糖尿病对大鼠种植体周围OPG和RANKL表达的影响

建立糖尿病大鼠实验动物模型成功后,将大鼠分为糖尿病种植组（T组）,糖尿病对照组（T0组）,正常种植组（C组）,正常对照组（C0组）。T组及C组的胫骨近骺端种植纯钛种植体,分别于植入后1、2周处死动物,采用免疫组化和实时定量PCR方法检测种植体周围骨组织中骨保护因子（OPG）和破骨细胞核因子kB受体活化因子配体（RANKL）的表达。结果OPG和RANKL表达在骨基质、成骨细胞及骨髓基质细胞中,T、C组阳性信号增强,髓腔内更加明显;T、T0组大鼠皮质骨孔隙明显多于C、C0组。T、C组第1、2周OPG均较C0组增加,T组第2周比T0组增加;T组第1、2周RANKL均比C0、T0组增加（p均〈0．05）。提示糖尿病可能通过OPG和RANKL通路使种植体植入周围骨组织中破骨细胞的形成增加,削弱了糖尿病种植体与周围骨组织的骨整合。     

OPG/RANK/RANKL通路在骨质疏松与动脉粥样硬化相关性中的作用机制研究进展

骨质疏松和动脉粥样硬化是伴随老年患者的常见疾病,发病率高,并发症多,是死亡率增加的主要危险因素。随着患者年龄的增加,二者的临床联系也越来越紧密。OPG/RANK/RANKL通路是近年来研究的热点,是骨质疏松研究史上里程碑式的发现。近年来逐渐认识到这种信号传导途径在动脉粥样硬化中同样起着不可估量的作用,研究者对该通路与动脉粥样硬化之间进行了潜在而广泛的研究。本文就OPG/RANK/RANKL通路作为它们之间联系的桥梁,初步探讨共同的发病机制及临床联系,为临床工作中以这些分子作为靶点设计和药物制备提供进一步的综合理念。     

丹蓝仙硼疗氟胶囊对氟中毒大鼠骨保护素/核因子κβ受体活化因子配体/核因子κβ受体活化因子系统表达水平的影响

目的 观察慢性氟中毒大鼠骨组织中骨保护素(OPG)、核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)、核因子κβ受体活化因子(RANK)蛋白表达水平,探讨OPG/RAN KL/RANK系统与慢性氟中毒大鼠骨骼损伤的关系及丹蓝仙硼疗氟胶囊的拮抗作用.方法 将SD大鼠按体质量随机分为6组(组内雌雄各半):氟中毒组、高剂量药物组、中剂量药物组、低剂量药物组、对照组、硼砂(阳性药物对照)组,每组12只.对照组饮用自来水,其余5个实验组饮用含氟水(50 mg/L),而高、中、低剂量药物组另摄入丹蓝仙硼疗氟胶囊,剂量分别为0.8、O.4、O.2 g/kg,硼砂组另摄入硼砂,剂量为0.8 g/kg.6个月时用免疫组织化学方法检测OPG、RANKL、RANK蛋白在大鼠股骨干骺端的表达.结果 与对照组(173.79±5.23、174.17±5.O1、155.63±7.11)比较,氟中毒组大鼠股骨干骺端OPG、RANKL(156.83±5.80、157.74±6.70)表达增高,RANK(173.92±4.37)表达降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).与氟中毒组比较,高、中剂量药物组OPG、RANKL(169.67±5.07、168.08±5.05,170.78±5.01、168.41±7.19)表达降低,RANK(162.12±4.24、166.69±5.78)表达增高,差异有统计学意义(P均＜O.05).与硼砂组(167.27±4.08、167.85±5.O1、166.14±3.95)比较,低剂量药物组OPG、RANKL(163.40±4.11、159.49±5.78)表达增高,RANK(171.54±8.06)表达降低,而高剂量药物组RANK(162.12±4.24)表达增高,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 慢性氟中毒可引起成骨与破骨活动均增强的骨转换增高状态,并可通过改变OPG/RANKL/RANK系统表达影响骨吸收的程度.丹蓝仙硼疗氟胶囊能通过OPG/RANKL/RANK系统影响骨重建,对氟致骨损伤有拮抗作用.     

雌二醇对成骨细胞OPG和RANKL的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)作用下体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及雌激素治疗骨质疏松的机制。方法采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2刺激培养的大鼠成骨细胞(OB),RT-PCR方法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果原代OB呈多角形、梭形,传代OB胞核较大,细胞质内见黑色颗粒,细胞形态为多角形或梭形,见突起,三代细胞碱性磷酸酶染色阳性,胞质见大量灰黑色颗粒,细胞鉴定符合成骨细胞特征。不同浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2对OB OPG mRNA表达具有显著的增强作用(P<0.05),其中10-8mol/L 17β-E2对OB OPG mRNA表达最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而10-10mol/L 17β-E2对成骨细胞OPG mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无显著差异(P>0.05),10-10、10-9、10-7mol/L 17β-E2对成OB RANKL mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无明显差异(P>0.05),其中10-8mol/L17β-E2对OB RANKL mRNA的表达具有明显的抑制作用,其与对照组比较差异明显(P<0.05)。结论雌激素治疗骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞OPG表达、抑制RANKL表达相关。     

氟对小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响。方法分离小鼠乳鼠成骨细胞，取第3代成骨细胞，分别培养于含有矿化液（维生素C50mg／L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、地塞米松10^-7md／L）和不含矿化液的L-DMEM培养基中，按染氟剂量[F-终剂量为0（对照组）、1、10、100、1000、10000、20000μg／L]分组，染氟72h后，提取细胞总RNA，通过反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）方法，观察含矿化液和不含矿化液情况下培养的成骨细胞在不同染氟剂量下RANKLmRNA表达的变化。结果与对照组比较，非矿化染氟（不含矿化液）1000μg/L组RANKLmRNA表达升高（P〈0．01），10000μg／L组RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）；与对照组比较，矿化染氟100、1000μg／L组RANKLmRNA表达升高（P〈0.01）；相同染氟剂量，矿化染氟0、1、10、100、1000、10000μg／L组与非矿化染氟组比较，RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）。结论染氟可以影响成骨细胞表达RANKLmRNA；同等染氟剂量下，矿化处理可降低成骨细胞RANKLmRNA表达。     

RANKL／RANK／OPG系统在类风湿性关节炎骨质疏松中的研究进展

由细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）、细胞核因子KB受体活化因子（RANK）和护骨素（OPG）组成的RANKL／RANK／OPG系统是近些年来发现并且研究愈趋热门的一个在骨调节上发挥重要作用的系统。     

慢阻肺合并骨质疏松患者血清IL-31、IL-33水平与OPG/RANK/RANKL系统相关性研究

目的 探讨血清白细胞介素31(IL-31)、白细胞介素33(IL-33)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并骨质疏松患者中的表达情况及与骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)系统的关联性。方法 收集2019年6月～2023年1月于惠州市第一人民医院就诊的男性稳定期COPD患者90例为COPD组,并纳入同期健康体检者45例为对照组。COPD组患者根据骨密度检测结果,分为非骨质疏松组(n=49)和骨质疏松组(n=41)。测定病例组、对照组入组当天血清IL-31、IL-33、OPG及RANKL水平。结果 (1)相比正常对照组,COPD组患者血清IL-31、RANKL水平及RANKL/OPG比值明显升高,而血清IL-33水平明显下降(均P<0.05);(2)与COPD非骨质疏松组患者相比,骨质疏松组血清IL-31、RANKL水平及RANKL/OPG比值显著升高,而血清IL-33水平、体重指数(BMI)、骨密度及FEV₁(%)、FEV₁/FVC(%)明显降低(均P<0.05);(3) COPD患者骨...     

运动训练对老年大鼠骨质疏松及RANK/RANKL/OPG信号通路的影响

目的 研究运动训练对老年大鼠骨质疏松及核转录因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)/RANK配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的影响。方法 16只24月龄雄性SD大鼠随机分为模型组和运动组,每组8只,采用自然衰老的方法复制老年骨质疏松动物模型。另随机挑选8只3月龄雄性SD大鼠为青年组。运动组进行8 w跑台运动训练。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清骨代谢指标[Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(NTX-Ⅰ)];双能X线检测骨密度;显微CT(Micro-CT)检测骨微结构;分别应用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹技术测定左股骨组织中RANK、RANKL、OPG mRNA和蛋白表达水平。结果 与青年组比较,模型组血清NTX-Ⅰ、CTX-Ⅰ、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达升高,PICP、PINP、OPG mRNA及蛋白表达降低,右股骨和腰椎骨密度降低,右胫骨和第5腰椎的骨体积分数、骨小梁数量减少,骨小梁间隔增宽,差异有统计学意义(P<...     

降钙素基因相关肽对维甲酸致老年骨质疏松大鼠OPG/RANKL信号通路的影响及疗效

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对维甲酸致老年骨质疏松大鼠骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路的影响及疗效。方法 72只15月龄雄性SD大鼠随机分为对照组、维甲酸组、CGRP组和CGRP8-37(CGRP拮抗剂)组,每组18只;后3组用维甲酸80 mg·kg-1·d-1灌胃,1次/d,连续灌胃2 w。维甲酸组腹腔注射生理盐水1 ml,1次/d,6次/w;CGRP组腹腔注射1 ml CGRP(30μg/kg),1次/d,6次/w;CGRP8-37组先腹腔内注射1 ml CGRP8-37(30μg/kg),再向腹腔内注射1 ml CGRP(30μg/kg),1次,6次/w;以上各组均干预2 w。采用双能X射线骨密度仪检测大鼠股骨骨密度(BMD);比较各组血清白细胞介素(IL)-6、IL-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、OPG和RANKL水平;RTPCR法检测各组大鼠骨组织OPG mRNA和RANKL mRNA表达。结果与对照组比较,维甲酸组大鼠左、右股骨BMD明显降低(P0.05);与维甲酸组比较,CGRP组大鼠左、右股骨BMD均显著升高(P0.05);而CGRP8-37组大鼠左、右股骨BMD均明显低于CGRP组(P0.05)。与对照组比较,维甲酸组大鼠血清OPG水平和骨组织OPG mRNA表达明显下降,而血清RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA表达明显升高(P0.01);与维甲酸组比较,CGRP组大鼠血清OPG和骨组织OPG mRNA明显升高,而血清RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA表达显著降低(P0.01);CGRP8-37组大鼠血清OPG水平和骨组织OPG mRNA明显低于CGRP组,而血清RANKL、IL1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA显著高于CGRP组(P0.01)。结论降钙素基因相关肽可明显提高维甲酸老年骨质疏松大鼠股骨BMD,其作用可能与抑制机体IL-1、IL-6、TNF-α水平从而调节OPG/RANKL平衡有关。     

维持性血液透析患者血清RANKL、OPG及FGF21与冠状动脉钙化的关系

目的 探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清核因子NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth...     

脂联素调控人成骨细胞OPG/RANKL表达的信号转导机制

目的 研究脂联素调控人成骨细胞护骨素(OPG)和NF-кB受体活化凶子配体(RANKL)表达的作用机制.方法 人成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达以实时PCR检测,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平用Western印迹法检测.廊用小分子RNA干扰技术(siRNA)阻断脂联素受体(AdR)表达,并以p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)干预,以观察脂联素对人成骨细胞OPG/RANKL作用的调节机制.结果 用siRNA沉默AdRl的表达可消除脂联素促进人成骨细胞RANKL表达和抑制OPG表达的作用;脂联素干预前予SB203580阻断p38 MAPK后,也可消除脂联素对成骨细胞RANKL和OPG的作用,而SP600125并无作用.结论 在人成骨细胞中,脂联素通过AdR1/p38 MARK途径促进RANKL表达和抑制OPG的表达.     

血液透析患者骨保护素细胞核因子кB受体活化因子配体与动脉僵硬度的关系

目的探讨血液透析患者颈-股脉搏波速度(CFPWV)和颈-桡脉搏波速度(CRPWV)的变化及与骨保护素(OPG)、细胞核因子кB受体活化因子配体(sRANKL)系统的关系。方法对北京大学人民医院血液净化中心2006年6—10月40例血液透析患者采用酶联免疫吸附法测定血清OPG、sRANKL,PWV测定仪测定外周动脉僵硬度,X线平片检测腹主动脉、股动脉及桡动脉部位血管钙化,计算血管钙化积分。结果 25例(64.1%)患者存在不同程度的血管钙化,中重度钙化者较轻度钙化者血清OPG高[(342.50±171.53)ng/L对(206.21±137.88)ng/L,P=0.025]、OPG/sRANKL比值高(454.65±455.63比135.31±136.81,P=0.035),sRANKL比较差异无统计学意义[(0.10±0.08)pmol/L对(0.12±0.08)pmol/L]。血液透析患者CRPWV及CFPWV均较对照组增高,差异有统计学意义[(9.48±1.80)m/s对(8.58±1.29)m/s,P=0.043]和[(13.42±3.26)m/s对(10.07±1.76)m/s,P<0.01]。血OPG较对照组高[(235.12±154.33)ng/L对(93.00±44.10)ng/L,P=0.01],sRANKL两组比较,差异无统计学意义[(0.12±0.08)pmol/L对(0.16±0.08)pmol/L]。相关分析发现CRPWV与舒张压、sRANKL呈正相关(r=0.389、0.349,P=0.025、0.040),控制年龄、血压因素后CRPWV仍然与sRANKL呈正相关(r=0.381,P=0.029)。多元线性回归分析显示血磷、sRANKL及钙磷乘积是CRPWV的独立影响因素,年龄是CFPWV的独立影响因素。结论血液透析患者外周动脉僵硬度增加,sRANKL独立于年龄和血压影响血液透析患者动脉僵硬度。     

冠心病患者血清OPG、sRANKL变化与冠脉病变程度的关系

目的探讨冠心病（CHD）患者血清骨保护素（OPG）、可溶性核因子κB受体活化因子配基（sRANKL）水平与冠脉病变程度的关系。方法选择心内科就诊患者80例,冠脉造影显示CHD 53例,其中单支病变组9例、双支病变组17例、多支病变组27例,正常对照组27例;采用ELLSA法检测各组血清OPG、sRANKL,并分析血清OPG、sRANKL水平与冠脉病变程度的相关性。结果与对照组比较,CHD患者血清OPG明显升高,且随冠脉病变程度增加而逐渐升高（P〈0.05）;血清sRANKL明显降低,且随冠脉病变程度增加而逐渐降低（P〈0.05）。结论CHD患者血清OPG升高、sRANKL降低,二者可作为CHD的预测因子,血清OPG水平与冠脉病变程度有关。     

阿托伐他汀钙对原代成骨细胞OPG、RANKL、M—CSF基因表达的影响

目的观察不同浓度阿托伐他汀钙对体外培养原代成骨细胞增生和对OPG、RANKL、M—CSF基因表达的影响,探讨阿托伐他汀钙抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据。方法采用胰酶和I型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用差速贴壁法进行纯化。光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和I型胶原免疫组化SABC法对细胞进行鉴定。用不同浓度的阿托伐他汀钙（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6和10^-5mol／L）干预成骨细胞,在24、48和72h后,用实时荧光定量方法检测OPGmRNA、RANKLmRNA、M—CSFmRNA的表达水平。结果镜下观察显示细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角、多边、长梭等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及I型胶原免疫组化染色呈阳性。实时荧光定量PCR结果显示：不同浓度的阿托伐他汀钙（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）均可以促进OPGmRNA的表达,抑制RANKLmRNA的表达,对M—CSFmRNA基因的表达也具有促进作用,且与药物浓度及作用时间有关。结论采用胰酶和I型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,采用多次“差速贴壁法”可以获得数量多、纯度高且活性好的成骨细胞。阿托伐他汀钙可以促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达,抑制RANKL基因mRNA的表达,对M—CSF基因的表达也有一定的促进作用。     

低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响

目的 探讨低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠40只,体质量(118.9±13.5)g.采用2×2×2析因设计,将大鼠按体质量随机分为4组:对照组(常规饲料)、低钙组(低钙饲料)、高氟组(常规饲料+高氟饮水100 mg/L)和低钙高氟组(低钙饲料+高氟饮水100mg/L),每组10只.在喂养4和8个月时各处死5只大鼠,取大鼠脾脏,抽提脾组织中的总RNA,采用RT-PCR方法分析RANKLmRNA的表达.结果 4个月时对照组、低钙组、高氟组、低钙高氟组RANKLmRNA表达分别为0.13±0.05、0.13±0.03、0.17±0.02、0.27±0.05;8个月时分别为0.11±0.01、0.16±0.02、0.16±0.03、0.36±0.07.析因分析显示,低钙、高氟对RANKL mRNA表达有影响(F值分别为40.224、56.679,P均<0.05),作用时间对RANKL mRNA表达无影响(F=2.850,P>0.05);低钙高氟、低钙与作用时间对RANKLmRNA表达存在交互作用(F值分别为7.247、18.789,P均<0.05),高氟与作用时间对RANKL mRNA表达无交互作用(F=1.751,P>0.05).结论 低钙或高氟单独作用或低钙和高氟协同作用促进大鼠脾组织RANKLmRNA表达:低钙促进RANKL mRNA表达与作用时间有关,高氟促进RANKL mRNA表达不受作用时间影响.     

17β-雌二醇对人破骨样细胞RANK、CK mRNA表达的作用

目的　观察 17β 雌二醇 (17β E2 )对破骨样细胞破骨细胞分化因子受体 (RANK)和组织蛋白酶K (CK)mRNA表达的影响。方法　人巨细胞瘤组织经过滤、培养、洗涤、胰酶消化后再经孔径 2 5 μm微过滤网过滤 ,得到纯化的破骨样细胞 ,用RT PCR观察 17β E2 对人破骨样细胞CK及RANKmRNA表达的影响。结果　 (1)破骨样细胞具有成熟破骨细胞的表型特征 ,如抗酒石酸酸性磷酸酶和酸性磷酸酶染色阳性、具有溶骨作用 ,可表达CK和RANK ;(2 ) 17β E2 对人破骨样细胞RANKmRNA表达无明显影响 ,但下调CKmRNA表达 (P <0 .0 5 )。结论　破骨样细胞是进行破骨细胞研究的较好细胞来源 ;17β E2 可下调破骨样细胞CKmRNA表达。下调CK基因表达是绝经后雌激素补充治疗的药理机制之一。     

NF-κB对急性坏死性胰腺炎大鼠甲状旁腺激素受体表达和低钙血症的影响

目的 探讨NF-κB对ANP大鼠甲状旁腺激素受体(PTH1R)表达及低钙血症的影响.方法 将雄性SD大鼠24只按完全随机法分为对照组、ANP组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂预处理组(PDTC组),各8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型.观察6 h后各组血清钙浓度以及胰腺组织病理改变,蛋白免疫印渍法检测肾脏和骨组织NF-κB、PTH1R蛋白表达,RT-PCR检测肾脏和骨组织FTH1R mRNA表达.结果 对照组、ANP组和PDTC组血钙浓度分别为(2.31±0.03)mmol/L、(2.01±0.03)mmol/L和(2.12±0.05)mmol/L,3组间差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织的NF-κB蛋白表达量分别为1.53±0.08和0.47±0.19;PDTC组分别为0.61±0.13和0.36±0.06,两组差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织PTH1R mRNA的表达量分别为0.27±0.08和0.29±0.06,PTH1R蛋白表达分别为0.87±0.07和0.31±0.09;PDTC组分别为0.57±0.27和0.37±0.11,1.13±0.17和0.68±0.15,两组差异显著(P<0.05).ANP组NF-κB活性较对照组明显升高,PTH1R表达明显下降;与ANP组比较,PDTC组NF-κB活性降低,血清钙水平明显升高,PTH1R的表达上调(P<0.05).结论 NF-κB可能通过间接下调组织PTH1R的表达,致血清钙显著下降.PDTC对改善ANP低钙血症有一定意义.     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞护骨素、RANKL表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法用酶消化法分离24h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养。在培养液中加入不同浓度的淫羊藿甙(10~(10)～10~(14)mol/L),培养48h后,抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG和RANKL mRNA表达的变化。结果淫羊藿甙可明显促进成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,且呈浓度依赖性,均以10~(-7)mol/L时作用最显著(P＜0.05)。预先用淫羊藿甙干预成骨细胞,可逆转地塞米松的降低OPG mRNA(0.570±0.093vs 1.083±0.081)、升高RANKL mRNA(1.079±0.050vs 0.718±0.082)的作用(均P＜0.05)。结论淫羊藿甙可以上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从而调节骨吸收,这可能是淫羊藿甙防治骨质疏松症的重要机制之一。