舌鳞癌细胞对Iressa的敏感性及其表皮生长因子受体突变

目的研究中国人舌鳞癌细胞系对表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Iressa的敏感性及其EGFR突变,初步探讨Iressa在头颈鳞癌治疗中的价值。方法以中国人舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113为研究对象,采用MTT法检测Iressa对其增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;对Tscca和Tca8113进行EGFR外显子18～21测序。结果 Iressa对Tscca、Tca8113均有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性。细胞周期分析显示,较低浓度Iressa(18.2μmol/L和36.4μmol/L)可使Tscca和Tca8113细胞G0/G1期比例增高;流式细胞仪分析显示高浓度Iressa可诱导Tscca和Tca8113细胞凋亡。测序发现Tscca和Tca8113的EGFR外显子20存在同一静止突变,即2361G-A,Q787Q。结论 Iressa可抑制Tscca和Tca8113的增殖,呈剂量依赖性;较低浓度时诱导细胞周期G0/G1期比例增高,高浓度时诱导凋亡,其抑制作用与EGFR突变未见相关性。     

血管抑素下调人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的探讨血管抑素（angiostatin,AS）对人舌鳞癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法将Tca8113人舌鳞癌细胞移植到18只裸鼠皮下,用随机数字表法将裸鼠分成3组（每组6只）。PBS组：注射PBS;AS（250ng）组：注射250ng纯化AS;AS（30μg）组：注射30μg纯化As,腹腔注射,2次／d,同时测量肿瘤的大小,2次／周。21d后处死小鼠,将取出的每个肿瘤2等分,一半用免疫组织化学检测VEGF及其两个受体（VEGFR1、VEGFR2）和CD34,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡;另一半用半定量RT-PCR检测VEGF、VEGFRl和VEG-FR2的mRNA表达。结果AS（250ng）组和AS（30μg）组中,细胞凋亡指数（AI）明显增加（P〈0．05）;而肿瘤体积、微血管密度（MVD,用CD34抗体标记并用来评价肿瘤血管生成）及VEGF、VEGFR1和VEGFR2在蛋白质和mRNA的水平表达,都有明显降低（P〈0．05）,且AS（30μg）组更为显著。结论AS下调人舌鳞癌细胞VEGF的表达且呈剂量依赖性。     

抗角蛋白自身抗体对培养人舌鳞癌细胞表达表皮生长因子受体的影响

0引言表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorre－ce刊or，EGFR）与相应配体结合后对细胞增殖具有促进作用，在多种上皮组织来源的癌细胞（如鳞癌细胞等）膜上均有较高的表达．为探讨抗角蛋白自身抗体（antikeratinautoantibody，AKautoAh）对鳞癌细胞EGFR表达的影响，我们以不同浓度AKautoAh作用于培养的鳞癌细胞后，采用免疫组化方法，检测了鳞癌细胞表达EGFR的水平，并进行了图像分析．结果表明＊KaUt。＊b对鳞癌细胞＊＊＊R的表达有明显抑制作用．1材料和方法l．l细胞和主要试剂Tcasll3细胞系细胞（本校口腔医学院中心实验室…     

淋巴道转移舌鳞癌细胞RECK、MMP-2和MMP-9表达的动物实验研究

目的在动物模型水平探讨RECK表达水平与MMP-2和MMP-9的关系。方法采用爪垫注射Tca8113细胞建立舌鳞癌淋巴道转移裸鼠模型,收集4周后回流淋巴结,采用免疫组化、Western blot方法检测RECK、MMP-2、MMP-9水平。结果8例舌癌淋巴结转移模型裸鼠均有MMP-2、9表达,细胞染色呈较强的阳性,而RECK未发现较强阳性细胞出现,只有可疑的阳性细胞散在出现;淋巴结转移的舌癌细胞RECK表达明显低于用于移植的Tca8113舌癌细胞(t=7.78,P<0.01);MMP-2、9表达水平均显著高于用于移植的舌癌细胞(t分别为3.06,2.25,P<0.01或0.05)。结论动物体内实验进一步证实RECK低水平表达可增加舌癌侵袭转移机率,其调控机理可能与RECK抑制MMP-2、9表达有关。     

IL-6对NIH3T3细胞MMP-3和TIMP-1表达影响

目的探讨白细胞介素-6(IL-6)对小鼠NIH3T3成纤维细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)表达的影响。方法应用不同浓度(0、5、10、15、20 mg/L)的IL-6刺激NIH3T3成纤维细胞,共同培育12 h收集细胞。应用Western blot和RT-PCR方法分别检测细胞内MMP-3和TIMP-1的表达。结果 MMP-3表达随着IL-6浓度的升高而上升,TIMP-1表达随着IL-6浓度的升高而下降。结论 IL-6能影响MMP-3和TIMP-1的表达平衡,可能是影响硬膜外瘢痕形成的机制之一。     

熊果酸对人舌鳞癌细胞株TSCCa的抑制作用及其机制探讨

目的 :研究女贞叶有效成分熊果酸对TSCCa细胞增殖的影响 ,探讨其中可能的机制。方法 :用MTT法研究熊果酸对TSCCa增殖的影响 ;用原位杂交的方法检测熊果酸对TSCCa细胞浆中核转录因子mRNA原位表达的影响。结果 :熊果酸抑制TSCCa细胞增殖 ,对TSCCa细胞的半数生长的抑制剂量约为 1 2 .5 μmol·L-1 ,在 2 4h内表现为一定的量效关系 ;原位杂交显示熊果酸对TSCCa细胞的抑制作用与抑制核转录因子的原位表达有关。结论 :熊果酸可能通过抑制TSCCa细胞的增殖来发挥抗肿瘤作用 ,其作用机制可能与抑制细胞浆中核转录因子mRNA的表达有关。     

橙皮素对舌癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的:检测橙皮素对舌癌细胞生长及Notch1活化的影响,探讨橙皮素抑癌作用机制。方法:将培养的Tca8113细胞分为DMSO对照组和25、50、75、100和125 μmol·L^-1橙皮素处理组。MTT法检测不同浓度橙皮素作用后Tca8113细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期分布,定量PCR和免疫印迹分别用于分析橙皮素作用前后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达。结果:与DMSO对照组比较,125 μmol·L^-1橙皮素处理组24、48和72 h Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(7.88%±1.90%、26.28%±2.2%和47.05%±1.90%)(P<0.05);在橙皮素处理72 h后,25、50、75、100 和125 μmol·L^-1橙皮素处理组细胞增殖抑制率分别为(6.14±1.20)%、(28.69±2.10)%、(28.33±2.60)%、(45.26±3.00)%和(47.05±1.90)%,橙皮素对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间剂量依赖性。流式细胞术,橙皮素作用72 h后, 0、50和100 μmol·L^-1橙皮素处理组细胞凋亡百分率从 2.9%±0.5%升高至23.4%±1.7%和 35.1%± 1.9%(P<0.05);G₀/G₁期细胞由(18.6±1.3)%升高至(33.4±1.5)%和(40.5±1.9)%(P<0.05), S期细胞百分率由(70.3±2.5)%下降至(56.8±2.0)%和(48.7±1.8)%(P<0.05)。定量PCR和免疫印迹分析,与DMSO对照组比较,橙皮素作用后Tca8113细胞中Notch1和Hes-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:橙皮素能够抑制Tca8113细胞增殖并诱导其发生细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞,其机制可能与活化Notch1有关联。     

人舌鳞癌细胞中SOCS1表达抑制对细胞侵袭及凋亡的影响

目的 研究细胞信号转导抑制因子1(SOCS1)基因表达抑制对人舌鳞癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法 人舌鳞癌细胞系CAL27中SOCS1沉默效果采用实时定量PCR和Western blotting方法验证;应用Transwell侵袭小室模型观察舌鳞癌细胞的侵袭力;划痕试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果 SOCS1干扰片段显著下调CAL27细胞SOCS1基因的蛋白和m RNA表达水平(P0.05)。沉默SOCS1表达后,干扰组和对照组细胞体外穿膜细胞数分别为(42±9)个和(91±17)个,迁移细胞数分别为(93±14)个和(184±3)个,干扰组均明显弱于对照组(P0.05);SOCS1表达抑制后CAL27细胞凋亡率(11.5±2.1)%明显大于对照组(1.3±0.4)%,且凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 人舌鳞癌细胞株CAL27的SOCS1基因表达抑制后,体外侵袭、迁移能力下降,且促进舌鳞癌细胞凋亡。     

胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响

目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达。结果:PG(10-6mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强。同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量。结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达。提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关。     

体外hEGF对食管癌EC9706细胞增殖影响的研究

目的:研究人表皮生长因子(hEGF)对食管癌EC9706细胞增殖的影响作用,探讨hEGF不同浓度、不同时间对食管癌细胞生长的影响。方法:体外正常条件培养EC9706食管鳞癌细胞株,无血清饥饿细胞,加入hEGF,通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果:hEGF在200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,hEGF刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,hEGF刺激细胞30.03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15.52%,有极显著性差异。结论:hEGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体表达的临床意义

目的　研究喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体 (EGFR)的表达及其与预后的关系。方法　采用免疫组织化学ABC法检测 6 4例喉鳞状细胞癌和 6例喉正常黏膜组织中的EGFR表达。结果　EGFR在上述两种组织中的表达率分别为 6 4 %和 0 % ,两者的差异有显著性 (P <0 .0 1) ;EGFR表达与喉鳞状细胞癌的病理组织分级及患者 5年生存期相关 (P <0 .0 5 ) ;多因素分析亦表明 ,TNM分期及EGFR状态与患者 5年生存期相关。结论　EGFR的表达可作为评估喉鳞状细胞癌分化及预后不良的指标     

舌鳞癌细胞Tca-8113与舌成纤维细胞间信号传导机制的研究

目的：探讨舌鳞癌细胞Tca-8113与正常舌粘膜成纤维细胞（normal mucosa fibroblasts, NMFs）共培养前后多种信号传递分子的基因水平改变。方法：原代培养NMFs，将NMFs与Tca-8113共同培养，观察细胞形态学变化，收集细胞后，分别利用半定量RT-PCR法测定细胞共培养前后生长因子/细胞因子类(IGFBP1)、信号转导/膜受体类(Notch3)、蛋白酶/蛋白酶抑制剂类(ST3，TIMP3，TFPI-2)、细胞基质及相关蛋白类(Tenascin-C) 等6种信号传导分子基因表达的改变。结果：共培养后，NMFs围绕Tca-8113生长，透射电镜下可见细胞内细胞器增多；除Tca-8113的IGFBP1表达减少外，Tca-8113的TFPI-2及NMFs的Notch3、TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。结论：舌鳞癌细胞Tca-8113与NMFs相互作用可产生促进肿瘤和抑制肿瘤的调控因子，二者间可能存在着复杂的调控网络。     

表皮生长因子受体和细胞增殖蛋白在胸腺癌与B3型胸腺瘤中的表达

目的：探讨表皮生长大因子受体（EGFR）、生存素（survivin）、P53蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）在胸腺痛和B3型胸腺瘤（高分化胸腺癌）中的表达方法：9例胸腺癌和21例B3型胸腺瘤手术切除标本，用免疫组化（S-P）法分别标记EGFR、surivin、P53蛋白和PCNA，光镜下观察结果：免疫标记显示胸腺癌对EGFR、survivin、P53蛋白和PCNA阳性表达率分别为77．8%（7／9）、88．8％（8／9）、77．8%（7／9）和100％（9／9）：B3型胸腺瘤阳性表达率分别为67．7％（14／21）、71．4％（15／21）、33．3％（7／21）和85．7％（18／21）：仅P53蛋白在该两类肿瘤中的表达存在显著性差异（P〈0．05）：结论：胸腺癌和B3型胸腺瘤均呈完全性浸润性生长，用P53蛋白判断陔类肿瘤牛物学指标具有临床意义，而EGFR、survivin和PCNA则无意义。     

MGMT及表皮生长因子受体在喉鳞癌中的表达及对预后的影响

目的研究探讨喉鳞状细胞癌中MGMT及表皮生长因子受体蛋白的表达与临床资料间的关系及其对治疗预后的影响。方法标本均选取2016年1月~2017年6月于我院耳鼻喉科手术治疗的93例喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)患者的石蜡切片,经病理学确诊为LSCC标本。选取20例健康喉黏膜组织标本作为对照组。采用免疫组化染色法检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)与表皮生长因子受体蛋白(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达水平。评价肿瘤组与对照组之间MGMT、表皮生长因子受体蛋白(EGFR)的表达差异;评价肿瘤组中MGMT、EGFR的表达水平与其各项临床资料间的关系;评价肿瘤组中MGMT与EGFR表达之间的关系。结果肿瘤组与对照组之间MGMT、EGFR的表达比较,差异具有统计学意义;肿瘤组中MGMT、EGFR的表达水平与病理分期和分化程度呈正相关关系;肿瘤组中MGMT与EGFR表达呈正相关。结论本次研究证明喉鳞状细胞癌中MGMT、EGFR的表达与病理分期和分化程度呈正相关,MGMT、EGFR的高表达往往意味着肿瘤预后不良且比通过疾病分期预后更为准确。MGMT、EGFR的表达作为LSCC的生物指标值得临床推广。     

EGF 对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论 :EGF诱导ODC基因表达可能是其促进前列腺细胞增殖的分子机制之一     

RNAi抑制皮肤鳞癌A431细胞EGFR表达的实验研究

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对皮肤鳞癌A431细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因表达的抑制作用及其对A431细胞增殖、凋亡的影响.方法:设计制备两对针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染A431人皮肤鳞癌细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达;Western Blot测定EGFR蛋白的表达;MTT法检测细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:siRNA2干扰后EGFR mRNA与蛋白的表达强度分别为(16.5±1.6)%和(11.1±1.6)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);在EGFR表达受到抑制的同时,转染后的A431胞生长速度明显变慢;A431细胞的凋亡率为(12.6±1.4)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论:siRNA2能有效抑制皮肤鳞癌细胞EGFR基因的表达,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡.     

舌鳞癌切片的原子力显微镜纳米操纵研究

目的 利用原子力显微镜（AFM）进行人舌鳞癌组织和细胞切片原位纳米尺度的操纵,并发展样品制备及处理的方法,提高舌鳞癌切片AFM图像的反差和分辨率,以满足纳米定位、切割、分离和拾取等一系列操纵的需求。方法人舌鳞癌组织和培养细胞按常规的电镜超薄切片法和石蜡切片法制样后,将切片分别转移至云母表面或载玻片表面,在空气中以接触模式AFM观察。选择合适的针尖并控制力的大小和扫描范围,进行纳米级成像、定位、分离和拾取等操纵。结果选择合适厚度的超薄切片,AFM观察显示,细胞轮廓清晰,细胞膜、核膜等结构明显,核内可见核仁,围绕核膜有颗粒状的细胞器。双氧水和二甲苯处理切片提高反差及AFM成像质量。对石蜡切片能分辨细胞轮廓、核内结构以及细胞间的结构。经上述处理的舌癌切片,通过控制扫描方向和针尖力的大小,实现了范围在20nm～1μm之间的操纵,并利用针尖获取核内遗传物质。结论以人舌鳞癌组织和细胞切片AFM高分辨率成像和结构分辨为基础,实现了AFM原位纳米尺度的操纵,获得特定细胞核内部的遗传物质,进一步开展生化分析,用于肿瘤早期诊断。     

口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用的基因表达特性研究

目的：探讨口腔癌细胞与成纤维细胞间信号传递的分子机制。方法：将口腔癌细胞与正常黏膜成纤维细胞（NMFs）共培养,采用半定量RT-PCR方法,测定细胞共培养前后6种基因表达改变。结果：共培养之后,除IGFBP1表达较共培养前减少外,Notch3、TFPI-2 TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。这些基因分属生长因子／细胞因子类、信号转导／膜受体类、蛋白酶／蛋白酶抑制剂类、细胞基质及相关蛋白类,与ECM降解、血管生成、细胞生长和生存有关。结论：口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用产生促肿瘤发生发展的调控因子和抗肿瘤的调控因子,二者间可能存在着复杂的调控网络。     

表皮生长因子和转化生长因子在子宫内膜息肉的表达

目的探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子(TGF)与子宫内膜息肉的关系。方法对我院2012年1月至2014年1月收治的70例子宫内膜息肉患者的内膜息肉及正常内膜组织内转化生长因子及表皮生长因子的表达进行测定。结果在息肉组织腺体及间质上表达,表皮生长因子、转化生长因子的表达明显高于周围内膜,差异有统计学意义(P<0.05),转化生长因子在息肉组织腺体与间质上的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论表皮生长因子和转化生长因子的表达与子宫内膜息肉的发生有着直接影响。