X-盒结合蛋白1、血管内皮生长因子C在肝癌中的表达及意义

目的 检测X-盒结合蛋白1(XBP1),血管内皮生长因子C(VEGF-C)在肝癌组织中的表达,探讨在肝癌发生发展过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测术中取的新鲜42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1 、VEGF-C的mRNA表达,应用Western blot法检测57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBP1、VEGF-C在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1 mRNA相对表达量分别为0.4396±0.0241、0.4152±0.0252、0.4095±0.0149,XBP1 mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05);肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF-C mRNA相对表达量分别为0.4447±0.0335、0.4195 ±0.0334、0.4019±0.0259,VEGF-C mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05). 在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 肝癌组织中XBP1、VEGF-C mRNA和蛋白的表达一致,均为高表达.     

免疫结核球蛋白、血管内皮生长因子-C在肝癌组织中的表达及意义

目的 检测免疫结核球蛋白(Bip)、血管内皮生长因子(VEGF)-C在肝癌组织中的表达,探讨其在肝癌生长中的作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测术中所取新鲜的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0 cm肝组织和15例正常肝组织中Bip、VEGF-C的mRNA表达,应用Western blot方法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中Bip及VEGF-C在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中Bip mRNA相对表达量分别为0.4772±0.0401、0.4332±0.0488、0.4301±0.0398,Bip mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05).肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF-C mRNA相对表达量分别为0.4447±0.0335、0.4195±0.0334、0.4019±0.0259,VEGF-C mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05);实验对肝癌组织和正常肝组织中Bip和VEGF-C的蛋白表达进行定性验证:在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.在肝癌组织中Bip、VEGF-C mRNA和蛋白的表达一致,均呈高表达.这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移密切相关.     

YB-1蛋白在肝癌细胞的表达部位及其意义

目的 探讨YB-1蛋白在肝细胞癌( Hepatocellular carcinoma,HCC)组织、2种肝癌细胞株、正常肝细胞株中的表达及其与肝癌患者临床参数的关系.方法 采用免疫组化检测YB-1蛋白在58例HCC组织及相应例癌旁组织、20例正常肝组织中的表达;用Western blot法检测上述HCC 组织、癌旁组织、正常肝组织及肝癌细胞株QGY-7701、SMMC-7721、正常肝细胞株L02中核移位YB-1蛋白表达.结果 免疫组化显示在HCC组织,YB-1蛋白主要表达于癌细胞胞浆,其阳性率(72.4％,42/58)明显高于癌旁(41.4％,24/58及正常肝组织(35.0％,7/2) (P＜0.05).其中18例(31.0％,18/58)HCC组织伴有明显YB-1核阳性表达,且核表达与HCC病理分级、门静脉癌栓、肿瘤大小相关(P＜0.05).Western blot检测同样证实核移位的YB-1蛋白在肝癌组织(0.474±0.107)显著高于癌旁组织及正常肝组织(P＜0.05).核移位的YB-1蛋白在2种肝癌细胞株中均高于正常肝细胞株(P＜0.05),其差异较织织更为明显.结论 YB-1蛋白在HCC中高表达及核移位可能促进了肝癌的发生发展,有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

葡萄糖调节蛋白94在人肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨葡萄糖调节蛋白94(Crp94)mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况及其与肝癌发生的关系.方法 肝癌患者手术切除标本10例,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞Grp94 mRNA基因的相对表达量,并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本Crp94蛋白的表达情况.结果 (1)半定量RT-PCR显示:Grp94 mRNA在肝癌组织中均呈高表达,相对表达量为0.7490±0.7508,而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达,相对表达量为0.446 62±0.50000两组之间差异有统计学意义(P《0.05).(2)免疫组织化学及图像分析结果显示:在肝癌组织和癌旁组织中Grp94蛋白平均灰度扫描值分别为158.0800±20.5952、122.2800±24.4148两组之间差异有统计学意义(P《0.01).结论 Grp94在肝癌中的表达明显增高,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

多梳基因Bmi-1在肝癌组织和门静脉癌栓组织中的表达及意义

目的 检测肝癌组织、癌旁肝组织、门静脉癌栓组织和正常肝组织中多梳基因Bmi-1 mRNA及其蛋白的表达,探讨Bmi-1与肝癌患者预后的关系.方法 回顾性分析2005年1月至2009年12月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的40例原发性肝癌患者的临床资料.收集患者手术标本,应用免疫组织化学法、Western blot和实时荧光定量PCR检测Bmi-1 mRNA和蛋白在肝癌组织(40例)、癌旁肝组织(40例)、门静脉癌栓组织(11例)和正常肝组织(10例)中的表达情况,分析Bmi-1与肝癌的临床病理特征关系.组间比较采用Nemenyi检验或Dunnett检验,不同病理因素与Bmi-1蛋白在肝癌组织中的表达差异比较采用x2检验或Fisher确切概率法,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验.结果 正常肝组织、癌旁肝组织、肝癌组织和门静脉癌栓组织中Bmi-1 mRNA的相对表达量中位数分别为0.96、2.60、7.51和29.95.免疫组织化学检测结果提示,正常肝组织、癌旁肝组织、肝癌组织和门静脉癌栓组织中Bmi-1蛋白高表达率分别为10.0％、20.0％、67.5％和100.0％,肝癌组织和门静脉癌栓组织Bmi-1蛋白高表达率均明显高于正常肝组织和癌旁组织(x2=17.25、22.77,22,04、23.95,P＜0.05);Bmi-1蛋白在11例伴有门静脉癌栓的肝癌组织中也呈高表达.Western blot结果与免疫组织化学检测结果相符合.Bmi-1 mRNA及其蛋白的表达与Edmondson分级和门静脉癌栓有关(x2=5.572,P ＜0.05);与肿瘤直径、血清AFP值及HBsAg无关(x2=0.000,0.019,0.663,P＞0.05).术后生存分析结果显示,Bmi-1高表达的患者预后不良.结论 Bmi-1与肝癌的发生、侵袭能力和门静脉癌栓形成有关;Bmi-1高表达比Bmi-1低表达的患者预后差.     

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系.结果 40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达.实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织(20.0711±32.0232)中的表达显著高于癌旁肝组织(4.5184±9.4738,P＜0.05)和正常肝组织(4.1764±4.7193,P＜0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论 EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用.     

肝癌中Smac和Caspase-3的表达及在细胞凋亡中的关系

目的探讨Smac和Caspase-3在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及二者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系.方法免疫组化法检测43例肝癌组织、20例癌旁组织和11例正常肝组织中Smac和Caspase-3蛋白表达情况.RT-PCR检测Smac和Caspase-3 mRNA表达情况.结果43例HCC标本中Smac表达有20例(46.5%),而除2例癌旁组织外,其它癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Caspase-3在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有18例(41.9%)、15例(75%)和11例(84.6%)表达.Smac和Caspase-3在肝癌组织中的表达具有明显的正相关性(P＜0.05,r=0.6264).Smac mRNA表达阳性的肝癌组织的细胞调亡指数明显升高.结论Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Caspase-3呈明显的正相关,二者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环.     

核基质结合蛋白1在胰腺导管腺癌中的表达及意义

目的 探讨胰腺导管腺癌(PDAC)中核基质结合蛋白1(SATB1)的mRNA和蛋白表达水平及其与临床病理特征的关系,评价SATB1在PDAC预后判断中的价值.方法 应用免疫组织化学法检测49例PDAC组织及配对的癌旁组织石蜡标本SATB1蛋白表达水平,利用Western blot 和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测16对配对冷冻保存的新鲜PDAC组织、癌旁组织中SATB1蛋白和mRNA表达水平.结果 免疫组织化学结果显示,SATB1在13例PDAC中呈高表达,癌旁组织有5例高表达(26.5％比10.2％).SATB1的表达与PDAC分化程度(x2=4.131,P＜0.05)、淋巴结转移(x2 =5.000,P＜0.05)、T分期(x2=14.348,P＜0.05)和TNM分期(x2=6.69,P＜0.05)相关.阳性表达SATB1的PDAC患者术后中位生存时间为353 d,阴性表达SATB1者为508 d.RT-PCR和Western blot结果显示SATB1在PDAC患者中mRNA表达高于癌旁组织(t=2.432,P＜0.05),蛋白表达水平差异无统计学意义(t=0.324,P＞0.05).结论 SATB1在PDAC中表达呈上调状态,与PDAC临床病理因素及预后相关.     

Pokemon在肝细胞癌及癌旁、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达

目的检测和分析Pokemon在肝细胞癌及癌旁组织、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达。方法40例肝癌组织、距癌组织1cm以上的癌旁组织、距癌组织5 cm以上癌以远组织取自肝细胞癌合并乙型肝炎后肝硬化行肝移植患者切除病肝。20例肝硬化组织取自肝硬化行断流手术患者。20例正常肝组织取自健康供体标本。用real-time PCR(实时定量PCR,RT- PCR)法检测Pokemon蛋白mRNA在这些组织中的表达。结果肝癌组织、癌旁组织的Pokemon蛋白tuRNA的表达水平显著高于癌以远组织、肝硬化组织、正常肝组织(P<0.05)。肝癌组织与癌旁组织则差异无统计学意义(P>0.05)。癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织之间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论Pokemon在肝细胞癌中存在异常高表达。癌旁组织可能存在着亦有Poke- mon蛋白mRNA高表达的的癌前病变。癌以远组织、肝硬化组织Pokemon蛋白mRNA表达水平与正常肝组织差异无统计学意义。     

脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达及其意义

目的 探讨p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法 应用免疫组织化学技术检测60例脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达。结果 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达率分别为43.3％和90％（P＜0.05）；36.7%和80％（P＜0.05）；41.7%和0（P＜0.05）。脑胶质瘤中p16蛋白及nm23蛋白缺失率在死亡组和生存组分别为73.7%和31.8%（P＜0.05）；84.2%和36.3%（P＜0.05）；c-erbB－2蛋白过度表达率在死亡组和生存组为68.4%和27.2%（P＜0.05）。结论 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白过度表达与脑胶质瘤发生、发展密切相关。     

Basic metabolism: protein

Proteins serve a wide variety of functions. They are made by the sequential incorporation of amino acids in an order that is determined by genes and which in turn determine the final structure and thus the function of the protein. Proteins are constantly being synthesized and broken down at rates which exceed the amount of protein consumed in the diet and the equivalent amount of nitrogen that is excreted as urea in the urine. Some amino acids can be synthesized in the body (non-essential amino acids) but others (essential amino acids) must be supplied from dietary proteins in amounts that match the amounts that are oxidized. Hence the criterion of adequacy of a diet with respect to protein is its ability to maintain nitrogen balance in an adult and its ability to support normal growth in a child. During some critical illnesses there appears to be a constraint on the rate at which some non-essential amino acids can be synthesized, so that clinical benefits have been seen from supplementing the diet with these ‘conditionally-essential’ amino acids. Moreover, following surgery or during severe illness there is an increase in amino acid oxidation that can lead to muscle wasting. It is important to minimize the loss of lean tissue, but it may not be possible to prevent it completely by dietary means.     

cAMP反应元件结合蛋白与神经病理性疼痛

神经病理性疼痛(neuropathic pain)是指由于外周或者中枢神经系统的直接损伤或功能紊乱引起的疼痛。常表现为自发性和诱发性疼痛。其确切机制尚不清楚。目前研究认为与初级感觉神经元的异常兴奋;交感神经的芽生和交感-感觉耦联;初级传入末梢在脊髓背角的异常分布;中枢敏感以及大脑皮层的功能重塑等有关[1,2]。这种慢性改变涉及基因表达的改变,基因表达的关键是基因转录的调控。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response-element binding protein,CREB)是转录/翻译因子家族的一员,通过与顺式作用元件结合,改变DNA的局部构象而影响基因转录水…     

骨肉瘤中Survivin蛋白表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性

目的探讨Survivin蛋白在骨肉瘤中的表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性。方法采用免疫组化S—P法检测凋亡抑制基因Survivin在骨肉瘤、骨软骨瘤和正常骨组织中的表达及P-糖蛋白、bcl-2蛋白在骨肉瘤中的表达。结果Survivin蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率为63．15％,在骨软骨瘤和正常骨组织中未见表达;Survivin阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤部位无关,与Enneking分期及WHO组织学分型有相关性;P-糖蛋白和bcl-2蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率分别为47．36％和55．26％。在骨肉瘤中．Survivin的表达与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达密切相关。结论①Survivin在骨肉瘤中呈高表达,与临床耐药密切相关．有望成为骨肉瘤靶向治疗的一个新靶点。②Survivin与bcl-2蛋白表达密切相关．二者协同发挥抗凋亡效应。     

Reactivation of motility of demembranated hamster spermatozoa: role of protein tyrosine kinase and protein phosphatases

Demembranated cauda epididymidal spermatozoa of hamster, following reactivation with 1 mm ATP, exhibited either a loop or planar type of motility. The spermatozoa with planar motility exhibited increased progressive velocity (VSL), straightness (STR), linearity (LIN) and beat cross frequency (BCF) compared to the spermatozoa with loop type motility. cAMP was observed to have differential effects on the motility parameters of the demembranated spermatozoa depending on the type of motility. For instance, in the loop type, average path velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and VSL were increased in the presence of cAMP unlike in the planar type. Furthermore, in an attempt to understand the role of protein kinases and protein phosphatases in regulation of sperm motility, the effects of various inhibitors of these enzymes on the motility and phosphorylation of proteins of reactivated demembranated spermatozoa were studied. Inhibitors of PTKase (protein tyrosine kinase) and protein phosphatases inhibited the motility of reactivated demembranated hamster spermatozoa. The activity of the respective enzymes associated with demembranated spermatozoa was concurrently inhibited, thus providing evidence that the effect of the inhibitors on motility was mediated through their inhibitory effects on the activities of the enzymes. The results also demonstrated that two phosphotyrosinylated proteins of molecular weight 65 and 80 kDa showed reduced phosphorylation in the presence of PTKase inhibitors, thus indicating their possible role in reactivation of motility of demembranated hamster spermatozoa.     

Role of protein phosphatases in genitourinary cancers

The prevalence of genitourinary cancers has been increasing rapidly worldwide over the past 10 years. Advances in diagnosis and treatment have improved the oncological outcomes of patients with genitourinary cancer. However, the precise mechanisms of cancer development are largely unknown. Among various biological mechanisms, reversible phosphorylation is crucial for regulating the activities of many proteins in cancer cells. In contrast to protein kinases, the roles of cellular protein phosphatases have not been fully elucidated. However, emerging evidence suggests that various protein phosphatases are involved in genitourinary cancer development and have potential for cancer treatment. In the present review, we focus on recent progress in protein phosphatases regarding genitourinary cancers. We also explore the development of new strategies for cancer therapy using protein phosphatase and related molecules.     

热休克蛋白27和糖调节蛋白78分布异常对心脏移植后血管病变的影响

目的 观察移植后心脏组织中热休克蛋白27(HSP27)和糖调节蛋白78(GRP78)的组织分布,探讨移植后心脏血管病变(CAV)的发病机制.方法 建立大鼠同基因(n=8)和异基因(n=8)心脏移植的Ono模型,采用免疫组织化学法[链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法]验证移植后心脏组织中HSP27和GRP78的组织分布.结果 同基因植组,HSP27和GRP78在心脏组织内均匀分布;异基因移植组,HSP27和GRP78在环血管周围心肌组织中高表达(2.24±0.36比1.04±0.10,P＜0.01;1.51±0.12比0.85±0.30,P＜0.05),而在增生的冠状动脉组织内几乎不表达(2.24±0.36比0.25±0.08,P＜0.01;1.51±0.12比0.16±0.10,P＜0.01).结论 HSP27和GRP78在异基因移植后心脏组织中分布不均,导致冠状动脉组织无力对抗免疫损伤,诱发血管平滑肌细胞过度增殖可能是CAV发生、发展的重要原因.     

颅脑损伤术后感染者调节细胞凋亡线粒体蛋白和星形胶质源性蛋白表达水平

目的探讨颅脑损伤术后感染者调节细胞凋亡线粒体蛋白（Smac）和星形胶质源性蛋白（S100B）水平,并分析其与疗效及预后的关系。 方法选取2016年1月至2018年1月解放军总医院第三医学中心收治的112例颅脑损伤术后感染者（术后感染组）、50例颅脑损伤术后未感染者（未感染组）和50例健康体检者（对照组）作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测各组研究对象血清Smac和S100B蛋白水平。绘制受试工作者曲线（ROC）分析血清Smac和S100B对颅脑损伤术后感染的诊断价值;采用Logistic回归分析血清Smac和S100B蛋白对颅脑术后感染者预后的影响。 结果术后感染组、未感染组和对照组研究对象血清Smac和S100B水平比较,差异均有统计学意义（F = 11.346、 P = 0.001,F = 9.524、P = 0.008）,其中术后感染组患者低于未感染组（Smac：t = 5.836、P < 0.001,S100B：t = 7.782、P < 0.001）,未感染组患者低于对照组（Smac：t = 2.946、P = 0.004,S100B：t = 3.889、P < 0.001）。血清Smac和S100B单项检测对颅脑损伤术后感染有一定诊断价值（Smac：AUC = 0.689,95%CI：0.624～0.757,P = 0.023;S100B：AUC = 0.718,95%CI：0.653～0.749,P = 0.011）,两者联合检测则可提高其诊断效能（AUC = 0.857,95%CI：0.811～0.926,P = 0.005）。与治疗前比较,术后感染组患者治疗后血清Smac和S100B蛋白水平显著升高,差异有统计学意义（t = 4.802、6.499,P均< 0.001）。随访6个月,死亡患者、预后不良患者和预后良好患者血清Smac和S100B水平差异有统计学意义（F = 15.065、P < 0.001,F = 7.194、P = 0.016）,其中死亡患者水平显著低于预后不良者（t = 2.06、P = 0.046,t = 2.297、P = 0.028）,预后不良患者水平显著低于预后良好者（t = 4.225、7.110,P < 0.001）,差异均有统计学意义。经Logistic回归分析,治疗前血清Smac和S100B蛋白是颅脑术后感染者预后的保护性因素（P = 0.008、0.003）。 结论血清Smac和S100B蛋白水平在颅脑损伤术后感染者中低表达,对颅脑损伤术后病原菌感染有一定诊断价值,两者联合可显著提高其诊断效能,并影响疗效及预后。     

新基因丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6（HCBP6）的发现和研究

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6（HCBP6）是成军教授课题组利用酵母双杂交技术首先发现的与丙型肝炎病毒核心蛋白结合的蛋白。课题组进一步发现HCBP6可以感受肝细胞内总胆固醇与甘油三酯水平变化并调节总胆固醇与甘油三酯水平。动物模型发现，HCBP6基因敲除小鼠在高脂饮食喂养下会出现糖脂代谢紊乱。课题组进一步发现韩国红参组分可通过调节HCBP6改善糖脂代谢，推动了含有该组分PTIB001治疗非酒精性脂肪性肝病的功能食品的问世。这些工作为基于PTIB001治疗NAFLD药物的研发提供了理论依据。     

The relationship between ejaculated ram sperm mitochondrial protein synthesis and motility

Summary. D-chloramphenicol, at concentrations of 20 and 40 μg/ml, inhibited over 80% of the newly synthesized mitochondrial proteins expressed by incorporation of ³H-amino acid mixture. At concentrations of 20 and 40 μgml⁻¹, D-chloramphenicol enhanced the collective motility of washed ram spermatozoa. The collective motility measured by the multichannel Reflectospermiograph system, significantly enhanced the motility wave frequencies and amplitudes by 24–17% and 65–32%, respectively. Furthermore, the longevity of the collective motility was prolonged by 12–19%. In about 20% of the cases, when the original sperm motility was low, it was found that 40 μg ml⁻¹ D-chloramphenicol has maximum stimulation effect on sperm motility in inverse fashion. Since the mitochondria are located adjacent to the motility initiation area, it can be speculated that the mitochondrial protein(s) directly inhibiting the axonemal-ATPase activity or indirectly blocking sperm metabolite, are essential for maintaining sperm motility.