构建新西兰兔脊柱结核模型的对比研究

 目的 探讨构建新西兰兔脊柱结核模型的实验方法,并评价此种方法的可行性。方法 62只新西兰兔随机分为致敏造模组（经弗氏完全佐剂致敏后造模）20只、未致敏造模组（造模前未经弗氏完全佐剂致敏）20只、对照组20只、空白组2只。致敏造模组兔经弗氏完全佐剂致敏后,于L4上终板下方钻孔,填入明胶海绵,在其中浸注种植H37Rv人型标准结核杆菌混悬液0.1 ml;未致敏造模组未经弗氏完全佐剂致敏,浸注H37Rv人型标准结核杆菌混悬液0.1ml;对照组浸注液体培养基与生理盐水混悬液0.1 ml;空白组不做任何处理。结果 术后8周兔存活率致敏造模组为89.5%、未致敏造模组60.0%,对照组94.7%、空白组100%;致敏造模组成活兔造模全部成功。致敏造模组造模椎体破坏情况：术后4周X线片为50%、重建CT和MRI均为 83.3%;术后8周X线片为58.8%、CT重建和MRI均为100%。术后8周,肉眼观察全部成活兔造模椎体均出现骨破坏、肉芽及坏死组织形成,腰大肌脓肿发生率为17.6%;组织病理学显示造模椎体均有大量淋巴细胞和类上皮样细胞、骨小梁断裂、凝固性坏死物质;细菌培养阳性率为52.9％。未致敏造模组术后8周有75%成活兔造模椎体出现骨破坏,腰大肌脓肿发生率为100%。对照组与空白组无上述改变。结论 经弗氏完全佐剂致敏后,在新西兰兔腰椎椎体的上终板下钻孔、明胶海绵填塞、种植H37Rv结核杆菌标准菌株的方法,可成功构建兔脊柱结核模型。     

耐药脊柱结核的外科治疗

目的:探讨耐药脊柱结核的外科治疗及疗效.方法:对2005年3月至2009年4月收治的60例耐药脊柱结核的临床资料进行回顾性分析,男36例,女24例,年龄5～79岁,平均47.3岁.其中34例患者有神经受损症状,神经功能按ASIA分级标准:A级2例,B级5例,C级13例,D级14例.根据病灶部位及病变程度采用经脊柱前路、肋横突或后路病灶清除、植骨、内固定.并在药敏试验结合耐药基因检测指导下抗结核治疗12～18个月.观察患者复发、神经功能恢复、植骨融合情况.结果:所有患者均获得随访,时间1～5年,平均3.1年.2例术后复发,经再次手术治愈.神经功能受损的34例,术后改善或完全恢复.X线或CT检查提示57例患者植骨融合.结论:对耐药脊柱结核,药敏试验结合耐药基因检测指导下抗结核治疗,个体化术式选择,有较好的临床疗效.     

小鼠脊柱结核模型的构建及椎体骨密度改变的初步研究

[目的]构建脊柱结核小鼠模型并分析其椎体的骨密度改变。[方法]60只8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分成实验组和对照组,每组30只。实验组小鼠脊柱局部注射浓度为108CFU/ml的H37Rv标准菌株悬液0.1 ml,对照组注射生理盐水0.1 ml。饲养12周后取脊柱标本送Micro-CT扫描。获得三维松质骨图像后,评估两组小鼠椎体骨小梁数量及骨小梁厚度差异。[结果]共6只小鼠在Micro-CT上发现了脊柱破坏的病灶。破坏的椎体骨小梁数及骨小梁厚度显著低于未受累的椎体(t=-5.710,P0.001)和对照组相同节段椎体(t=-6.771,P0.001),脊柱结核小鼠的椎体平均骨小梁数量较对照明显下降(t=-4.716,P0.001)。虽然病灶椎的总体骨小梁数量及厚度降低,但在病灶周围存在大量硬化骨形成,病灶局部骨小梁数量及厚度显著增高(t=8.987,P0.001)。[结论]小鼠脊柱结核病椎平均骨小梁密度下降,但病灶局部骨小梁密度增高。     

脊柱结核的外科治疗40例分析

脊柱结核占全身骨关节结核的首位,其起病隐匿,发病年龄较早,症状较轻,早期诊断不易, 临床上发现较晚.近年来,发病率呈上升趋势,国外也是如此[1].为了引起广大临床医师的注意,能对此类病人作出及时、正确的诊断和治疗,现将我科自1995年1月-2001年6月共手术治疗40例总结如下.……     

脊柱结核早期诊断的研究进展

探讨脊柱结核特点。脊柱结核如果能在早期发现,对于治疗和预后意义重大。目前脊柱结核的早期诊断已经成为研究热点,诊断方法种类繁多。最新提出免疫与结核诊断密切相关,将成为脊柱结核今后研究的焦点,也是未来检测的发展方向。另外,还需熟悉脊柱结核的鉴别诊断,以免误诊为其他脊柱疾病。     

脊柱结核手术治疗研究进展

正脊柱结核是最常见的肺外继发性结核病,约占骨关节结核的50%,如不及时诊治,极易导致脊髓、神经压迫而出现瘫痪。脊柱结核中胸椎结核(48.03%)和腰椎结核(42.36%)最为常见,其次为胸腰椎结核(29.58%),而颈椎结核(5.39%)和骶椎结核(4.22%)则相对少见~([1])。脊柱结核常引起脓肿形成、脊髓功能障碍、脊柱失稳以及后凸畸形等并发症。多数脊柱结核可通过非手术治疗获得痊愈,     

脊柱结核的MRI分型系统

目的 建立脊柱结核MRI的南方医科大学(Southern Medical University,SMU)分型系统,探讨其在脊柱结核诊断、手术适应证明确及术式选择方面的应用.方法 回顾性分析230例脊柱结核患者MRI资料,从椎间盘退变、椎体信号异常、脓肿形成、椎体塌陷、后凸畸形、矢状面指数、稳定性、脊髓或神经根受压及椎管占位等影像学特征进行分型.根据此分型,制定手术预案.结果 230例脊柱结核分为五个类型:信号改变型(Ⅰ型)、脓肿形成型(Ⅱ型)、椎体破坏型(Ⅲ型)、椎管占位型(Ⅳ型)和后凸畸形型(Ⅴ型).230例患者中,Ⅰ型28例,Ⅱa型13例,Ⅱb型26例,Ⅲ型78例,Ⅳ型46例,Ⅴ型39例(Ⅴa型13例,Ⅴb型26例).Ⅰ型25例患者获随访:20例采取非手术治疗,复发2例;5例行前路病灶清除术,无复发.Ⅱa型12例患者获得随访:6例行非手术治疗;6例行前路病灶清除术,复发1例.Ⅰ型和Ⅱa型患者手术治疗与非手术治疗复发率差异无统计学意义(P＞0.05).其余各型脊柱结核,均按照预案进行手术治疗,各治疗组间复发率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊柱结核MRI的SMU分型有利于进一步明确手术适应证,便于选择不同术式,在脊柱结核外科治疗干预方面有积极指导意义.

Abstract：

Objective To outline the classification of spinal tuberculosis based on MRI findings (Southern Medical University classification,SMU classification) and explore its use in the diagnosis,surgical protocols.Methods The MRI data from 230 cases with spinal tuberculosis were analyzed retrospectively.Our classification system was based on clinical and radiological criteria (abscess formation,disc degeneration,vertebral collapse,kyphosis,sagittal index,instability and neurological problems).The surgical strategies were made according with this classification.Results Two hundred and thirty cases with spinal tuberculosis were classified into the 5 types.There were signal change type (type Ⅰ) in 28 cases,abscess formation type (type Ⅱ) in 39,vertebral collapse type (type Ⅲ) in 78,canal compression type (type Ⅳ) in 46 and kyphosis type (type Ⅴ) in 39 respectively.In type I lesion,25 patients had been followed up.Twenty patients were treated medically.Recurrence of tuberculosis was found in 2 cases.Surgical meticulous debridements were done in 5 cases without recurrence.In type Ⅱa lesion,6 patients were treated medically.The other 6 patients underwent surgical meticulous debridement with recurrence occurred in one patient.There was no difference between medical and surgical treatment regarding outcomes in patients with type Ⅰ and Ⅱa lesion.In type Ⅱb-Ⅴ,surgical treatments were carried out according to the pathological changes.There was no difference between medical and surgical treatment regarding outcomes in the patients with type Ⅱb-Ⅴ.Conclusion The SMU classification helps in differentiating the various manifestations of spinal tuberculosis and appears to correlate with the surgical treatment of spinal tuberculosis.We believe that this new classification system can be used as a practical guide in the treatment of spinal tuberculosis.     

不同浓度结核菌建立兔脊柱结核模型的对比研究

[目的]应用不同浓度结核杆菌构建兔脊柱结核模型,探索在造模中较适合的菌量。[方法]42只新西兰兔随机分为5组,实验组3组共30只,每组10只;对照组10只;空白组2只。实验组及对照组动物经弗氏完全佐剂致敏后,在L_6上终板下方钻孔,塞入明胶海绵。实验组分别注入0.1 ml浓度为10~6CFU/ml,10~7CFU/ml,10~8CFU/ml H37Rv标准菌;对照组注入0.9%的生理盐水0.1 ml;空白组不做任何处理。[结果]术后12周兔存活率:注射10~6 CFU/ml菌量兔100%、10~7CFU/ml菌量80%、10~8CFU/ml菌量30%、对照组100%、空白组100%。术后8周X线片阳性率分别为33.3%,62.5%,66.7%;CT及三维CT阳性率分别为44.4%,75%,100%。术后12周X线片阳性率分别为44.4%,75%,100%;CT及三维CT阳性率分别为44.4%,100%,100%。术后12周解剖见17只兔椎体发生骨质破坏,部分有干酪样坏死物质形成,未见有腰大肌脓肿形成;病理学检查:片状分布的干酪样坏死物质,骨小梁排列紊乱及轮廓不清,周围见上皮样细胞及多核巨细胞包绕,局部有部分死骨碎片形成,周围见大量炎细胞浸润;实验组细菌培养阳性率分别为22.2%,75%,66.7%。对照组及空白组未出现上述结核影像学及病理改变。[结论]不同浓度H37Rv标准菌构建兔脊柱结核模型存在较大差异,10~6CFU/ml成功率较低;10~8CFU/ml死亡率及并发症较高;10~7CFU/ml造模成功率高且死亡率较低,较适合兔脊柱结核模型的构建。     

儿童脊柱结核的MRI随访观察

目的：探讨MRI在儿童脊柱结核随访中的应用价值.方法：对2004年2月至2013年4月的21例经临床或手术诊断为脊柱结核的儿童患者MRI表现进行回顾性分析,其中男11例,女10例;年龄2～14岁,平均9.4岁.18例保守治疗,3倒手术治疗,病程2个月～3年,所有病例行2次或2次以上MRI检查.比较初次和复查结果,主要观察椎体及椎间隙信号变化、椎旁脓肿及后凸角的变化.结果：21例脊柱结核患者共累及85个椎体,其中颈椎、胸椎及腰骶椎发生率分别为10.6％（9/85）,49.4％ （42/85）及40％（34/85）.初诊及随访时相仿,15例出现椎体变扁或楔形变,10例可见椎间盘受累,而椎间隙可见不同程度变窄或融合.初诊13例后凸角＞0°,位于胸段7例,胸腰段2例,腰段3例,颈段1例.18例保守治疗患儿中,8例初诊及治疗过程中（2～9个月）后凸角均为0°;1例轻度后凸患儿（＜10°）,治疗12个月时后凸角稍增加;5例中度后凸患儿（10°～30°）,治疗过程中（3～12个月）多次随访均无明显改变;4例重度后凸患儿（＞30°）,保守治疗过程中及治疗后（3～28个月）多次随访后凸畸形均有不同程度加重,其中1例保守治疗失败后行手术治疗后凸角减小.结论：儿童脊柱结核运用MRI随访具有重要意义,能够清晰显示治疗后椎体及椎间隙信号变化、椎旁脓肿及后凸角的变化,为临床治疗及评估预后提供参考.     

脊柱结核脓液中结核分枝杆菌耐利福平基因检测的实验研究

目的:探讨脊柱结核脓液中结核分枝杆菌对利福平(RFP)的耐药机制;评价聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreactionsingle-strandconformationpolymorphism,PCR-SSCP)在脊柱结核检测耐RFP基因中的临床应用价值。方法:将脊柱结核病灶中的脓液经预处理后接种于改良罗氏培养基上,对所培养出的菌株应用PCR-SSCP进行检测。检测包括核心区域(耐药决定区域)在内的rpoB基因。结果:PCR-SSCP检测耐RFP菌株的灵敏度和特异性均为100%,与常规经典药物敏感试验无差异(P<0.05),但检测时间明显缩短,仅用2d。结论:rpoB基因突变是结核分枝杆菌对RFP耐药的重要机制,应用PCR-SSCP检测具有较高的灵敏性、特异性及快速性,是一种对脊柱结核耐RFP菌株快速检测的方法。     

一种可控性脊髓爆震伤模型的建立

目的建立实验室条件下的脊髓爆震伤模型,探讨脊髓爆震伤的致伤特点。方法采用单质锰炸药黑索金(RDX)纸壳雷管为爆源,随机取12只家兔,按爆距2、4、8 cm分为3组致伤,同时检测冲击波压强、正压作用时间。另将12只家兔随机分为致伤组和对照组,致伤组家兔按已选定的标准爆距致伤,观察伤后组织学变化。结果爆距2、4、8 cm测得冲击波压强分别为93.4、50.4、33.5 MPa,爆距4 cm时可造成双后肢运动诱发电位(MEP)潜伏期延长1.0 ms或波幅下降50%,而不致家兔死亡。病理学显示脊髓脊髓前角神经元出现明显坏死,髓鞘板层结构紊乱。结论本方法建立的可控性脊髓爆震伤模型简单、安全、有效,适用于实验室条件下的爆震伤研究。     

一种兔颈动脉狭窄模型的建立

目的 建立一种弹性壁兔颈动脉狭窄模型.方法 采用显微缝合方法将兔颈动脉部分连续显微缝合,分别形成狭窄率约25%、50%、75%的血管狭窄模型,对照组行假手术,于术后10、20 d分别进行多普勒超声及数字减影血管造影(DSA)检查,依据多普勒超声及DSA影像计算模型狭窄率,多普勒超声测得狭窄处血流速度波形,计算不同狭窄血管每秒平均血流量.结果 成功制作单侧兔颈动脉狭窄模型15个,25%、50%、75%狭窄组各5个,狭窄率可控,误差在-5%～5%内.与对照组比较,模型组每秒平均血流量(F)均减少(P<0.05),50%狭窄组收缩期峰值流速(Vs)和平均血流速度(Vm)增高(P<0.05),75%狭窄组Vs和Vm减小(P<0.05).结论 应用显微缝合法制作的兔颈动脉狭窄模型,方法简便,成模时间短,狭窄率可控,并且具有弹性壁、可搏动等优点,是一种较为理想的适于分析血流动力学变化的颈动脉狭窄动物模型.     

结核分枝杆菌对材料粘附能力的体外实验研究

目的：通过体外实验观察结核分枝杆菌对内植物材料的粘附情况，从细菌粘附角度出发探讨脊柱结核内固定术的安全性问题，方法：以表皮葡萄球菌为对照，在表皮葡萄球菌、结核分枝杆菌菌液中分别加人不同材料，扫描电镜观察，比较不同细菌对不同材料(钛合金、不锈钢)、不同表面(光滑面、粗糙面)的粘附情况。结果：结核分枝杆菌对两种材料的粘附均较表皮葡萄球菌少，粗糙表面所粘附的细菌量较光滑面多。结论：结核分枝杆菌对内植物材料的低粘附性可能是临床脊柱结核内固定术安全的原因之一。     

pRNA纳米微粒对脊柱结核分枝杆菌生长影响的实验研究

目的:观察pRNA-3WJ-siLNA gapmer(Mce4)-aptamer(CD40)纳米微粒(简称pRNA纳米微粒)在脊柱结核细胞模型中对结核分枝杆菌生长的影响.方法:利用荧光结核分枝杆菌感染人成骨细胞建立脊柱结核细胞模型.先培养及准备人成骨细胞,人成骨细胞培养至第三代;然后构建培养荧光结核分枝杆菌;将培养良好...     

急性肺栓塞致右心功能不全兔模型的建立

目的建立一种制作简单、可重复性高的急性肺栓塞(APE)伴有右心功能不全(RVD)的动物模型。方法采用实验用新西兰白兔12只,利用明胶海绵可压缩特性经股静脉注入5mm×5mm×10mm明胶海绵条2条,随血流栓塞肺动脉。监测血流动力学参数,行CT肺血管成像(CTPA)及肺组织病理学分析。结果所有明胶海绵条均恒定栓塞于双侧下肺动脉。建模前平均肺动脉压(mPAP)[(9.75±1.75)mmHg]与建模后即刻mPAP[(20.58±5.86)mmHg]、建模后1h的mPAP[(18.78±4.80)mmHg]差异均有统计学意义(P均0.001)。建模前后体循环收缩压(sBP)变化不显著(P=0.640)。建模前右心室/左心室横径比(RV/LV)为0.67±0.09,建模后45min复查为1.90±0.28,差异有统计学意义(P0.001)。结论本研究建立的兔伴有RVD的APE动物模型制作简单,可重复性高,适用于APE诊治的相关研究。     

脊髓静脉高压动物模型的改进

目的 建立长期稳定的兔脊髓静脉高压模型,用于研究脊髓血管畸形致病机制.方法 36只新西兰大白兔随机分为短期组、中期组和长期组,每组手术造模8只和假手术兔4只.手术组兔通过开腹侧侧吻合兔左肾动静脉,形成动静脉瘘,结扎后腔静脉远端和近端导致动脉血异常引流至腰静脉、椎管内静脉丛形成脊髓淤血和脊髓静脉高压.采用Jacobs法对后肢功能评级,Reuter法对脊髓感觉运动反射功能评分,连续观察行为学变化,每组动物到期后对脊髓行MRI扫描、经股动脉DSA检查动静脉瘘口的通畅,并解剖取脊髓行病理学检查.结果 24只模型兔中,存活22只,生存率91.67%,动静脉瘘口通畅率95.45%.术后模型后肢的运动、感觉功能均有所减退,与对照组比较差异有统计学意义.脊髓MRI表现为脊髓相应阶段的水肿,但判断脊髓静脉高压早期病理改变缺乏特异性.组织病理学在光镜下见脊髓内毛细血管的扩张充血,随时间的不同呈现血管周围淋巴细胞的浸润、胶质细胞的增生、髓内血管的玻璃样变性和神经元细胞变性,符合脊髓静脉高压的脊髓病理变化.透射电镜观察可见髓鞘板层的松散、薄髓纤维内线粒体数日的增加和神经无的同缩.结论 通过该方法建立模拟人类脊髓血管畸形的脊髓静脉高压机制导致脊髓损伤的动物模型;模型可靠性和稳定性较高.     

载异烟肼、利福平纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨在兔脊柱结核模型中的释药研究

目的 :研究载异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)纳米羟基磷灰石(nHA)-硫酸钙(CSH)-壳聚糖(CTS)人工骨在兔脊柱结核模型病灶中的释药特点。方法:用结核分枝杆菌H37Rv标准株,采用侧腹入路的手术方法建立兔脊柱结核模型27只,其中雌性15只,雄性12只,3个月龄,平均体重为2.50±0.25kg,每只模型兔均在行结核病灶清除术后置入载INH、RFP纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨,按照时相点分为24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周、10周、12周共9组,每组3只。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定各时相点动物模型病灶中椎体及椎旁肌肉中的INH及RFP的药物浓度,并研究其浓度与时间的关系。结果:人工骨中的INH在兔脊柱结核模型的病灶椎体中24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周的药物浓度分别为75.66±1.95μg/g、48.46±2.34μg/g、30.69±2.74μg/g、20.34±1.63μg/g、9.36±1.17μg/g、5.19±1.40μg/g、2.73±1.19μg/g,在第10周以后未检测到药物浓度,INH在病灶椎旁肌肉中的各时相点浓度为39.51±2.25μg/g、23.65±1.55μg/g、16.39±2.10μg/g、10.38±1.44μg/g、3.66±0.79μg/g、1.89±0.73μg/g、0.26±0.10μg/g,在第10周以后未检测到药物浓度。对INH在同一时间的椎体和椎旁肌两种不同组织中的药物浓度进行两两比较,均有统计学意义(P0.05);RFP在动物模型的病灶椎体中24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周、10周、12周的药物浓度分别为10.85±2.45μg/g、22.47±1.94μg/g、38.32±1.73μg/g、24.22±1.45μg/g、17.85±1.50μg/g、9.81±1.30μg/g、6.35±1.30μg/g、5.11±0.53μg/g、1.32±0.33μg/g,RFP在病灶椎旁肌肉中的药物浓度分别为5.39±1.50μg/g、20.66±1.29μg/g、48.72±2.24μg/g、32.27±1.63μg/g、15.58±1.88μg/g、8.69±0.79μg/g、3.43±0.39μg/g,在第10周后未检测到药物浓度。RFP在椎体和椎旁肌两个部位的药物浓度除72h、4周和6周外,其余时间点的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:载INH、RFP纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨在兔脊柱结核模型病灶中可持续、长效的释放抗结核药物。     

多聚酶链反应检测尿中结核杆菌的临床意义

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）对８６例患者（１０例经病理诊断为肾结核，６９例可疑肾结核，７例单纯附睾结核）和３０例健康对照者进行连续２日晨尿结核菌检测。１０例肾结核患者检出均阳性；可疑肾结核者第一次检出９例，第二次为６例；７例附睾结核者两次无一阳性；对照组有１例二次检查均为阳性。认为ＰＣＲ对尿中结核杆菌检出率高、准确、快速，值得在临床上推广应用。