转染人骨形态发生蛋白在兔骨髓间充质干细胞的表达

目的：采用基因转移技术将人骨形态发生蛋白7（hBMP-7)基因转染兔骨髓间充质干细胞（BMSc ),检测外源基因的表达。方法：常规分子生物学技术构建hBMP-7逆转录病毒载体,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,感染兔骨髓间充质干细胞,使用原位杂交以及免疫组织化学的方法检测hBMP-7在BMSc中的表达。结果：原位杂交和组化检测经hBMP-7基因转染的BMSc中出现阳性结果,未转染的BMSc中未见阳性结果出现。结论：采用逆转录病毒介导的方法可以将hBMP-7转染至BMSc中,并有外源性基因的表达。     

转染人骨形态发生蛋白在兔骨髓间充质干细胞中的表达

目的采用基因转移技术将人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSc),检测外源基因的表达.方法常规分子生物学技术构建hBMP-7逆转录病毒载体,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,感染兔骨髓间充质干细胞,使用原位杂交以及免疫组织化学的方法检测hBMP-7在BMSc中的表达.结果原位杂交和免疫组化检测经hBMP-7基因转染的BMSc中出现阳性结果,未转染的BMSc中未见阳性结果出现.结论采用逆转录病毒介导的方法可以将hBMP-7转染至BMSc中,并有外源性基因的表达.     

骨形态发生蛋白2基因转染的骨髓间充质干细胞修复羊胫骨干骨缺损

目的 评价腺病毒介导的人骨形卷发生蛋白2(Adv-hBMP-2）基因转染的羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)对长骨干骨缺损的修复效果．方法 22只羊，体重18．1～29．5kg．制造羊胫骨干骨缺损(2．1cm)．分为4组：Ⅰ组．Adv-hBMP-2转染BMSCs组(8只)；Ⅱ组．腺病毒介导的β半乳槠苷酶(Adv-βgal)转染BMSCs组(6只)；Ⅲ组，未转染BMSCs组(6只)；Ⅳ组，未治疗组（2只)。细胞自身分泌的细胞外基质作为细胞载体。分期行X线、计量组织学检查和生物力学测定。结果 X线检查示Ⅰ组的羊胫骨干骨缺损内有明显骨痂形成；24周，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的愈合率分别为6/7、1／5、2／5及0／1，X线疗效评分显示Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组的评分比较．差异有显著性意义。组织学检查显示，与其它组相比．Ⅰ组的新生骨量最多，并有皮质骨形成。生物力学测试示Ⅰ组的力学强度最大。结论 Adv-hBMP-2基因转染的BMSCs在缺乏骨传导性支架的条件下可修复长骨干骨缺损。     

骨髓间充质干细胞在丝素蛋白/骨形态发生蛋白中的生物学行为观察

目的 观察丝素蛋白与牛骨形态发生蛋白的载体系统与骨髓间充质干细胞的体外相容性.方法 将多孔丝素蛋白修剪成20×10×5 mm长方体状物,置入6孔板中;将粉状bBMP用PBS液溶解制成2mg/ml混悬液,0.5ml无菌移液管滴定于多孔丝素蛋白上(0.5毫升/个).骨髓间充质干细胞以107/ml接种到载体系统上,复合4小时后加入生长液继续体外培养,每1、4、8天时进行碱性磷酸酶、矿化结节染色观察以及扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察;另外同时设立单纯丝素蛋白与细胞复合培养对照组进行观察.结果 倒置显微镜、扫描电镜和共聚焦显微镜下观察到细胞在两种材料上生长形态、活性正常,体外培养24小时时细胞已贴附材料上,呈匍匐状伸展,以后逐渐融合生长,8天时大量细胞成片状攀附在材料表面,并分泌有大量的网状细胞外基质,实验组可见结节状基质生成;碱性磷酸酶、矿化结节染色观察发现实验组细胞碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性反应,对照组阴性.结论 丝素蛋白是一种良好细胞外基质材料,也是一种良好生长因子的缓释载体.     

转染骨形态发生蛋白-2基因的人脐带间充质干细胞成骨研究

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对其成骨分化和体内异位成骨的影响.方法 实验分为3组,空白组:10％胎牛血清+ DMEM培养基,对照组:10％胎牛血清+DMEM培养基+空慢病毒载体转染,实验组:10％胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染,检测3组不同培养基培养后人脐带间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,蛋白印迹法检测骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、BMP-2的蛋白表达变化.yon kossa染色观察hUCMSC钙结节形成.大鼠肌袋内植入BMP-2转染hUCMSC/COL1,通过CT三维重建及苏木素-伊红(HE)染色观察其体内成骨能力.结果 hUCMSC BMP-2转染良好,转染率可达到(90.95±4.35)％,实验组细胞在第5天,ALP活性就由(26.492 ±7.105) U/g·蛋白增加至(38.625±11.592) U/g·蛋白,在第14天,实验组的ALP的活性可以高达(49.732±13.068) U/g·蛋白,对比空白组和对照组都有明显增加(P＜0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1、BMP-2和OPN蛋白呈现高表达(P＜0.05).转染BMP-2基因后,hUCMSC培养28 d可形成大量的钙结节.BMP-2转染hUCMSC/COL1在大鼠肌袋内可异位成骨.结论 转染BMP2基因可促进hUCMSC细胞成骨能力.     

兔自体骨髓间充质干细胞体内复合移植的成骨研究

目的 观察兔自体骨髓间充质干细胞（MSCs)体内复合移植的成骨能力，以寻求理想的MSCs载体。方法将10只新西兰大白兔随机分成A、B两组，从自体骨髓中分离出MSCs，体外培养并扩增后分别与相同大小的小牛脱钙骨（DBCB），自固化磷酸钙人工骨（CPC）复合移植于两组大白兔左侧骶棘肌中，同时右侧骶棘肌分别植入相同大小的DBCB，CPC作空白对照；16周后取出标本，观察成骨情况并行组织学检查。结果 A组5例：MSCs DBCB侧均发现有新骨组织形成，单纯DBCB侧3例被完全吸收，降解，2例大部分吸收，降解；B组5例；MSCs CPC侧和单纯CPC侧均未见骨组织形成，植入物也无明显吸收，结论 自体骨髓MSCs在适合载体负载下可在体内自动分化成骨，DBCB是MSCs的良好载体之一。     

骨形态发生蛋白2基因转染的兔骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-聚己内酯支架体外构建载基因仿生骨的实验研究

[目的] 构建聚乳酸-聚己内酯(PLA/PCL)吸附骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的聚乙二醇(PEG)纳米复合物形成生物可降解仿生骨材料,接种兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone mes-enchymal stem cells,rBMSCs),检测BMP-2基因的转染情况及其对细胞增殖、分化的影响.[方法] 通过溶液共混法制备PLA/PCL载基因仿生骨,接种rBMSCs细胞于仿生骨之上,培养48 h;Real-time PCR检测转染后细胞BMP-2及骨钙素mRNA表达水平;应用Western Blot及免疫组化检测rBMSCs转染后BMP-2蛋白表达;免疫荧光检测rBMSCs细胞Ⅰ型胶原蛋白表达;ELISA检测转染后细胞培养上清中分泌BMP-2浓度,同时检测细胞内碱性磷酸酶活性,从而分析细胞分化情况;流式细胞检测转染BMP-2后细胞周期的变化.[结果] 以未转染细胞作为对照,免疫组化表明转染后细胞内BMP-2表达量明显上调(P＜0.05);Real-time PCR检测结果表明BMP-2与骨钙素mR-NA表达显著增加(P＜0.05);同时Western Blot结果同免疫组化结果相似,BMP-2也有明显上调(P＜0.01);免疫荧光检测Ⅰ型胶原表达量显著上升(P＜0.01);ELISA检测细胞培养上清中BMP-2分泌量也有增加(P＜0.05);碱性磷酸酶较对照组相比活性显著增强(P＜0.05),而流式细胞检测S期细胞无明显变化(P＞0.05).[结论] 载基因仿生骨具有稳定而安全的转染性能,其转染后对rBMSCs细胞的分化效果是明显的,而对于细胞周期变化的影响并不显著.     

腺病毒骨形态发生蛋白2绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质干细胞成骨及示踪作用

目的 观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP-hBMP-2)转染对骨髓间质干细胞(bMSCs)成骨能力的影响.方法 取日本大耳白兔4只自双侧股骨远端抽取骨髓培养bMSCs.以Ad-GFP-hBMP-2基因(实验组)及Ad-GFP(对照组)基因转染bMSCs后,用ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性;原位杂交检测两组细胞I型胶原的表达;Western blot 检测细胞中BMP-2的表达.将转染后24 h的bMSCs接种到裸鼠体内,术后第4、8、12周观察成骨情况.结果 转Ad-GFP-hBMP-2基因组和Ad-GFP组各时间段ALP分泌量差异分别有统计学意义(P<0.01);实验组I型胶原原位杂交实验组为阳性.实验组成骨阳性率为90%,对照组为40%.结论 bMSCs经Ad-GFP-hBMP-2基因转染后能高效表达BMP-2并诱导成骨.腺病毒介导人BMP-2转基因可以提高bMSCs的成骨能力.     

骨形成蛋白2基因修饰的老年大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的研究

目的观察年龄因素对骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)成骨分化能力的影响;了解基因治疗对老年大鼠MSCs成骨分化能力的影响. 方法 1月龄(幼年组)、9月龄(成年组)及24月龄(老年组)雄性Wistar大鼠各6只,取MSCs经体外分离、培养及携带骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒载体(Ad-BMP-2)转染后,定量检测BMP-2、碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)表达,以及成骨细胞标志性蛋白:Ⅰ型胶原、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥素(osteopontin, OPN)的表达.将转染的各组MSCs分别与磷酸三钙(tricalcium phosphate, TCP)复合后植入裸鼠体内,3周后取材,比较各组诱导异位成骨能力. 结果 ELISA检测表明BMP-2基因修饰的MSCs可以有效表达BMP-2,且表达量在各年龄组间差异无统计学意义(P>0.05);各组ALP于诱导后第9天达高峰,但组间差异均无统计学意义(P＞0.05);诱导后第7天,RT-PCR半定量检测示各组均有成骨细胞特征性蛋白,即:Ⅰ型胶原、OPN及BSP的明显表达,表达量在各组间差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2基因转染的MSCs与TCP复合后可诱导裸鼠体内异位成骨,各组成骨量差异无统计学意义(P>0.05). 结论 BMP-2基因修饰的老年大鼠MSCs可以恢复成骨分化能力,基因治疗可能为老年性骨骼疾病提供一种新的治疗途径.     

兔骨髓间质干细胞修复肌腱缺损效果观察

目的　观察兔骨髓间质干细胞(MSCs)修复肌腱缺损的效果。　方法　分离培养家兔MSCs,检测CD44mRNA进行鉴定。6只家兔分为实验组和对照组,每组3只。在兔跟腱处造成3cm长的缺损,实验组家兔以自体MSCs为种子细胞、以胶原聚羟基乙酸(PGA)为生物支架构建肌腱并移植于跟腱缺损处,对照组家兔仅以PGA生物支架修复跟腱缺损。于术后4、8、12周对移植部位进行大体和组织学观察。　结果　MSCs培养11d时CD44mRNA显示阳性。实验组术后8周肉眼可见移植处形成腱样组织, 12周时组织学观察可见形态一致、顺应力学方向排列于胶原中的腱样细胞,类似正常肌腱组织。对照组所形成的新生组织较实验组细小且与周围组织粘连, 12周时组织学观察见细胞排列紊乱,胶原纤维呈松散网丝状。　结论　应用组织工程技术以自体MSCs修复肌腱缺损具有可行性。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑创伤的实验研究

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗脑创伤的疗效和机制.方法 采用Feeney DM方法将Sprague-Dawley大鼠制作脑创伤模型后随机分为自体BMSC移植治疗组和生理盐水对照组.用神经功能缺损评分(NSS)和Y型电迷宫测试大鼠神经功能,采用免疫组织化学方法 检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、nestin和Ⅷ因子,采用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,自体BMSC移植治疗组大鼠NSS评分降低、Y型电迷宫实验错误反应次数减少,脑组织水肿和坏死面积及瘢痕形成均减少,BrdU/GFAP荧光双标、BDNF、nestin阳性表达细胞数和微血管数均增多,细胞凋亡数减少(均P<0.05).结论 手术移植的自体BMSC可在脑损伤区存活、增殖、分化,促进神经营养因子分泌,减少细胞凋亡,参与损伤区新生血管生成和组织修复,从而促进神经功能恢复.     

BMP-2联合BMP-7在截骨延长时促进成骨的实验研究

目的 探究在截骨延长成骨过程中联合应用BMP-2和BMP-7对成骨的促进作用.方法 采用健康成年日本大耳白兔30只,完全随机分为三组.A组作为对照组正常牵拉不做其他处理;B组在截骨后于截骨处加入rhBMP-2药片;C组在截骨后于截骨处加入rhBMP-2药片,7d后在延长区经皮注射rhBMP-7溶解液.在术后第7天、第3...     

Bone formation in rabbit's leg muscle after autologous transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells expressing human bone morphogenic protein-2

Background:

To test whether autologous transplantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-MSCs) expressing human bone morphogenic protein-2 (hBMP-2) can produce bone in rabbit leg muscles.

Materials and Methods:

MSCs were isolated from BM of the iliac crest of rabbits and then infected with lentiviral vectors (LVs) bearing hBMP-2 and green fluorescent protein under the control of the cytomegalovirus (immediate early promoter). Differentiation of transduced MSCs to osteoblasts in vitro was evaluated with an alkaline phosphatase activity assay and immuohistochemistry against osteoblast specific markers. MSCs expressing hBMP-2 were placed in an absorbable gelatin sponge, which was then transplanted into the gastrocnemius of rabbits from which MSCs were isolated. Bone formation was examined by X-ray and histological analysis.

Results:

LVs efficiently mediated hBMP-2 gene expression in rabbit BM-MSCs. Ectopic expression of hBMP in these MSCs induced osteoblastic differentiation in vitro. Bone was formed after the MSCs expressing hBMP-2 were transplanted into rabbit muscles.

Conclusion:

Ectopic expression of hBMP-2 in rabbit MSCs induces them to differentiate into osteoblasts in vitro and to form a bone in vivo.     

Lunate arthroplasty with autologous mesenchymal stem cells in a rabbit model

BACKGROUND: There is no ideal treatment for end-stage degenerative wrist disorders and subsequent carpal collapse. The purpose of this study was to investigate whether autologous cartilage constructs tissue-engineered from bone-marrow-derived mesenchymal stem cells can be effective for carpal bone reconstruction. METHODS: Total lunate excision was performed in twenty-seven adult New Zealand White rabbits. Mesenchymal stem cells were isolated from marrow and then were culture-expanded. Group-1 rabbits underwent excision only. Group-2 animals underwent excision followed by implantation of a scaffold consisting of gelatin and hyaluronan. Group-3 animals underwent excision followed by implantation of a mesenchymal stem cell-seeded scaffold that had been preincubated in chondrogenic medium. The group-1 animals were killed at six weeks, whereas the group-2 and group-3 animals were killed at six or twelve weeks. Tissues were harvested for radiographic and histologic analysis. RESULTS: Significant carpal collapse (a 5.4% +/- 2.8% reduction in the carpometacarpal index, p < 0.05) was observed in the group-1 animals by six weeks. In contrast, the carpal height was maintained in the group-2 and 3 animals. There was no radiographic evidence of ossification in the group-1 or 2 animals, whereas there was radiographic evidence of ossification in all six group-3 rabbits killed at the twelve-week time-point. Histologic sections from the group-3 animals showed filling of the lunate space with islands of cartilage with interspersed bone ossicles at six weeks. At twelve weeks, there was abundant bone formation as well as evidence of neovascularization. Osseous tissue was present in the central portions of the constructs while the periphery was lined with cartilage. In groups 1 and 2, the lunate space was filled with poorly organized fibrous tissue. CONCLUSIONS: Cartilaginous implants preformed from autologous mesenchymal stem cells seeded onto biodegradable scaffold can prevent carpal collapse. The newly formed osteochondral tissue appears to function as an adequate biologic lunate spacer for at least twelve weeks in this animal model.     

BMP-2联合低氧环境诱导BMSCs向软骨表型分化的研究

目的探讨BMP-2联合低氧环境诱导BMSCs向软骨表型分化的可行性,并进一步研究其生物学机制。方法取4周龄健康清洁级雌性SD大鼠骨髓采用贴壁法体外培养BMSCs,取第2代细胞根据培养条件不同分为4组:常氧对照组(A组)、常氧加BMP-2诱导液组(B组)、低氧(O2浓度3%)对照组(C组)和低氧加BMP-2诱导液组(D组)。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,培养7、14、21 d阿利新蓝染色检测各组软骨基质糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)分泌水平,21 d时Western blot检测细胞内Ⅱ型胶原和低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白表达水平,RT-PCR检测成软骨、成骨以及低氧相关基因表达水平。结果诱导培养21 d,D组细胞变为类圆形,细胞密度降低,细胞周边呈陷窝样,基质包裹细胞;A、B、C组均未见上述典型变化。D组阿利新蓝染色明显较其他组深,并随诱导时间延长蓝染加深,21 d时出现成片深染蓝色,其他组各时间点仅见散在少量的淡染蓝色。Western blot检测D组细胞内Ⅱ型胶原蛋白表达水平较其他组显著增高,C、D组HIF-1α蛋白表达水平较A、B组显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测D组成软骨分化相关指标Ⅱ型胶原α1(collagenⅡα1,COL2α1)、聚集蛋白聚糖表达最高,而B组成骨分化相关指标COL1α1、ALP、Runt相关转录因子2表达水平最高,C、D组低氧相关指标HIF-1α较A、B组显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-2联合低氧(O2浓度3%)环境可以诱导大鼠BMSCs向软骨分化,并抑制其成骨分化,HIF-1α可能是参与促软骨生成过程中的一个重要信号分子。     

3种不同途径移植自体骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死效果比较

目的比较3种不同途径移植自体骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗急性心肌梗死效果。方法小型猪12只,建立心肌梗死(AMI)模型,纯化扩增并将DAPI标记的MSCs经冠脉、心内膜及心外膜注射移植,移植前后记录左室血流动力学指标及LVEF变化,3个月后取心肌行免疫组织化学检测结蛋白desmin和心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达。结果冠脉组梗死心肌周围未见明确的移植细胞,仅见非特异的荧光染色,与心梗后比较心功能改善,但与对照组比较无明显差异;心内膜及心外膜组移植的MSCs分布较广,胞核为蓝色椭圆形,免疫组织化学检测胞浆心肌特异蛋白染色阳性,与冠脉移植组比较LVEDP降低(P<0．05)、LV±dp／dtmax增快(P<0．05)、 LVEF增高(P<0．05)、新生血管数增加及瘢痕面积缩小等指标改善更明显,且有统计学意义。结论 3种途径移植MSCs均可改善AMI后心功能,经冠脉移植不是最佳途径,心肌内注射效果更好。     

hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测

目的 探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2 ,hBMP-2)基因植人兔股骨头坏死模型体内后的活性,为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组（n = 12) ,A组不植人材料,为对照组,B、C组分别植人DBM/BMSCs、hBMP-2/BMSCs/DBM;3.术后第1、第2、第3 周各组分别处死4只兔子,分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内hBMP-2基因和蛋白的表达量,评估hBMP-2 基因在兔体内的活性。结果 植人后,在第1、第2、第3周,PCR结果示：A、B两组KBMP-2基因呈阴性表达,C组hBMP-2基因呈阳性表达;RTFQ-PCR 示：C 组相对表达量分别为 1,0.947 ±0.025,0.895 ±0.059, P = 0. 081; Western blot 示：A、B 两组 hBMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组hBMP-2蛋白呈阳性表达;凝胶成像系统分析显示：C组hBMP-2蛋白表达灰度值（目的/内参）分别为：0. 530 ± 0. 056、0. 507 ± 0. 066、0. 475 ±0. 086,且两两之间比较P> 0. 05。结论 hBMP-2基因转染BMSCs植人兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达,进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。     

骨髓间充质干细胞自体移植时间对兔急性肾功能衰竭治疗效果的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)自体移植对兔急性肾功能衰竭的治疗作用并探讨不同移植时间对其治疗效果的影响.方法 骨髓穿刺抽取新西兰大耳白兔骨髓,分离、培养、扩增MSCs.30只兔通过夹闭双肾动脉90 min后再灌注制作急性肾功能衰竭模型,随机分为移植A组、移植B组和未治疗C组,每组10只.移植A组在恢复血流即刻,移植B组在恢复血流后72 h将BrdU标记的自体MSCs经颈静脉回输移植,未治疗C组仅制作急性肾功能衰竭模型.于造模后21 d处死兔,比较各组的存活率、肾功能及肾组织形态学改变.结果 与未治疗组比较,移植组肾功能较快恢复(P<0.05),肾组织损伤明显改善(P<0.05).移植A组的效果优于移植B组(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞自体移植能有效治疗缺血再灌注损伤引起的急性肾功能衰竭,早期移植的效果好.     

骨髓间充质干细胞的输注时机对小鼠骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)输注时机对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其机制.方法 以Babl/c小鼠为供者,于无菌条件下获取其骨髓,制成MSCs悬液及骨髓细胞悬液.C57BL/6小鼠为受者,经电子直线加速器行全身照射后,分为5组进行allo-BMT.骨髓移植组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液和RPMI 1640培养液各0.2 ml;联合移植组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液和MSCs悬液各0.2 ml;延迟输注Ⅰ组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液0.2 ml,3 d后再输注MSCs悬液0.2 ml;延迟输注Ⅱ组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液0.2 ml,7 d后再输注MSCs悬液0.2 ml;对照组受者经尾静脉输注RPMI 1640培养液0.4 ml.记录受者存活时间及aGVHD的发生情况,检测外周血白细胞、CD4+ 和CD8+淋巴细胞数,测定血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平,观察死亡小鼠的肝、脾、小肠及皮肤等组织病理学变化.结果 对照组受者均于移植后14 d内死亡.骨髓移植组于移植14 d以后出现aGVHD的表现,且均于23 d内死亡.联合移植组aGVHD的发生率为30%,延迟输注Ⅰ组aGVHD的发生率为60%,两组受者的存活时间均长于骨髓移植组.延迟输注Ⅱ组与骨髓移植组间aCVHD发生率和死亡时间的差异无统计学意义.受者的白细胞数均于全身照射后3 d降至最低,各移植组白细胞数皆于移植后回升,但骨髓移植组和延迟输注Ⅱ组的白细胞数未能恢复至正常水平,而联合移植组和延迟输注Ⅰ组的白细胞数均于移植后28 d恢复正常.输入MSCs者,CD4+淋巴细胞数量明显升高,而CD8+淋巴细胞数量下降,以联合移植组最为明显.联合移植组的IFN-γ水平明显低于骨髓移植组,而IL-4水平高于骨髓移植组.各组发生aGVHD的小鼠的肝、脾、小肠及皮肤病理改变基本一致.结论 MSCs与骨髓同时输注时aGVHD的发生率最低,受者的存活时间也最长,其机制可能与细胞因子水平有关.