腺苷A3受体激动剂对新生期母婴分离肠易激综合征大鼠内脏高敏感的作用

目的研究腺苷A3受体在新生期母婴分离肠易激综合征(IBS)大鼠模型内脏高敏感中的作用。方法采用新生期Sprague-Dawley雄性大鼠和母婴分离方法建立内脏高敏感模型,分别用腺苷A3受体激动剂2-Cl-IB-MECA及DMSO溶剂作用后,用行为学观察和腹部回缩反射评分来检测内脏痛反应,用免疫组化方法检测腰骶段脊髓背角神经元c-fos蛋白的表达数量和远端结肠中5-羟色胺阳性细胞数目,用ELISA方法检测远端结肠中5-羟色胺的含量。结肠行常规组织学检测。结果与DMSO组比较,2-Cl-IB-MECA组大鼠在40、60和80 mmHg结直肠压力扩张下的AWR评分显著减低(P<0.05),脊髓背角c-fos蛋白免疫反应阳性神经元数目显著减少(P<0.05),结肠黏膜5-羟色胺阳性细胞数目和5-羟色胺含量均显著减少(P<0.05)。两组大鼠在结直肠压力扩张前后,结肠均未见组织损伤或炎症。结论腺苷A3受体激活可能通过减少结肠5-羟色胺的作用未减轻IBS大鼠模型的内脏高敏感,腺苷A3受体可能是治疗IBS内脏高敏感的新靶点。     

鞘内注射促肾上腺皮质激素释放因子对肠易激综合征模型大鼠内脏高敏感性的影响

目的 研究鞘内注射促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)对肠易激综合征模型大鼠内脏高敏感性的影响.方法 将30只大鼠随机分成3组,每组各10只,应用化学刺激方法建立肠易激综合征大鼠模型后,分别给予鞘内注射CRF或预先腹腔注射CRF-1受体拮抗剂CP-154526后再鞘内注射CRF,对照组则注射生理盐水;实验后所有大鼠给予直肠内球囊扩张,检测球囊扩张引起腹部收缩反射的最小容量阈值及球囊不同容量扩张时腹部收缩反射的次数,以评价鞘内注射CRF对肠道敏感性的影响.应用免疫组织化学染色及计算机图像分析系统半定量分析脊髓后角即刻早基因(c-fos)表达.结果 直肠内球囊扩张时,鞘内注射CRF组引起腹部收缩的最小容量阈值为(0.62±0.10)ml,高于其他2组[分别为(0.52±0.09)ml、(0.56±0.08)ml;F=3.25;P＜0.05].直肠球囊扩张体积1.0 ml时鞘内注射CRF组腹部收缩反射次数为(9.10±1.97)次,明显低于其他2组[分别为(14.4±1.71)次、(15.6±2.32)次;F=29.4;P＜0.01];体积1.5 ml、2.0 ml高容量扩张时3组间差异无显著性(P＞0.05).鞘内注射CRF组腰骶段脊髓后角c-fos阳性神经元细胞相对切面面积及OD值均明显低于其他2组(P＜0.01).结论 鞘内注射CRF能够降低肠易激综合征模型大鼠内脏高敏感性,并减少其腰骶段脊髓后角c-fos的表达.     

大鼠小肠黏膜肥大细胞5-羟色胺4受体mRNA的表达

目的:证实大鼠小肠黏膜肥大细胞有5-羟色胺4(5-HT4)受体mRNA的表达.方法:采用胶原酶消化分离、不连续密度梯度离心法纯化大鼠的小肠黏膜肥大细胞,应用原位杂交方法检测5-HT4受体mRNA的表达.结果:分离纯化后的小肠黏膜肥大细胞胞浆中有较强的棕黄色颗粒.结论:首次证实培养的小肠黏膜肥大细胞中有5-HT4受体mRNA的表达,为5-HT4受体参*与肥大细胞释放5-HT、调节内脏高敏性提供了实验依据.     

5-HT2A、5-HT7受体在大鼠脊髓Onuf核分布的形态学研究

目的:探讨5-HTZA、5-HT7,受体在雄性大鼠脊髓Onuf核不同运动神经元内分布及其与泌尿生殖功能中枢调控的关系.方法:成年SD大鼠10只(雄性8只、雌性2只),随机分为性别对照组(n=4,雌雄各2只)和逆行示踪组(雄性大鼠,n=6).性别对照组取脊髓L5～6节段,切片后作5-HTZA或5-HT7受体免疫组化染色;逆行示踪组采用重组伪狂犬病毒株(PRV-152)分别注入右侧尿道外括约肌(Eus组;n=3)或右侧坐骨海绵体肌(Ic组;n=3),4d后取L5-6节段,切片后作5-HT2A或5-HT7受体双标记荧光免疫组化染色.分别在光镜或激光共聚焦显微镜下观察5-HT2A、5-HT7受体在Onuf核的分布情况.结果:5-HT2A受体的免疫产物主要位于Onuf核背外侧核的内侧,5-HT7受体则主要位于背外侧核的外侧;雄性大鼠5-HT2A、5-HT7受体在Onuf核的表达明显强于雌性大鼠.免疫荧光双标记显示5-HT2A受体的免疫标记主要分布于支配IC的运动神经元周围,5-HT7受体主要分布于支配EUS的运动神经元.结论:5-HT2A、5-HT7受体不均匀分布在Onuf核支配不同的盆底横纹肌的运动神经元.5-HT2A受体可能主要参与性反射的调节,5-HT7受体则可能主要参与泌尿反射的调控.     

新生期母婴分离对大鼠成年后结直肠扩张后5-羟色胺表达的影响

[目的]观察新生期母婴分离对大鼠成年后结直肠扩张后结肠中5-羟色胺(5-HT)阳性细胞数目的影响,探索肠易激综合征发病的神经机理.[方法]雄性新生SD大鼠随机分为母婴分离组:出生后第2～21天给予每天母婴分离3 h;对照组:出生后第2～21天不给予任何处理.成年后给予结直肠扩张,取远端结肠进行5-HT免疫组化检测并定量分析.[结果]基础水平时,母婴分离组结肠粘膜5-HT阳性细胞数目和对照组没有统计学差别(288.1±26.8vs286.9±87.4,P=0.966);结直肠扩张后,母婴分离组5-HT阳性细胞数目显著增加,对照组没有改变,两组比较有统计学差别(386.8±38.0vs291.0±62.4,P=0.001).[结论]新生期母婴分离使成年大鼠结直肠扩张时结肠粘膜5-HT阳性细胞数目显著增加,提示早期负性生活事件可增强成年后对内脏伤害性刺激的神经反应,这可能在IBS结肠运动和感觉异常的机制中起作用.     

替加色罗抑制内脏高敏大鼠直肠扩张反应和脊髓神经元性一氧化氮合酶的表达

目的:观察应用5-HT4受体部分激动剂替加色罗(tegaserod)对大鼠直肠扩张反应的影响和脊髓神经元性一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化,探讨替加色罗对内脏感觉的影响机制.方法:应用新生大鼠(生后第8～21天)醋酸灌肠建立慢性内脏高敏模型为H组;生理盐水灌肠为C组.H组又分为H-saline、H-vehicle、H-Teg 0.1、H-Teg 0.3和H-Teg 1.0组;C组分为C-saline和C-Teg 1.0组.H-saline和C-saline组腹腔注射生理盐水,H-vehicle组注射溶剂 蒸馏水,H-Teg0.1、H-Teg0.3和H-Teg 1.0组分别注射替加色罗0.1 mg/k、0.3 mg/kg、1.0 mg/kg,C-Teg1.0组注射替加色罗1.0 mg/kg,10 min后直肠扩张观察腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),并用NADPH-d黄递酶法观察腰骶髓(L6～S1)nNOS的表达.结果:替加色罗明显抑制高敏组AWR,但在对照组的作用不明显.1.2 mL扩张时,替加色罗(1.0 mg/kg)使高敏组AWR积分低于对照组AWR积分.替加色罗(1.0 mg/kg)可以明显减少高敏组脊髓nNOS阳性细胞总数(减为H-saline的40%,P<0.01),在背角nNOS减少的最明显(为H-saline的31%).替加色罗(0.1 mg/kg)不影响脊髓nNOS总数,但可以使中央管区nNOS减为H-saline的79%(P<0.01).结论:替加色罗可抑制内脏高敏大鼠直肠扩张反应,并呈剂量依赖性减少腰骶髓nNOS的表达,尤其是在脊髓背角和中央管区作用更明显,提示脊髓nNOS可能参与了替加色罗对内脏敏感性的调节作用.     

5-羟色胺系统在肠易激综合征内脏感觉过敏机制中的作用研究

目的:研究检测5-羟色胺(5-HT)系统在脑-肠轴上的表达,探索肠易激综合征内脏感觉过敏的神经机制。方法:将新生期SD雄性大鼠随机分为两组,母婴分离组(实验组),在出生后第2～21天,每天将新生大鼠与哺乳期母鼠分离3 h;对照组在出生后第2～21天,不给予任何处理。成年后(出生后60 d)进行结直肠球囊扩张(Colorectal distcnsion,CRD),用免疫组化方法检测脊髓背角、脑干中缝背核5-HT神经元的表达和分布。结果:母婴分离组CRD后中缝背核5-HT免疫反应阳性细胞的数量为(40.67±4.73)个,脊髓背角5-HT免疫反应阳性细胞的数量为(20.67±2.08)个,均较对照组显著增加,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:新生期母婴分离引起大鼠5-HT系统在中枢改变,提示早期生活事件所致5-HT系统的异常可能在肠易激综合征内脏感觉过敏发生机制中起重要作用。     

糖尿病周围神经痛大鼠脊髓背角JNK水平的变化

目的 通过建立糖尿病大鼠模型,探讨糖尿病周围神经痛大鼠脊髓背角JNK的水平.方法 雄性SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病变模型,随机分为空白对照组(C组)、糖尿病对照组(DC组)和糖尿病周围神经痛组(D组)(n=6).各组分别在注射前、注射后4、6及8周后测定机械缩足反射阈值(MWT)并行脊髓背角p-JNK免疫组织化学检测.结果 D组及DC组大鼠注射STZ后4周机械痛敏形成,并维持至本实验观察时间终点注射STZ后8周.与注射STZ前及C组大鼠MWT比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).D组大鼠注射STZ4周时,脊髓背角磷酸化INK免疫反应阳性细胞数增加,注射STZ后6周及8周,脊髓背角磷酸化TNK免疫反应阳性细胞数增加增加明显,与注射STZ前及C组大鼠比较差异均有统计学意义(P＜00.05).结论 糖尿病周围神经痛大鼠脊髓背角JNK的激活,可能参与糖尿病周围神经痛的发生与发展.     

脊髓5-HT3受体激活对大鼠伤害性行为的双向调节作用

目的探讨脊髓5-HT3受体对大鼠伤害性行为反应的影响。方法采用鞘内给予受体特异性激动剂和拮抗剂,观察动物给药前后对辐射热产生缩爪反应潜伏期（HWL）的变化。结果鞘内注射5-HT3受体特异性激动剂2-甲基-5-羟色氨（2-m-5-HT）,浓度依赖性地延长HWL,该延长作用可被5-HT3受体拮抗剂ICS205930完全阻断;鞘内单独注射GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱（Bic）对动物的HWL无显著影响（P〉0.05）,但Bic和2-m-5-HT共同注射后,2-m-5-HT对HWL的延长作用不仅完全被阻断,而且动物的HWL较注射前显著缩短（P〈0.05）,该缩短作用也可被ICS20593完全阻断。结论脊髓5-HT3受体对伤害性信息具有双向调节作用,经GABAA受体介导抗伤害性效应,阻断GABAA受体后,激活5-HT3受体产生痛觉易化。     

甲磺酸卡莫司他降低急性应激大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos 表达

目的观察蛋白酶抑制剂（甲磺酸卡莫司他）对急性应激大鼠内脏敏感性的影响,探索肠道蛋白酶活性在急性应激引起内
脏高敏感性中的作用。方法采用急性束缚应激动物模型,在束缚应激前30 min口服甲磺酸卡莫司他或者生理盐水,观察大鼠
内脏敏感性变化、直肠粘膜和粪便中蛋白酶活性情况以及脊髓c-fos表达情况。结果口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后,大鼠
内脏敏感性均有降低,随着剂量的增加,内脏敏感性下降更明显,但是甲磺酸卡莫司他不能将急性应激大鼠组的内脏敏感性降
到应激前的水平。c-fos蛋白主要表达于脊髓背角浅层,口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后表达c-fos蛋白的阳性细胞数均减少
（P<0.05）。在30 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较应激对照组下降,有统计学差异（P<0.05）。随着蛋白酶抑制剂浓
度的增加,蛋白酶活性下降更为明显,在100 mg/kg和300 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较单纯应激组明显下降
（P<0.01）。结论肠道蛋白酶参与了急性应激大鼠内脏高敏感性,给予蛋白酶抑制剂后大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos表达降低。