淫羊藿提取物IC163对K562白血病细胞增殖抑制和凋亡诱导效应观察

目的:观察淫羊藿提取物IC163对K562白血病细胞是否具有增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:用MTT实验观察不同浓度的IC163对K562细胞增殖抑制率的影响,用Hochest33258染色法和Annexin V-FITC和PI染色法检测凋亡细胞的百分率,用Western印迹检测药物干预下的K562细胞Caspase-3蛋白表达。结果:IC163以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,其抑制K562细胞增殖的IC50为18.1μmol/L;IC163以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡并伴有Caspase-3蛋白表达上调和裂解激活。结论:IC163能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡,其诱导K562细胞的机制可能与Caspase-3凋亡信号启动有关。     

防风多糖诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的:探讨防风多糖对体外培养人白血病K562细胞有无调亡诱导作用.方法:MTT法检测防风多糖对K562细胞的增殖抑制作用;荧光显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;流式细胞术采用Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡.结果:MTT法检测显示防风多糖对K562细胞具有显著生长抑制作用;荧光显微镜下观察发现防风多糖作用的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳呈现DNA梯形条带即(DNA ladder);流式细胞仪分析结果显示细胞凋亡百分率随防风多糖浓度增加而增加.结论:防风多糖对体外培养人白血病K562细胞具有增殖抑制及凋亡作用.     

蛇床子素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导K562细胞凋亡和增殖抑制

目的:研究蛇床子素对人慢性髓系白血病细胞K562增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养髓系白血病细胞K562,分别用不同浓度的蛇床子素处理(0、5、10、20μg/ml)。细胞培养48h后,利用MTT法检测K562细胞增殖;流式检测K562细胞凋亡;Western blot法检测PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2和Cleavage-Caspase3表达。结果:蛇床子素可以呈浓度依赖性的诱导K562细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论:蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导K562细胞增殖抑制和凋亡。     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷(As2O3)对人类慢性髓系白血病细胞系(K562)细胞周期及其凋亡的影响。方法：将K562细胞与不同浓度的As2O3共同孵育，在不同时间点应用MTT方法检测K562细胞存活率，并用流式细胞仪检测As2O3的致凋亡作用，同时对As2O3作用后的K562细胞进行细胞周期分析及时相性周期蛋白表达检测。结果：As2O3明显抑制K562细胞增殖并表现为时间和剂量依赖性；在2．0--10．0μmol/L梯度浓度As2O3的作用下，细胞于12—24h时段内无明显凋亡现象，但K562细胞明显阻滞于G2／M期时相，同时周期调控蛋白cyclinE表达下调，cyclinB1表达基本不变。结论：As2O3可抑制K562细胞增殖，但其抑制机制不在于通过诱导凋亡，而依靠诱发K562细胞的G2／M期阻滞。     

露蜂房蛋白体外诱导K562细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨露蜂房蛋白(NVP)体外诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的作用及其机制。方法将露蜂房蛋白NVP1、NVP2、NVP3及NVP4分别作用于K562细胞,采用细胞培养、Hoechst 33258荧光染色技术观察K562细胞形态变化;采用免疫组织化学方法检测K562细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cas-pase-3)表达。结果NVP1~NVP4作用后K562细胞生长缓慢,数量减少,胞质内颗粒增多,并出现大量空泡,细胞碎片逐渐增多;Hoechst33258荧光染色显著增强,染色质呈致密浓染的块状或粗颗粒状荧光。K562细胞cas-pase-3蛋白表达明显增加,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论NVP能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡;其作用机制可能是使caspase-3蛋白表达升高和活化。     

白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨白血病抑制因子（LIF）体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1—3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48h;应用MTT法、Hoeehst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况。结果观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组〉观察2组〉观察3组、6h〉12h〉24h〉48h（P均〈0．05）;观察1—3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组〈观察2组〈观察3组、6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）;观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）。结论LIF能以浓度-时间依赖性抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达。     

多克隆抗胸腺细胞球蛋白对白血病细胞增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨多克隆兔抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)对白血病细胞的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法:体外培养Jurkat、Raji、HL-60、NB4、K562、U937细胞株以及15例患者原代白血病细胞。用50、100、150、200、250μg/mL终浓度的ATG在不同时间分别作用于以上细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:ATG对Jurkat、Raji、HL-60细胞有明显的增殖抑制以及诱导凋亡作用,且高浓度ATG抑制作用更强。ATG对NB4、K562、U937细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均不明显。15例初发白血病患者中7例的原代细胞经ATG作用后明显凋亡,凋亡率均>30%。结论:ATG具有广谱抗白血病作用,尤其是对淋巴细胞白血病作用较强,为其在异基因造血干细胞移植中的应用提供了实验依据。     

PUMA在大蒜素诱导肠癌细胞凋亡过程中的作用

目的探讨凋亡相关基因PUMA在大蒜素诱导肠癌细胞凋亡过程中的作用。方法蛋白印迹法检测在大肠癌LoVo细胞株中大蒜素对PUMA蛋白表达的诱导作用,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,MTT法测定细胞增殖。结果大蒜素可以诱导大肠癌LoVo细胞的凋亡,抑制其增殖,并且诱导PUMA的表达,在PUMA的表达受抑制后,大蒜素诱导大肠癌细胞凋亡的作用明显减弱。结论 PUMA在大蒜素诱导LoVo细胞凋亡的过程中具有一定作用,诱导PUMA表达可能是大蒜素抗癌作用的机制之一。     

白藜芦醇与伊马替尼协同作用对K562细胞生物学行为的影响

目的:探讨白藜芦醇对人白血病细胞增殖的影响及机制。方法:采用不同浓度白藜芦醇及伊马替尼对K562细胞进行干预,通过MTT法、台盼蓝染色观察细胞增殖,caspase-3活性检测、Hoechst 33258染色及流式细胞术观察细胞凋亡情况和细胞增殖抑制率,利用中效原理计算出各时间段内白藜芦醇、伊马替尼对K562细胞增殖抑制的中效浓度,以检测二者有无联合增效作用。结果:不同剂量白藜芦醇、伊马替尼单独作用和联合作用对K562细胞均有生长抑制作用,在一定范围内呈剂量、时间依赖性,2种药物联合有协同增效作用。随着白藜芦醇或伊马替尼浓度升高,其caspase-3活性逐渐增强。白藜芦醇、伊马替尼单独作用和联合作用对人白血病细胞K562均有凋亡作用,且联合用药组随着白藜芦醇或伊马替尼浓度的增加,K562细胞的凋亡率也逐渐增加。结论:白藜芦醇及伊马替尼对白血病K562细胞株均有促进凋亡作用,联合用药可明显增加其凋亡率。     

硼替佐米联合二硫化二砷诱导慢性粒细胞白血病细胞凋亡机制研究

目的:探讨硼替佐米(bortezomib)与二硫化二砷(As2S2)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562和对伊马替尼耐药的同源细胞株K562R的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)增殖抑制实验、瑞氏染色细胞形态观察法、膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)流式细胞仪检测硼替佐米和As2S2单独或联合作用于CML细胞株的增殖抑制和凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物对Bcr-Abl蛋白以及凋亡相关蛋白的影响;反转录PCR(RT-PCR)检测Bcr-Abl mRNA的表达。结果:硼替佐米联合As2S2能有效抑制CML细胞增殖,6nmol/L硼替佐米和3μmol/L As2S2联合作用于K562细胞48h,细胞生长抑制率达(76.4±3.9)%以上,坏死和凋亡细胞比例达54.0%,与单药作用(硼替佐米13.9%;As2S2 8.2%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。药物联合作用通过线粒体途径协同诱导CML细胞凋亡,并使K562和K562R细胞的Bcr-Abl蛋白表达和蛋白磷酸化水平下降。结论:硼替佐米联合As2S2有效抑制K562细胞增殖和诱导凋亡,提高浓度后对K562R细胞也产生类似的作用,有增殖抑制和诱导凋亡作用,两者联合应用可能具有克服伊马替尼耐药的作用。     

伊马替尼联合槲皮素对K562细胞增殖和凋亡协同作用的机制研究

目的:探讨槲皮素联合伊马替尼对K562细胞增殖的影响以及诱导凋亡的机制。方法:将不同浓度的槲皮素、伊马替尼单药和联合用药作用于K562细胞,绘制协同曲线。将0.25μmol/L伊马替尼与25μmol/L的槲皮素联合作用于K562细胞,通过细胞计数检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、线粒体跨膜电位的变化,蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达。结果:0.25μmol/L伊马替尼联合25μmol/L槲皮素对K562细胞有明显的协同抑制生长和诱导凋亡作用。两药联合处理能降低K562细胞线粒体跨膜电位,使胱天蛋白酶(caspase)9和胱天蛋白酶3发生剪切,并明显下调B细胞淋巴瘤(Bcl)2样蛋白1(Bcl-xl)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)蛋白的表达。结论:伊马替尼与槲皮素协同抑制K562细胞生长并诱导细胞凋亡,其机制主要通过下调Bcl-xl以及Mcl-1蛋白的表达,从而激活线粒体凋亡途径来实现的。     

海生素对K562/ADM细胞增殖和凋亡基因表达的影响

目的 探讨海生素(HSS)抗白血病作用及其机制.方法 分别以不同质量浓度(.1～1 000.0 μg/ml)HSS处理白血病耐药细胞K562/ADM,采用MTT法测定细胞增殖情况,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,流式细胞仪(FCM)测定凋亡率,Western blot法检测caspase-3表达.结果 HSS在较高质量浓度时可抑制K562/ADM细胞生长,且具有时效和量效性;经HSS处理的K562/ADM细胞呈现凋亡特有的亚G1峰,凋亡比率随HSS质量浓度和时间延长而增高;HSS处理后,K562/ADM细胞中Bcl-2呈阴性表达,Bax呈强阳性表达;caspase-3表达上调.结论 HSS在体外可明显抑制K562/ADM细胞增殖;可能通过下调Bcl-2表达、上调Bax及caspase-3表达诱导K562/ADM细胞凋亡.     

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法 用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果 白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论 白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.     

半夏水提取液诱导人白血病K562细胞凋亡的初步研究

目的:观察半夏水提取液对K562细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨半夏对白血病的抗肿瘤作用机制。方法:采用CCK-8法,检测半夏水提取液不同浓度梯度范围内(35、350、700、1 000μg/ml)及不同作用时间(24、48、72h)对K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测K562细胞48h凋亡及周期变化。结果:半夏水提取液对人白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析结果显示半夏水提取液作用K562细胞48h后细胞凋亡百分率随半夏水提取液浓度增加而增加,且半夏水提取液可以诱导K562细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:半夏水提取液在一定浓度范围内对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,且呈一定的量效时效关系;其对K562细胞的抑制作用可能与其诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。     

大蒜素对人肺腺癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究大蒜素对人肺腺癌A549细胞增殖抑制、细胞凋亡的影响。方法用不同浓度大蒜素作用体外培养的A549细胞,采用CCK8法检测大蒜素对A549细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察A549细胞形态学变化,ELISA法测定A549细胞上清液VEGF水平,比色法检测caspase3、caspase9活性变化。结果大蒜素对A549细胞增殖有明显抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;24 h、48 h及72 h大蒜素对A549细胞的IC50分别为114.26μg/ml、85.27μg/ml、76.83μg/ml(P<0.05);60μg/ml以上大蒜素作用A549细胞48h可产生显著凋亡特征;随大蒜素浓度增加,A549细胞上清液VEGF水平呈下降趋势,A549细胞caspase3、caspase9蛋白活性显著增加。结论大蒜素能显著抑制A549细胞增殖、诱导其凋亡,可能与VEGF表达下降及caspase3、caspase9激活相关。     

青蒿琥酯对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的研究青蒿琥酯对髓系白血病细胞株K562的增殖抑制和凋亡作用,分析其抗肿瘤机制。方法体外培养K562细胞应用不同浓度的青蒿琥酯处理细胞,台盼蓝染色分析细胞活力,WST-1还原法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和周期,采用免疫印迹技术分析Bax和Bcl-2表达。结果 K562细胞活力随着药物浓度的增加而下降,而FTY720对细胞增殖的抑制作用随药物浓度增加而增加。药物作用72 h,K562细胞的IC50值为95μmol/L;与对照组比较,50μmol/L和100μmol/L青蒿琥酯处理48 h导致S期细胞减少,G_2M期细胞增加;当浓度达到200μmol/L后,G_2M期细胞减少,但死亡细胞增加到39.65%。双染和流式细胞术分析发现,100μmol/L青蒿琥酯作用24 h后,早期凋亡细胞百分率增加;与对照组比较青蒿琥酯导致细胞内Bax表达增加。结论青蒿琥酯可通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖而发挥抗肿瘤作用,其线粒体途径可能参与细胞凋亡过程。     

三氧化二砷对K562细胞生长及Ki-67和Survivin表达的影响

目的：探讨三氧化二砷(As2O3)对K562细胞生长的影响及K562细胞对As2O3的抵抗机制。方法：以不同浓度As2O3作用于K562细胞后，用四唑盐(MTT)比色法分析细胞的生长增殖，用台盼蓝排斥试验观察细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡以及Ki-67抗原和Survivin的表达。结果：2μmol／L As2O3能明显抑制K562细胞生长，但细胞活力、增殖相关抗原Ki-67的降低和凋亡发生在5μmol／L As2O3作用48h后才较为明显；同时As2O3作用后抗凋亡蛋白Survivin的表达均有不同程度的增加。结论：As2O3能有效抑制K562细胞的生长，但对细胞增殖能力的抑制及凋亡的诱导作用不如前者明显；Survivin的表达增加可能是K562细胞对As2O3诱导凋亡的抵抗机制之一。     

富硒麦芽粉水提取物通过细胞衰老和凋亡抑制人白血病K562细胞的增殖

目的 研究富硒麦芽粉水提取物能否抑制K562细胞增殖的作用.方法 Coulter细胞计数法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞内活性氧自由基的水平,DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老.结果 富硒麦芽粉水提取物能抑制K562细胞的增殖,IC50值为0.5 mg/mL.进一步研究发现：富硒麦芽粉水提取物使细胞阻滞在G2/M期、增加细胞内活性氧自由基水平,染色质发生凝集,引起细胞凋亡标志蛋白的切割.此外,4 mg/mL的水提取物能引起60％的细胞发生衰老.结论 富硒麦芽粉水提取物具有明显的抑制K562细胞增殖的作用,其机制与诱导细胞衰老和凋亡有关.     

齐墩果酸对K562细胞bax、bcl-xL mRNA表达的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对人慢性粒细胞白血病K562细胞bcl-xL和bax基因表达的影响.方法 采用光学显微镜观察OA对体外培养K562细胞的增殖抑制情况;并用RT-PCR法检测bcl-xL和bax mRNA的表达.结果 与空白组和DMSO对照组比较,80 μmol/L OA处理细胞后,细胞增殖受抑制;OA用药组bax mRNA含量增加,bcl-xL mRNA含量减少.结论 OA可以诱导K562细胞凋亡,其机制可能通过上调bax基因表达及下调bcl-xL基因表达有关.     

盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562增殖及分化的影响

目的探讨盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中的作用。方法采用MTT法集落培养实验观察盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562细胞增殖的影响;采用Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测CD71分化抗原表达。结果盐酸肾上腺素可明显降低K562细胞增殖、集落生长,并呈浓度依赖性;在形态上可诱导细胞趋向红系分化,同时上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达。结论盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中起重要作用,其机制为抑制K562细胞增殖和诱导其分化。