重组水蛭素的研究进展

 用生物方法合成的重组水蛭素是一个很有前途的活血化瘀药物。本文概括地介绍了重组水蛭素的几种合成方法，药理实验（包括抗凝抗栓作用等）及临床研究的进展情况，其性质和作用与天然水蛭素基本相同。     

重组水蛭素研究进展

水蛭素是医用水蛭的唾液腺分泌的一种多肽,一般由65~66个氨基酸组成,是迄今发现的活性最强的特异性凝血酶抑制剂。本文介绍了重组水蛭素的表达、分离和纯化的研究进展,并展望了重组水蛭素的应用前景。     

水蛭素及重组水蛭素的应用研究概况

水蛭素及重组水蛭素具有抗凝血、抗肿瘤、降血脂等多种药理活性，临床上用于治疗多种疾病。现综述近年来水蛭素及重组水蛭素在心血管系统疾病、脑血管系统疾病等方面的临床应用及其药代动力学和不良反应，指出水蛭素及重组水蛭素具有广泛的发展前景。     

重组水蛭素Ⅲ乳化微粒口服的药效学

 目的探讨重组水蛭素Ⅲ乳化微粒(rHVⅢEP)口服的抗凝血、抗血栓作用。方法①将SD大鼠随机分为4组,分别为水蛭素大、小剂量组(65,130U·g^-1),华法林钠阳性对照组和生理盐水组。分别于给药前、后1h各取血1.5～2mL,测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶凝固时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT);②采用大鼠弥散性血管内凝血模型,测定PT、TT、APTT;③动物分组如上,采用大鼠下腔静脉血栓模型,测定血栓湿重和干重,计算血栓抑制率;④动物分组如上,采用大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓模型,测定血栓湿重,计算血栓抑制率。结果①rHVⅢEP能延长CT、PT、TT、APTT,与空白对照组有显著差异(P<0.05或P<0.01);②rHVⅢEP能延长大鼠弥散性血管内凝血模型PT、TT、APTT,并与生理盐水组有显著差异;③rHVⅢEP口服可使大鼠下腔静脉血栓湿重、干重明显减少,血栓抑制率显著升高,与生理盐水组有显著差异;④rHVⅢEP口服可使大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓重量明显减少,显著升高血栓形成抑制率,与生理盐水组有显著差异。结论rHVⅢEP口服抗凝血、抗血栓作用显著,可用于防治实验性大鼠弥散性血管内凝血、大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓和大鼠下腔静脉血栓,具有良好的应用前景。     

水蛭素的研究概况

 水蛭有多种活性成分，其主要的有效成分是水蛭素（hirudin）。本文概括地介绍了水蛭素的提取方法、结构与稳定性，抗凝抗栓作用，动力学研究以及临床研究及毒副作用概况。认为它是一种很有前途的抗凝血、抗血栓的药物。     

重组水蛭素体内抗凝活性的实验研究

目的：研究重组水蛭素的抗凝活性,为水蛭素新药开发提高实验依据,方法：家兔iv重组水蛭素前及后心脏采血,应用血凝仪测定凝血酶时间（TT）,凝血酶原时间（PT）,和活化的部分凝血活酶时间（APTT）,并考察其抗凝活性的量效和时效关系。结果：重组水蛭素能明显延长TT和APTT,且呈剂量依赖性,但在所试剂量范围内对PT无明显影响,其延长TT和APTT的作用随时间而下降,作用持续约60min,结论：重组水蛭 素具有明显抗凝作用,明显强于现有抗凝药肝素,且其作用强度与同剂量德国产基因重组水蛭素Refludan相同。     

水蛭素的药理作用及临床应用研究进展

水蛭素（hirudin）为特异性凝血酶抑制剂,根据其来源可分为天然水蛭素和重组水蛭素两类。水蛭素具有抗凝、抗血栓、抗纤维化、抗细胞凋亡、舒血管和提高随意皮瓣成活率等多种药理作用,对于血管瘤、肝癌、动脉粥样硬化症、肾病综合征、高尿酸血症、输卵管炎性阻塞和白内障等疾病均具有显著的治疗作用。对近年来水蛭素的相关研究进行综述,为其进一步研发提供参考。     

重组水蛭素在大鼠体内的药动学研究

目的研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。方法采用125-标记的放射性同位素法(RA法)、三氯醋酸沉淀结合放射性检测法(TCA-RA法)研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。结果大鼠iv0.5、1.0和2.0mg/kg重组水蛭素,以RA法检测,该药的消除半衰期(t1/2ke)分别为162.8、147.5和172.8min,AUC分别为264.9、429.9和1112.9(μg·min)/mL;以TCA-RA法检测,该药的t1/2ke分别为100、101和107min,AUC分别为160.7、327.7和551.3(μg·min)/mL。两种方法所得结果均证明AUC与剂量呈正相关,相关系数均大于0.99。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后用RA法和TCA-RA法测定不同组织的药物质量浓度,在各时间点以肾脏含药量显著高于其他组织,肺、胃、脾、心、肝、性腺等组织次之,脑、脂肪最少。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后,用RA法测定不同时间段内尿、粪的放射性总量,在96h内70.16%放射性从尿中回收,1.35%从粪中回收到,24h内胆汁排泄量为3.46%。结论RA法和TCA-RA法测得重组水蛭素在大鼠体内的药动学结果不同,但整体趋势一致;重组水蛭素主要由尿排泄。     

应用ELISA研究重组水蛭素在大鼠体内的药动学

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)是从药用水蛭 (ｍｅｄｉｃｉｎａｌｌｅｅｃｈｅｓ)中分离出的天然的凝血酶抑制剂 ,目前 ,国内外已通过基因重组技术大量制备。本实验应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)对国产重组水蛭素 (Ｒｅｃｏｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)在大鼠体内的药动学进行了研究。1　实验材料ｒＨ供试品 :由 6 5个氨基酸组成 (Ｎ Ｉｌｅ1 Ｔｈｒ2 6 3位脱硫酸基 水蛭素 ) ,分子量 70 0 0 (批号 99110 1;纯度 99.7% ,大连高新生物制药有限公司 )。ＥＬＩＳＡ试剂盒包括 :包被抗体板 (Ｈｉｒｕｄｉｎ抗兔 ,多克隆 ) ;酶标…     

重组水蛭素Ⅲ乳糜微粒抗凝血抗血栓作用的研究及其口服吸收机制初探（英文）

目的：对重组水蛭素rHⅧ乳糜微粒（rHⅧ EP）的抗血栓及抗凝效果进行了药效学评价并对其口服给药的吸收机制进行了初步探索。方法：分别采用正常大鼠, 弥散性血管内凝血（DIC）模型大鼠及下腔静脉凝血（IVC）模型大鼠测定rHⅧ乳糜微粒的药效; 将rHⅧ以异硫氰酸荧光黄（FITC）标记后通过Caco-2 单细胞模型和肠外翻模型测定乳糜微粒的初步吸收动力学。结果：体内实验中, rHⅧ EP可延长凝血酶时间（TT）, 凝血时间（CT）, 并抑制血栓的形成。转运实验证明, rHⅧ在肠的各个部位均有吸收, AP面向BL面的转运速率Papp为（2.68 ± 0.14） ×10-6 cm·s-1, BL到AP的Papp值为（3.02 ± 0.66） ×10-6 cm·s-1, 提示其在肠内的运输方式主要为被动运输。相较于静脉注射方式, rHⅧ乳糜微粒的口服绝对生物利用度为 11.42%。结论：rHⅧ EP具有抗血栓和抗凝作用以及适合的生物利用度。在此基础上, 作者首次提出将rHⅧ制成口服给药的乳糜微粒形式存在良好的开发潜力。     

水蛭开发与临床应用

简介了水蛭素的理化性质、药理作用、制剂与临床应用现状。提示水蛭素及其相关制剂可望成为极有前叙的抗凝血,抗血栓新药之一。     

重组水蛭素抗栓及抗弥漫性血管内凝血作用的实验研究

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)为中医活血化淤药水蛭的主要有效成分 ,系由 6 5个氨基酸组成的单链多肽 ,是迄今作用最强的特异性凝血酶抑制剂 ,具有很强的抗凝、抗栓活性 ,对多种血栓疾病具有预防和治疗效果。目前国内外采用基因重组技术研制水蛭素取得了令人瞩目的进展。重组水蛭素 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒ ｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)产品中仅变异体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ具有抗凝活性 ,简称ＨＶ1,ＨＶ2和ＨＶ3。国内有关单位采用甲基营养型汉逊酵母真核表达系统研制出的ｒＨ与天然水蛭素ＨＶ1不同之处除ｒＨ 6 3位酪氨酸脱硫酸基外 ,还有Ｎ…     

重组水蛭素Ⅲ口服制剂给药系统的初步研究

 目的探讨重组水蛭素Ⅲ(以下简称rHV3)的口服制剂。方法采用在体原位肠袢法研究小肠和结肠在吸收促进剂作用下对rHV3的吸收情况,寻找促进rHV3肠道吸收的吸收促进剂和吸收位置;合成蛋白酶抑制剂——壳聚糖-EDTA轭合物(chitosan-EDTAconjugates,CEC),考察rHV3在胃蛋白酶和胰蛋白酶中的稳定性;将rHV3和促吸收剂、CEC乳化,考察其抗凝血作用。结果吸收促进剂能提高rHV3在肠道内的吸收水平,其中在0.5%EDTA-Na₂的作用下rHV3经由小肠给药产生的抗凝血作用最强;CEC在消化酶的存在下对rHV3有保护作用;乳化微粒与单用rHV3的抗凝血作用有显著性差异。结论重组水蛭素Ⅲ和促吸收剂以及CEC形成的乳化微粒经灌胃能够发挥其抗凝血作用。     

重组水蛭素经蟾蜍肺泡膜的转运研究

 目的考察重组水蛭素跨膜转运的基本特点和影响因素,对转运的机制进行初步的探讨,为重组水蛭素肺部给药的体内评价打下理论基础。方法将蟾蜍肺泡膜作为肺液上皮体外模型,装在水平扩散池上,向给药池中加入荧光标记的重组水蛭素(FTTC-rHV₂),在不同的温度、不同的给药池初始浓度、不同的转运方向的条件下测定表观渗透系数,同时考察给药池溶液中高渗透压、酸性pH、加入渗透促进剂或者代谢抑制剂时的转运情况。同时监测膜电阻的变化。结果FTTC-rHV₂的表观渗透系数具有浓度非依赖性、温度非依赖性和方向非依赖性。酸性pH环境、高渗透压和吸收促进剂使表现渗透系数明显增加,而代谢抑制剂对袁观渗透系数没有明显的影响。3h内膜电阻没有明显的变化,说明膜的完整性得以保持。结论重组水蛭素经蟾蜍肺泡膜的转运是一个非能量依赖、非载体依赖的被动扩散过程。     

重组水蛭素抗弥散性血管内凝血的药效学实验研究

目的:研究重组水蛭素(recombinant hirudin,rH)的抗弥散性血管内凝血(DIC)的作用.方法:♂大耳白兔,采用凝血酶(100 U·kg-1·1 h)和氨基已酸(50 mg·kg-1·h-1×1 h)静脉滴注造成急性DIC模型,观察rH对凝血酶原时间(PT)、血小板计数(PLT)、纤维蛋白原(FIB)含量和血浆鱼精蛋白副凝固(3P)试验以及肺、肾微血栓形成的影响.结果:4个剂量的rH(125、62.5、31.25和15.625μg·kg-1)对于DIC的抑制率:用PT表示分别为89.38%、52.60%、49.71%和25.58%;用PLT表示分别为100.01%、61.86%、58.40%和32.68%;用FIB表示分别为85.22%、73.01%、33.60%和14.86%.各剂量组的肺、肾病理切片均未见微血栓形成.当rH剂量为125μg·kg-1时,试验中各项指标均与生理盐水空白对照组一致.结论:国产rH具有强大的抗DIC作用,其作用强度与已被欧共体批准上市的产品重组水蛭素Reflu-dan相同.     

重组水蛭素对人肝细胞癌生长的影响及分子机制研究

目的:探讨重组水蛭素对人肝癌细胞增殖、凋亡能力的影响及可能的分子机制。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分4组:空白对照组,以PBS溶液进行假干预;重组水蛭素组,以1.0 U/m L重组水蛭素干预;凝血酶组,以1.0 U/m L凝血酶干预;混合组,以1.0 U/m L凝血酶+1.0 U/m L重组水蛭素干预。采用MTT、流式细胞技术分别观察细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。采用qRT-PCR技术检测Bcl-2及Bax的mRNA表达变化,免疫蛋白印记技术检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果:与空白对照组相比,重组水蛭素组细胞增殖能力较空白对照组与凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而凝血酶组细胞增殖能力显著升高、凋亡比例显著降低(P<0.05);混合组细胞增殖能力较凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而与空白对照组相比无明显统计学差异(P>0.05)。与空白对照组相比,凝血酶组细胞内Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平显著升高而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);重组水蛭素组细胞内Bcl-2mRNA及蛋白的表达水平明显降低而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P<0.05);混合组Bcl-2及Bax表达未发生显著变化(P>0.05)。结论:重组水蛭素不仅可以显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并促进其凋亡发生,而且能够有效逆转凝血酶导致的生长促进及凋亡抵抗作用。     

水蛭素抗凝血和抗肿瘤转移的研究进展

据国内外近20年文献,概述水蛭素抗凝血和抗肿瘤转移研究进展,主要阐述重组水蛭素与天然水蛭素的结构以及在抗凝血作用方面与肝素、枸橼酸纳等的不同点,水蛭素能抑制肿瘤细胞的增值和转移,并通过抑制凝血酶活性产生抗肿瘤作用的机制,是一种具有良好应用前景的药物.     

重组水蛭素抗大鼠大脑中动脉血栓形成作用

脑血栓的发病率很高，引起的后果相当严重，抗脑血栓药物是当前研究的热点。近年，国内外对重组水蛭素(recombinant hirudin，rH)——一种由65个氨基酸组成的高效、特异的凝血酶抑制剂的研发取得了令人瞩目的进展。本研究组曾对国产rH的药效学和药动学进行了较深入的研究，     

水蛭素抑制凝血作用探讨

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离出来的一种单链多肽,是中药水蛭中的重要活性成分,为迄今发现的作用最强的凝血酶抑制剂。水蛭素具有极强的抑制凝血作用和抗血栓形成作用,在临床治疗和预防各种血栓形成方面有着广阔的应用前景。近年来,国内外在水蛭素治疗疾病方面进行了研究,并在重组水蛭素的研发方面取得了令人瞩目的进展[1]。