特异度分别为100.0%、53.8%,与PCR检测的一致性程度为“中等一致”(Kappa=0.518,P<0.001);mCIM联合eCIM检测碳青霉烯酶总的灵敏度和特异度分别为73.1%、80.0%,检测丝氨酸碳青霉烯酶的灵敏度为50.0%,检测金属酶的灵敏度为100.0%,与PCR检测的一致性程度为“高度一致”(Kappa=0.624,P<0.001)。结论mCIM、eCIM表型筛选试验在云南地区肿瘤患者中与耐药基因有高度的一致性,值得推广使用,但要注意eCIM对于携带blaKPC-2型的碳青霉烯酶存在假阳性。     

PCR扩增16SrDNA在幽门螺杆菌感染诊断中的运用

目的 探讨16SrDNA聚合酶链式反应 (PCR)在幽门螺杆菌(Hp)感染检查中的应用价值.方法 疑似慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡患者于胃镜下取其病变部位组织活检标本,胃癌患者于术中取病变部位组织活检标本,进行Hp的分离培养、提取活检组织DNA进行16SrDNA PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳,并将二者结果进行比较.结果 85例病例中,54例16SrDNA PCR阳性,阳性率为63.5%;34例Hp分离培养阳性,阳性率为40%.结论 两种检测方法阳性率相比较,PCR检查法明显优于分离培养法(P＜0.005).     

幽门螺杆菌功能性oipA基因的检测及意义

目的：评价幽门螺杆菌（Hp）oipA与消化系统疾病的关系。方法收集活检胃组织标本360份,对组织快速尿素酶实验阳性和部分阴性的活检标本进行 Hp分离培养,分离菌经革兰氏染色镜检、尿素酶实验和16SrRNA PCR鉴定后, PCR扩增其oipA和 cagA基因,测序分析oipA信号区的开关状态,分析功能性 oipA与临床疾病之间的关联性。结果组织标本分离培养获得106株 Hp,其中72株 cagA基因阳性,87株oipA信号区基因阳性,经测序分析80株 oipA基因信号区呈开放状态,1株oipA基因信号区呈关闭状态,6株开关状态不能确定;在溃疡和萎缩性胃炎中,功能性 oipA的检出率均显著高于 cagA。结论功能性oipA与严重消化系统疾病关系密切。     

上海地区幽门螺杆菌对克拉霉素耐药的相关基因检测

目的通过荧光PCR熔解曲线方法直接检测临床样本中幽门螺杆菌(Hp)对克拉霉素耐药基因,了解上海地区Hp耐克拉霉素基因的分布特征,并为临床快速检测Hp对克拉霉素耐药性提供一种有效的方案。方法收集2017年9-12月复旦大学附属中山医院消化科就诊并接受胃镜检查的快速尿素酶试验Hp阳性患者的胃黏膜组织标本80份,使用荧光PCR熔解曲线法直接检测黏膜样本中Hp种特异性23S rRNA的区域并对扩增的核酸进行荧光标记,通过检测荧光变化绘制其熔解曲线,以确定Hp的23S rRNA突变情况;采用DNA测序技术直接检测标本中Hp克拉霉素23S rRNA耐药基因突变位点。并对两种方法的结果进行Kappa检验统计学比较。结果 80份胃黏膜组织标本使用荧光PCR熔解曲线法共检测69份Hp阳性,11份Hp阴性,阳性率为86.2%。在69份Hp阳性标本中24份标本存在23SrRNA第2142或2143位点的变异,突变率34.8%。使用DNA测序法共检测出64份Hp阳性,阳性率为80.0%。其中23例患者的标本检测到23S rDNA耐药基因的突变,突变率35.9%。两种方法检测Hp耐药基因突变的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为87.0%、95.1%和92.2%,Kappa系数为0.829,两者一致性较好。结论上海地区克拉霉素耐药Hp菌株基因型以23S rRNA基因的A2143G突变占主导。荧光PCR熔解曲线法可直接检测胃黏膜活检组织中Hp及其23S rRNA突变基因,该方法结果准确可靠。     

PCR法扩增脲酶B基因在快速诊断幽门螺杆菌感染中的应用研究

应用基于幽门累杆菌脲酶Ｂ基因的引物建立了检测幽门螺杆菌的ＰＣＲ方法。５６例内窥镜胃组织标本中,细菌培养阳性３４份,ＰＣＲ阳性３６份;１７２份用自制采样器所取的胃粘液标本中,ＰＣＲ阳性１０６份,其中经组织培养ＨＰ阳性的３４例患者的胃粘标本ＰＣＲ阳性。研究结果提示,ＰＣＲ方法扩增酶基因检测幽螺杆菌具有快速、简便、准确的优点,在幽门螺杆菌感染的快速诊断、疗效观察、复发机理和流行病学调查研究中均有重要价值     

多重PCR在幽门螺杆菌检测及分型中的应用

应用多重ＰＣＲ同时扩增１６ＳｒＲＮＡ和ｃａｇＡ基因来检测幽门螺杆菌感染及其分型。ＰＣＲ产物经ＤＮＡ序列测定证实为转异性扩增，敏感度为１０＾２ＣＦＵ／ｍｌ。４８株Ｈｐ菌株中，Ｉ型菌株（ｃａｇＡ＋）２６株（５４．２％）；５５０份胃粘液标本，Ｈｐ阳性（１６ＳｒＲＮＡ基因＋）２１６份（４７．５％），其中Ｉ型Ｈｐ１３９份（５３．３％）。     

Diagnosis of helicobacter pylori infection by polymerase chain reaction: is it worth it?

The aim of this study was to determine to what degree polymerase chain reaction (PCR) was superior to histology and culture, and whether a noncommercial urease test was of value, in detecting Helicobacter pylori in gastric biopsy specimens. Gastric biopsy specimens from the antrum and corpus of 134 consenting patients were subjected to PCR, targeting the glmM (ureC) gene, histology, culture, and a rapid urease test. PCR detected H. pylori in the biopsy specimens from 59 patients. All methods showed a high degree of sensitivity and specificity, but histology gave 2 false-negatives, and culture and the urease test gave 1 false-negative compared with PCR. PCR of a glmM gene segment was superior to the other methods for the detection of H. pylori infection and was comparable to histology in terms of cost. Nevertheless, in this study, histology and culture were found to be relatively reliable methods for examining gastric biopsy specimens.     

14C-尿素呼气试验检测幽门螺杆菌感染的临床应用

目的探讨14C-尿素呼气试验(14C-UBT)检测幽门螺杆菌(Hp)感染的临床应用价值。方法选取128例患者因上消化道症状接受胃镜检查患者,以快速尿素酶试验(RUT)和血清HP抗体胶体金试验联合检测作为诊断HP感染的"金标准",评价14C-UBT诊断Hp感染的敏感性、特异性和准确性。结果金标准阳性70例中,14C-UBT检测阳性为67例,阴性为3例;金标准阴性58例中,14C-UBT检测阴性为56例,阳性为2例。14C-UBT检测诊断Hp感染的敏感度95.7%(67/70),特异度96.6%(56/58),准确性96.1%(123/128),阳性预测值97.1%(67/69),阴性预测值94.9%(56/59)。14C-UBT、RUT、血清Hp抗体胶体金试验等3种方法的敏感性、特异性、准确性经非参数检验法检验,差异均无统计学意义。结论14C-UBT有较高的敏感性和特异性,是一种简便可靠,非侵入性的诊断Hp感染的方法,易于临床推广。     

血清特异性免疫复合物在幽门螺杆菌感染诊断中的意义

目的:建立一种血清幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)特异性免疫复合物的检测方法,并评价其在Hp感染诊断中的作用。方法:利用抗Hp单克隆抗体捕获Hp特异性免疫复合物,再用酶标羊抗人免疫球蛋白对其进行检测,并对其特异性和敏感性进行分析,同时与临床常用的血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养5种方法进行了比较,并对药物根除效果进行了评价。结果:血清可溶性Hp抗原检测方法敏感性和特异性分别为86.0%和96.0%,此方法明显优于血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检和细菌培养,与14C尿素呼气试验差异无显著性,药物治疗前后血清Hp特异性免疫复合物含量差异无显著性。结论:血清Hp特异性免疫复合物检测方法是一种简便、高敏感性和特异性的检测Hp感染的方法,但不能用于Hp感染药物根除效果的评价。     

Comparison of PCR and common clinical tests for the diagnosis of H. pylori in dyspeptic patients

Helicobacter pylori has been recognized as a major gastric pathogen. The objective of this study was to assess the diagnostic value of common clinical tests to detect H. pylori infection, by comparison with PCR. Serum and gastric biopsy specimens from 106 dyspeptic patients were examined. Serology was performed with Pyloriset Dry test, and biopsies were examined histologically, for rapid urease activity and PCR amplification of an ureA gene segment of H. pylori. PCR primers were specific for H. pylori and required at least 1.47 pg of H. pylori DNA, corresponding to about 800 bacterial cells. According to serology, histology, rapid urease, and PCR, positive results were respectively found in 56%, 86%, 64%, and 85% of dyspeptic patients, primarily with gastritis. Relative to PCR, the sensitivity (and specificity) was 55% (38%) for serology, 86% (13%) for histology, 70% (69%) for urease. When combining histology and urease, Bayesian analysis of data indicated no advantage of using combined methods over rapid urease test alone. Histology should not any longer be considered a gold standard test for Helicobacter pylori. Urea breath test still seems the first option for non invasive diagnostic. If an invasive diagnostic is justified, highly specific and sensitive molecular methods should be used to examine specimens.     

新疆阿合奇县柯尔克孜族人群幽门螺杆菌感染情况调查分析

目的：了解新疆阿合奇县当地柯族人群幽门螺杆菌（Hp）感染现状,并就性别、年龄、饮食习惯、生活环境等感染相关因素进行分析。方法随机抽取2013年4月至2013年7月来阿合奇县人民医院健康体检无胃病史柯族人群807例作为研究对象,采用胶体金法检测血清幽门螺杆菌尿素酶抗体。结果新疆阿合奇县柯族人群 Hp 感染率为24．29％,男性感染率为28．85％,女性感染率为20．67％,经χ2检验,Hp 阳性率男女差异有统计学意义（P ＜0.05）,经过数据分析,各年龄段 Hp 阳性率之间存在线性变化趋势,且阳性率随年龄增大而增加。结论新疆阿合奇县柯族人群 Hp 感染率较高,并随年龄的增大而增加。     

幽门螺杆菌根除治疗对特发性血小板减少性紫癜患者疗效的影响

【目的】分析特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者的幽门螺杆菌（Hp）感染情况,探讨Hp根除治疗对Hp感染的ITP患者疗效的影响。【方法】用^13C尿素呼气试验或胃镜取材快速尿素酶试验检测132例ITP患者的Hp感染情况,将132例受检者中80例Hp（＋）ITP患者随机分为两组,每组各40例：治疗组采用免疫加根除HP治疗,而对照组只采用免疫治疗,治疗前以及治疗后d14、第1、3、6个月检测两组患者的血小板数目并评估临床效果。【结果】132例ITP患者中有HP感染80例（60．6％）,治疗组的40例中,成功根除HP29例（72．5％）。治疗后d14、第1、3、6个月血小板计数比较显示,治疗组明显高于对照组（P〈O．01）。治疗组的总有效率显著高于对照组（P〈0．05）,治疗后随访1年,治疗组的总复发率明显低于对照组（P〈0．01）。【结论]Hp感染与ITP有关,部分Hp（＋）患者根除Hp治疗有效。根除Hp为临床治疗ITP提供了一条新的途径。