神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达及电生理学特性的改变

目的 观察坐骨神经缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛后大鼠背根节神经元P2X3受体的表达和电生理学特性的变化.方法 应用免疫组化技术观察CCI后不同时间相应节段(L4、L5、L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化;全细胞膜片钳技术观察CCI后不同时间L4、L5、L6节段背根节神经元ATP反应电流的变化.结果 CCI后7、14 d,损伤同侧L4、L5、L6节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加,而且染色加深,相应节段的脊髓背角浅层P2X3免疫反应性亦明显增加.CCI后7、14 d,损伤同侧相应节段背根节产生ATP快反应电流的细胞数量明显增加,电流幅度亦增强.应用非选择性P2X受体拮抗剂Suramin能明显抑制ATP反应电流.结论 坐骨神经缩窄性损伤致神经痛后同侧对应节段的背根节神经元P2X3受体表达明显增加,ATP快反应电流明显增强.     

P2X嘌呤受体在初级伤害性感受中的作用

P2X嘌呤受体(P2X受体)为配体门控阳离子通道,可表达于与伤害性信息传递有关的初级传入神经元的胞体、中枢端和外周端. 在外周P2X受体参与对伤害性和非伤害性刺激的反应;在脊髓背角,表达于突触前背根神经节神经元上的P2X受体激活后可易化谷氨酸的释放,参与脊髓背角的突触可塑性变化. P2X3亚单位只高度选择性表达于感觉神经元,应用P2X3受体反义寡核苷酸、基因敲除技术和选择性拮抗剂A-317491的研究表明ATP和P2X3受体参与并调制伤害性信息的传递.     

P2X_3嘌呤受体在人胚胎DRG中的表达

目的：研究P2X3嘌呤受体在人胚胎发育中的表达。方法：收集10例不同月龄时期的胎儿,分别取L4~6背根神经节（DRG）,应用免疫组织化学的染色方法和图像分析技术,观察在5~9个月的人胚胎DRG中P2X3嘌呤受体的表达变化。结果：在5个月的人胚胎DRG中几乎所有的神经元细胞是小神经元,全部表达P2X3受体阳性,在6~7个月的人胚胎DRG中,开始出现中型神经元细胞,8~9个月的人胚胎DRG中开始出现少量的大型神经元细胞,而P2X3阳性产物主要见于小神经元细胞,所以5~9个月的人胚胎DRG中P2X3阳性细胞的数量呈下降趋势,各月龄之间相比有显著性差异（P〈0.01）。结论：P2X3嘌呤受体与胚胎时期神经系统的发育有关。     

Zn2+对大鼠不同自主神经节分离神经元P2X受体介导ATP诱导电流的调制作用

目的:在大鼠颈上交感神经节(SCG)、结状神经节(NG)和耳副交感神经节(OTG)分离的神经元上,分别比较了Zn2+对P2X受体介导ATP诱导电流的调制作用.方法:用全细胞膜片钳技术观察Zn2+对以上3种大鼠自主神经节分离神经元ATP/αβ-me ATP诱导电流的调制作用.结果:在SCG的所有神经元上,ATP可以诱发一个缓慢型电流,同时给予Zn2+(10μmol/L)可以使其反应增大至(1 442±34)％,而αβ-me ATP没有此作用.在NG的所有神经元上,ATP和αβ-me ATP可以诱发一个类似的缓慢型电流,同时给予Zn2+可以使其反应分别增大至(180±12)％和(262±28)％.在OTG的所有神经元上,ATP可以诱发一个类似的缓慢型电流,同时给予Zn2+(10 μmol/L),对ATP(10 μmol/L)诱发的电流无明显影响;如果将ATP浓度提高至30 μmol/L,同样浓度的Zn2+(10μmol/L)可以抑制ATP电流,而且随着Zn2+浓度的增高(10、100 μmol/L),其抑制作用逐渐增强;如果先给予TNP-ATP(100 nmol/L)阻断电流至未给予TNP-ATP组的(26±2)％,再给予Zn2+(10μmol/L)后,剩余的ATP电流为单独给予TNP ATP的(127±9)％;αβ-me ATP也可以诱发一个类似的缓慢型电流,同时给予Zn2+(10 μmol/L)可使其反应增大至(146±5)％;Zn2+(300μmol/L)对ATP和αβme ATP(30 μmol/L)诱发电流的激活和失活时间常数均无明显影响.结论:(1)Zn2+对P2X受体具有变构性的调节作用,它可以增强大鼠SCG和NG上由P2X2和P2X2/3受体介导的缓慢型电流.(2)大鼠OTG上主要表达P2X2/3和少量P2X2受体,但Zn2+对ATP诱导的电流有轻度抑制作用,提示OTG可能存在着P2X受体家族的新亚型.     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

坐骨神经压迫性损伤大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察背根神经节P2X_3受体在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)后表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法24只雄性SD大鼠随机分成假手术组(S组)、坐骨神经结扎组(CCI组),各组分别均分为D7组和D14组,分别在各自的时间点灌注取材L_(4～5)背根神经节,用免疫组织化学方法观察P2X_3受体表达的变化。结果CCI组术侧背根神经节P2X_3阳性神经元数目明显增加,与S组相比,差异有统计学意义(P<0.05);非术侧与S组相比则无统计学差异(P>0.05)。结论坐骨神经损伤后背根神经节P2X_3受体的激活与神经性疼痛的病理过程密切相关。     

大鼠坐骨神经损伤后DRG神经元P2X3受体表达的变化

目的 应用免疫组织化学技术,探讨大鼠坐骨神经损伤后不同时间段L4～L5节段DRG神经元P2X3受体表达的变化.方法 实验动物分为对照组、损伤2d组和损伤7d组,分别建立大鼠坐骨神经离断模型,在2d、7d后按照组化方法常规取材、切片、染色,观察坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达的变化.结果 对照组、损伤2d组、损伤7d组DRG神经元P2X3受体阳性神经元百分比率分别为31.73%、35.26%、42.93%.坐骨神经损伤2d后DRG神经元P2X3受体表达差异无统计学意义(P＞0.05);而坐骨神经损伤7d后DRG神经元P2X3受体表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达发生了不同的变化.     

P2X7受体和肾脏疾病

P2X7受体是三磷酸腺苷(ATP)门控阳离子通道受体,是嘌呤受体P2X家族受体亚型之一。P2X7受体信号通路与IL-1β、IL-6、COX-2等多种炎症因子的生成和释放相关,在多种疾病的发病过程中起到了至关重要的作用。目前以此受体为治疗靶点的P2X7受体拮抗剂已进入临床试验阶段,表现出良好的安全性和疗效。最新研究表明P2X7受体与多种肾脏疾病有关,P2X7受体拮抗剂具有潜在的肾脏疾病治疗作用。本文综述P2X7受体在肾脏疾病中的作用及其可能的作用机制,以期为肾脏疾病治疗的新靶点和新策略提供理论依据。     

实验性牙齿移动中TG内P2X3受体的表达变化

目的: 研究正畸牙移动中加力后P2X3受体在三叉神经节的表达变化规律,以探讨P2X3受体在正畸牙移动疼痛机制中的作用. 方法: 以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,应用免疫组织化学手段进行研究. 结果: 大鼠牙齿加力后,观察到三叉神经节神经元P2X3受体免疫反应阳性率增高,并呈现一定的时间规律:实验后1 d开始出现变化,实验后3 d达高峰,14 d后下降至与对照组基本一致. 结论: 大鼠牙移动过程中,三叉神经节内(TG)的P2X3受体表达变化是一过性变化,呈现短时上调的规律,时间与正畸牙移动疼痛时间一致.     

大鼠DRG上的P2X3受体在介导外周伤害刺激引起疼痛的作用机制研究

目的探讨P2X3受体在介导外周伤害刺激引起疼痛的作用及作用机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为A、Β、C、D、E组,每组6只。分组：A组正常对照组足底注射生理盐水;B组大鼠足底注射P2X3受体激动剂ATP;C组大鼠足底注射P2X3受体强效激动剂α、β-meATP;D组大鼠足底注射P2X3受体强效激动剂和P2X3受体拮抗剂α、β-meATP＋TNP-ATP,E组大鼠足底注射P2X3受体激动剂和P2X3受体拮抗剂ATP＋TNP-ATP,观察缩脚次数,每5 min作为一个观察单位持续观察一个小时,大鼠DRG急性分离。采用免疫组化的方法分别测定每组DRG上P2X3受体。结果1、大鼠足底注射生理盐水未出现伤害性行为学反应。而ATP、α、β-meATP组大鼠左足底注射约5 min左右出现明显的伤害性行为反应如咬尾、摆尾及缩脚,α、β-meATP组最为明显。两组缩脚次数有显著差异性P〈0.05。而应用抑制剂之后缩脚次数明显减少,A组和D组相比P〈0.05,A组和E组相比P〈0.01。D、E组相比P〈0.05。2、DRG的P2X3受体表达：P2X3在DRG中小神经元细胞的胞体,α、β-meATP组阳性细胞数表达显著占46%、ATP组占35%,生理盐水占28%,TNP-ATP占20%。α、β-meATP组胞浆呈棕褐色,而ATP组胞浆呈棕黄色。A和B组阳性细胞数差异性显著P〈0.05,α、β-meATP组与α、β-meATP-TNP＋ATP组相比阳性细胞数有显著差异P〈0.01。结论DRG上P2X3受体在介导感觉神经的伤害性信息的传递中起重要作用。     

部分膀胱出口梗阻后P2X1嘌呤受体在膀胱的表达

目的: 观察慢性膀胱出口梗阻后P2X1受体的表达水平.方法: 雌性Wistar大鼠70只,体质量250～300 g,40只为实验组,30只同龄雌性Wistar大鼠为对照组.在部分膀胱出口梗阻的动物模型成功建立后8 wk开始试验,采用免疫组织化学方法结合IMAGE-PRO图像处理软件对大鼠膀胱P2X1的表达(即阳性颗粒在某个视野下所占的百分比)进行定量研究.结果: 部分膀胱出口梗阻后大鼠较对照组大鼠膀胱的体积增大,黏膜层增厚,P2X1受体的表达水平平均为在膀胱平滑肌层[(9.60±4.78) vs (2.31±1.19)] (P<0.01),在膀胱黏膜层[(0.12±0.03) vs (0.06±0.02)] (P<0.01),浆膜层[(0.04±0.02) vs (0.03±0.01)] (P>0.05),尿道[(6.05±2.25) vs (1.48±0.14)] (P<0.01),慢性膀胱出口梗阻后P2X1受体的表达水平均明显高于对照组.结论: 膀胱出口部分梗阻后,P2X1受体在膀胱各个部位表达均升高.推测P2X1可能参与了慢性膀胱出口梗阻后膀胱的生理或病理功能的调节.     

右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓P2X3和P2X4受体表达的影响

摘要：目的  探讨右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓P2X3和P2X4受体表达的影响。方法  60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、神经病理性痛组（NP组）和右美托咪定干预组（DI组）,复制神经病理性痛大鼠模型。于模型复制即刻,DI组大鼠腹腔注射40μg/kg右美托咪定,间隔24 h给药1次,连续进行至模型复制成功后14 d,Sham组和NP组给予等量生理盐水腹腔注射。分别于复制模型前（T0）、复制模型后24 h（T1）、72 h（T2）、7 d（T3）和14 d（T4）,对大鼠机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）进行测定。Western blot检测大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白的表达。结果  与Sham组比较,NP组和DI组大鼠T1、T2、T3、T4时MWT和TWL降低;与NP组比较,DI组大鼠T2、T3、T4时MWT和TWL升高,差异有统计学意义（P <0.05）。与Sham组比较,NP组大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白升高;与NP组相比,DI组大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白降低,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  右美托咪定可有效改善神经病理性痛大鼠痛觉过敏症状,可能与抑制脊髓中P2X3和P2X4受体蛋白的表达有关。

     

小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠的镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响

【 目的 观测腹腔注射小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响,以探讨其在神经性疼痛中的作用。方法 大鼠随机分为4组：空白对照组(C组)、假手术组(S组)、腹腔注射生理盐水组(NS组)与氯胺酮组(K组),每组8只。在大鼠右后足检测冷刺激反应、热痛敏阈基础值后,腹腔注射10%水合氯醛400 mg∕kg进行麻醉。NS组和K组构建大鼠右侧坐骨神经慢性结扎损伤模型,S组暴露坐骨神经但不结扎,C组不进行手术。手术后K组每天上午10时腹腔注射10mg·kg-1氯胺酮(用生理盐水稀释至0.5ml),NS组则腹腔注射等量生理盐水,连续2周。14d后测定各组大鼠右后足冷刺激反应、热痛敏阈值。尔后各组取手术侧L4背根神经节,并采用免疫组化法观测P2X3受体的表达。结果 手术后14 d,NS组和K组大鼠右足热痛敏阈值均明显低于C组和S组（P<0.05）,冷刺激反应则显著高于C组和S组（P<0.05）;但K组大鼠右足热痛敏阈值明显高于NS组,而冷刺激反应明显低于NS组(P<0.05);NS组和 K组大鼠背根神经节P2X3受体免疫反应阳性细胞数量多于C组和S组,但K组显著少于NS组比较则明显降低(P<0.05);NS组与S组大鼠背根神经节神经元P2X3受体免疫组化评分高于C组和S组,而K组却低于NS组,(P<0.05)。结论 腹腔注射小剂量氯胺酮可提高慢性神经性疼痛大鼠痛敏阈值及减弱冷刺激反应,其作用机制可能与减少背根神经节神经元P2X3受体表达有关。 【关键词】背根神经节 神经痛 氯胺酮 三磷酸腺苷 P2X3     

人膀胱组织中P2X受体亚型表达的实验研究

目的:检测正常儿膀胱颈部和顶部的P2X受体亚型mRNA的表达情况,并探讨其临床意义。方法:提取正常儿膀胱颈部和顶部的总mRNA,以β-actin为内参照,采用RT-PCR方法检测P2X受体各亚型mRNA在膀胱中的表达情况。结果:膀胱颈部和顶部均发现了P2X受体的7种亚型mRNA表达。颈部及顶部受体亚型的表达水平顺序分别为:P2X7>P2X1>P2X4>P2X3>P2X2>P2X5>P2X6和P2X4>P2X2>P2X1>P2X3>P2X7>P2X5>P2X6。结论:正常儿膀胱内有P2X受体的7种亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对膀胱感觉和运动功能的调节作用具有深入研究的价值。     

正常大鼠逼尿肌P2X受体亚型mRNA表达的实验研究

目的研究正常大鼠逼肌P2X受体亚型的表达情况.方法提取大鼠逼尿肌组织总mRNA,并以脑组织作为阳性对照,行RT-PCR,反应所得产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色(EB)观察,照相.结果在大鼠逼尿肌上发现了6种P2X受体亚型的mRNA表达,其中P2X1相对表达较高,而P2X6不表达.脑组织中7种P2X受体亚型均有表达.结论正常大鼠逼尿肌内有6种P2X受体亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对逼尿肌舒缩功能的调节作用具有深入研究的价值.     

结肠扩张刺激对肠易激综合征大鼠DCN核团及骶髓后角中P2X4及P2X7受体表达的影响

目的观察肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)致内脏高敏感化大鼠在结肠扩张刺激时大鼠腹直肌肌电变化,并观察骶髓后联合核(dorsal commissural nucleus,DCN)和脊髓后角中P2X4和P2X7受体表达的变化情况,为探讨IBS内脏敏化的神经机制提供理论依据。方法以旋毛虫感染大鼠建立IBS大鼠模型,并以正常大鼠作为对照,实验共分4组:正常大鼠无刺激组,正常大鼠结肠扩张刺激组,IBS大鼠无刺激组,IBS大鼠结肠扩张刺激组。采用免疫组织荧光化学方法,将P2X4和P2X7受体分别标记,观察其在骶髓后角及DCN核团上的表达变化,并同步测定大鼠腹直肌肌电变化。结果 IBS结肠刺激组大鼠腹直肌肌电变化、大鼠骶髓后角及DCN核团中的P2X4和P2X7受体表达较正常大鼠对照组及IBS未刺激组均显著增强。结论 P2X4和P2X7受体可能是IBS致内脏敏感性增高的重要因素。     

家兔疑核内P2X受体在急性低氧中的作用

目的研究疑核(nucleus ambiguous，NA)处P2X受体在急性低氧中的作用。方法实验采用电生理和微量注射相结合的方法，以膈神经放电为观察指标，观察呼吸变化。通过吸入10％氧气(10％O₂，90％N₂)引导出低氧外周化学感受性反射。在NA处分别微量注射P2X受体的激动剂三磷酸腺苷（ATP）和阻断剂磷酸吡哆醛（PPADS），观察这些药物对急性低氧呼吸的影响。结果 吸入低氧混合气后，动物呼吸加深加快；在NA处微量注射ATP增强了急性低氧呼吸频率，微量注射PPADS部分阻断了ATP对低氧通气的兴奋效应。结论NA处P2X受体对急性低氧通气反应具有一定的调节作用。     

中枢神经系统P2X_7受体的结构与功能

中枢神经系统P2X7受体是参与介导胶质细胞和神经元通讯过程的关键介质,激活后可促进促炎因子、谷氨酸及ATP等物质的释放,参与多种炎症及神经损伤所导致的慢性疾病的发生。P2X7受体大量表达在胶质细胞,且在病理性疼痛的发生中起着非常重要的调节作用。现从其结构及药理学特性等方面,分析胶质细胞P2X7受体在介导病理性疼痛发生、发展中的重要作用。     

大鼠脊髓损伤后尿动力学改变及P2X3表达的研究

目的探讨大鼠不同平面脊髓损伤(SCI)造成神经源性膀胱后尿动力学,和P2X3的表达情况。方法成年健康SD雌性大鼠52只,将其随机分为正常组、骶上脊髓损伤组、骶下脊髓损伤组。采用脊横断法制备大鼠神经源性膀胱模型。四周后行尿流动力学检查,免疫组化法和Western blotting检测P2X3表达情况。结果骶上脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组显著降低;骶上脊髓损伤组组P2X3表达较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组P2X2表达较对照组明显降低。结论尿流动力学检查为神经源性膀胱的早期诊断及选择个体化治疗方案提供了一种有效的检查手段。骶上脊髓损伤组组为逼尿肌反射亢进,骶下脊髓损伤组组为逼尿肌反射无力,膀胱逼尿肌P2X3表达增高可能是逼尿肌反射亢进机制之一。