诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生

目的研究诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生的最适条件。方法使用溶菌酶脱去细胞壁制备原生质体,并考察原生质体制备和再生的各种影响因素。结果确定了原生质体制备的条件:一级培养采用种子培养基,培养30 h,转种量的体积分数为5%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为32 h,最适甘氨酸质量浓度为6.0 g.L-1,最佳溶菌酶质量浓度为1.5 g.L-1,酶解时间为60 min,原生质体再生率达到5.3%。结论上述条件为活跃链霉菌原生质体制备与再生的最适条件,该条件的建立为活跃链霉菌原生质体的诱变育种奠定了基础。     

抗生素产生菌基因克隆的新进展

虽然顶头孢的转化作用已经得到证明,然而抗生素产生菌的基因克隆技术基本上仍局限于链霉菌属。有关克隆链霉菌基因的许多基础研究已有评述,并且出版了天蓝色链霉菌和变青链霉菌分子生物学技术的实验手册。最新进展还包括原生质体形成、再生和融合。目前,原生质体再生是在铺有渗透稳定培养基的琼脂培养皿上完成的。尽管在液体中有利于原生质体再生,但至今并未实行。     

吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生

目的研究井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件。方法使用溶菌酶水解菌体细胞壁法,分别考察影响吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生的各种因素。结果在R2YE液体培养基中,一级菌丝体的最佳培养时间为24 h,二级菌丝体的最佳培养时间为16 h,最佳甘氨酸质量浓度为5 g.L-1,最佳溶菌酶质量浓度为2 g.L-1,最佳酶解时间为60 min,最佳再生培养基为R2YE,原生质体的再生率最高可达到15.79%。结论本实验确定了吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件,能够得到较高的再生率。     

链霉菌的原生质体融合

链霉菌中许多品种可以产生抗生素,为此引起人们对它们极大的兴趣。关于在链霉菌中可以通过种内结合的方法来产生低频重组(<10~(-6))进行遗传学分析早有报道~[8]。但最近发现,在人工诱导原生质体形成后,即使是在已知性因子缺失的情况下,也可以产生高频的重组。这样,对于链霉菌的遗传学分析方便多了,推动了链霉菌基础研究及应用研究的发展。 原生质体再生 通过原生质体融合在链霉菌中建立有效的基因转移方法必须解决两个问题。即从细胞如何形成原生质体以及原生质体如何在合     

通过灰色链霉菌原生质体再生提高卡那霉素抗性的机制——Ⅰ.指导高水平氨基糖苷3-N-乙酰转移酶活性基因片段的克隆

由于链霉基因技术的发展,使我们能够克隆和分析结构以及抗生素生物合成基因与抗性基因的调节,相继发现了一些簇集在一起的抗生素生物合成基因和抗性基因。并且证实了一些基因的启动区和二种形式的RNA聚合酶全酶。在分别丧失生产链霉素(SM)和Istamycin(IS)能量的灰色链霉菌和S.tenjimariensis两个突变株之间进行的种间原生质体融合而产生抗生素抗性的研究过程中,Yama Shita等发现灰色链霉菌原生质体再生的结果出现了显著增强卡那链霉(KM)抗性的克隆。没有经过原生质体再生的灰色链霉菌对5μg/mlKM敏感,抗性克隆后可在500～1000μg/ml KM的情况下生长。尽管人们知道链霉菌原生质体再生可引起各种各样的表     

抗生素链霉菌与弗氏链霉菌原生质体的种间电融合

许多链霉菌能够合成抗生素、酶及抗肿瘤剂等各种重要产物。最近,原生质体融合已经成为菌株改良的有效技术。对于链霉菌原生质体融合,几乎专门使用聚乙二醇(PEG)作促融剂。然而,同新发展的电融合法比较,该法存在许多缺点。因此,电融合法正成为酵母、植物及动物细胞融合的常规方法。虽然电融合法正在不同范围内推广使用,但对于像链霉菌这么小的原生质体,至今尚未加以应用。本文论述由抗生素链霉菌a20和弗氏链霉菌f2所制备的原生质体的电融合。利用由显微镜载玻片和铝箔构成的微型融合室来监测链霉菌原生质体的融合过程。     

林可链霉菌与委内瑞拉链霉菌种间原生质体融合的研究

本文报道氯霉素产生菌委内瑞拉链霉菌A-186株与林可霉素产生菌林可链霉菌林可变种78-11株种间原生质体融合的结果。首先,研究了委内瑞拉链霉菌A-186的原生质体制备和再生条件,再生率可达86％。然后,采用氯霉素产生菌S.venezuelae A-186的原生质体用紫外线灭活后,与具有耐药标记的S.lincolnensis var.lincolnensis78-11原生质体融合的方法,种间融合频率达到3.2×10~(-5) 。并筛选到一株遗传稳定的重组子,经初步鉴定它能同时产生两亲株所产的两种抗生素。     

通过原生质体再生手段改进大环内酯类抗生素产生菌

三株大环内酯类抗生素产生菌:产二素链霉菌(Streptomyces ambofaciens)产生螺旋霉素(Spiramycin),弗氏链霉菌(Strep-tomyces fradiae)产生泰乐菌素(tylosin),卷须链霉菌(Streptomyces cirratur)产生缠霉素。这三株菌株当用溶菌酶处理时,在高渗培养基中很容易形成原生质体。若在再生培养基中添补原生质扩张剂,则三种原生质体再生形成菌丝体的频率可达90～100%。     

提高原生质体融合后的龟裂链霉菌的土霉素产量

本报告概述了龟裂链霉菌高频率原生质体融合的某些最适条件和融合产物的OTC生产。菌株与培养基OTC产生菌——龟裂链霉菌QBS3的营养缺陷型变株是用N-甲基-N’-亚硝基胍或紫外线处理后获得的。完全培养基(CM)含;1%胰酶解胨、0.5%酵母膏、0.5%葡萄糖。最低限度培养基(MM)系采用Waksman所述,并由Bauman等加以改进的培养基。在最低限度和完全再生培养基内,均使用0.3M蔗糖。原生质体的制备、融合与再生采用Okanishi等的方法并稍作改进。融合频率     

原生质体诱变及高通量筛选选育链霉素高产菌株

目的 通过诱变和筛选方法的研究，提高灰色链霉菌(Streptomyces griseus)生产链霉素的水平。方法 优化灰色链霉 菌的原生质体的生成和再生条件，并对得到的原生质体进行紫外诱变，然后利用微孔板高通量方式对获得菌株进行筛选。结果 经过诱变选育获得一株菌NP-11703，其链霉素产量在100L罐上比出发菌株提高了21.8%。结论 用紫外诱变原生质体，可以有 效提高灰色链霉菌产链霉素的能力。结合高通量筛选模型的应用，可大大加快高产菌株的筛选效率。     

产抗生素链霉菌的遗传结构和不稳定性

链霉菌的许多特性存在不稳定性,包括抗生素生物合成,抗生素抗性,氨基酸生物合成,色素生成和发育变化。由于生长中某些化学药品的作用或在原生质体再生菌落中能自发地高频产生突变种,紧随原始突变出现次级反应。弗氏链霉菌原生质体再生菌落中大约有0.4%一6.0%不能合成泰洛星。一个自发产生的大观霉素抗性变种,弗氏链霉菌JS85从早期的阻断变种弗氏链霉菌JS82分离得到。JS85阻断泰洛星的合成并对泰洛星敏感。使抗生素合成丧失突变的大部份研究是用JS85来完成的。然而最有意义的发现是     

对渗透压不稳定的链霉菌用常规脱水再生平板会使原生质体再生频率大幅度下降

影响链霉菌原生质体再生频率有三大要素,即菌丝生长期,菌丝和原生质体再生培养温度、再生平板的脱水率和培养基成份。60-1与74-4为在南朝鲜土壤中分离得到的二株抗生素产生菌,用经典的岡西昌则和汤普逊的各种方法不能使其原生质体再生?匝榈?0-1株菌丝培养基应为TSB(Difco)加甘氨酸0.7%,28℃培养45小时;74-4株亦     

红霉素链霉菌原生质体的形成和再生及其对紫外光的敏感性

红霉素链霉菌的菌丝生长在含有0.8％甘氨酸的S培养基中,对溶菌酶的作用敏感,通过酶解,并利用一个包含10mM-MgCl_2和25mM-CaCl_2的高渗培养基能使其菌丝脱壁形成10~(10)/ml的原生质体。 原生质体能再生细胞壁,回复成为一个完整的细胞。最佳条件时再生频率达90％左右。 利用紫外光对红霉素链霉菌的孢子及原生质体分别照射3分钟,其致死率分别为97.95％和98.81％。     

文摘

16-21 溴乙啶处理无活性链霉菌诱导抗生素的产生 抗生素产生菌经过原子质融合,可以得到新的菌落,它能产生与原株产抗生素结构不同的抗菌化合物,无活性链霉菌的原生质体再生同样可以诱导产生抗生素。本研究旨在探讨采用溴乙啶插入诱变剂处理无活性链霉菌产生抗生素的可能性。无活性链霉菌孢     

一种改进卡特利链霉菌358原生质体再生的方法

以卡特利链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｔｔｌｅｙａ）３５８为原始菌株,研究了影响原生质体形成和再生的各种因素,证实了再生培养基中含ＨＥＰＥＳ缓冲剂以及Ｐ缓冲液中加入１％的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）后能有效地促进再生,在ＳＲ再生培养基上原生质体再生率由０．１％提高到２９．５％。     

普那霉素产生菌的原生质体诱变育种

普那霉素产生菌始旋链霉菌（Streptomyces pristinaespiralis ）11．2在含0．5％甘氨酸的种子培养基中培养到对数生长期，收集菌丝体，经2mg／ml溶菌酶在30℃下作用90min可获得大量的原生质体，其再生率为5．1％。始旋链霉菌11.2原生质体经UV诱变并在含普那霉素的再生平板上筛选普那霉素抗性菌株，从中获得一高产：突变株始旋链霉菌ZP-07，普那霉素产量达到1．59g／L，比出发菌株提高101．3％。     

从具沉默抗性基因的链霉菌中筛选新的抗菌物质

本文设计了一种新抗生素筛选方法，用抗生素抗性基因探针的菌落杂交方法，从大量野生型链霉菌中筛选可能含有抗生素抗性沉默基因的若干天然天抗菌活性的链莓菌作为诱变对象，再通过紫外线诱变，原生质体再生，融合等手段处理这些链霉菌，使其产生了抗菌活性。其中孢囊链菌菌ＳＰ－９２９９代谢物的抗耐药菌活性。     

文摘

16-41 用原生质体融合和再生法筛选抗生素产生菌 抗生素产生菌的原生质体融合和再生获得的重组体能合成与原株产抗生素化学结构不同的抗菌物质,这种抗生素的合成可能是原生质体融合和再生过程引起次级代谢产物沉默基因活化的结果,在抗生素产生菌初筛中无生物活性的链霉菌基因组中存在有编码次级代谢产物合成的沉默基因,它对药物筛选具有很大的潜在意义。基于上述的认识,作     

原生质体再生与诱变在硫霉素产生菌选育中的应用

以硫霉素产生菌卡特利链霉菌３５８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｔｌｅｙａ３５８）为原始菌株,用原生质体形成与再生结合物理、化学诱变的方法进行菌种选育。在最适条件下原生质体释放浓度和再生率分别为１．６×１０９／ｍｌ和２９．５％。原生质体再生处理后,硫霉素产量变异向正方向移动,筛选到１株ＰＲ－１１７,相对效价提高６０％。分别以菌株ＰＲ－１１７的孢子和原生质体进行紫外线及亚硫酸氢钠诱变,原生质体对诱变剂的敏感性强于孢子,致死率增加,效价分布更分散。原生质体与孢子紫外线诱变正变率分别为１６．５％和９％,亚硫酸氢钠诱变的正变率都为４％。从原生质体紫外线诱变株中筛选到１株ＰＲｕ－３３６,相对效价比原始菌株提高９０％。     

林肯链霉菌原生质体的形成、再生及其影响因素

林肯链霉菌林肯变种(Streptomyces lincolnensis var.lincolnensis)在含有0.5%甘氨酸的 S培养基上生长的菌丝体对溶菌酶敏感,酶解后产生10~8/ml 的原生质体。在适当的条件下可有20%的原生质体再生成细胞。原生质体在4℃贮存20h 后再生活力下降至原来的20%以下。原生质体在紫外光照射下比孢子更易发生突变。