非小细胞肺癌中人表皮生长因子的表达及其临床意义

本研究旨在探讨erbB-2／HER-2在肺癌组织中的表达情况与临床病理的关系。 一、材料与方法 1．材料：研究材料取自武汉协和医院胸外科1999年至2004年的105例非小细胞肺癌患者，人选患者诊断明确，术前均未做过放疗、化疗并，病理类型均由术后病检证实，[第一段]     

K-ras突变导致肺癌细胞对表皮生长因子受体抑制剂耐药的机制

目的 比较不同细胞株引入K-ras突变质粒前后对表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路活性的变化,探讨K-ras突变对于EGFR抑制剂耐药的机制.方法 通过噻唑蓝(MTF)比色法检测HCC827及H292细胞在转染K-ras基因前后的EGFR下游AKT及STAT通路抑制剂敏感性变化,免疫印迹法(Western blot)检测EGFR下游通路激活状态变化.结果 转染后HCC827细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降1.9和5.3倍,H292细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降3.0和2.5倍,远低于吉非替尼敏感性下降程度,转染K-ras的HCC827细胞AKT通路和STAT3通路持续激活,而转染K-ras的H292细胞AKT通路和STAT3通路的活性降低.结论 K-ras导致EGFR抑制剂耐药的原因可能还存在其他耐药机制,携带EGFR基因突变或野生型的肺癌细胞中,K-ras突变对于AKT和STAT通路的影响可能存在不同.

Abstract：

Objective By comparing the activity of signaling pathway in different cell lines affected by K-ras mutation, to investigate the resisitance to epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors due to K-ras mutation. Methods Methyl thiazol tetrazolium (MTF) method was used to mensure the sensitivity and half maximal inhibitory concentration ( IC50 ) of AKT and STAT inhibitors after transfection of K-ras or blank plasmid into HCC827 and H292 cells. Western blotting was used to compare the activity of downstream signaling pathway in different cell lines. Results After transfection of mutant K-ras, the IC50 of AKT and STAT inhibitors in HCC827 cells was reduced by 1.9 and 5.3 times respectively, and that in H292 cells was reduced by 3.0 and 2. 0 times respectively. The activity of AKT and STAT pathways in HCC827 cells transfected with mutant K-ras was continuously activated, while that in H292 cells was suppressed. Conclusion K-ras-induced resistance to EGFR inhibitors may be related to other mechanisms. In the tumor cells bearing mutant or wild-type EGFR gene, there may exist different influences of K-ras mutations on AKT and STAT pathways.     

非小细胞肺癌中表皮生长因子受体基因拷贝的检测及其临床意义

目的 检测国人非小细胞肺癌标本中表皮生长因子受体(EGFR)基因高拷贝的发生率及与临床特征的关系.方法 236例非小细胞肺癌标本制作成组织微阵列,使用Vysis公司的荧光原位杂交探针检测EGFR基因拷贝数.结果 193例标本得到结果 ,检测到EGFR基因高拷贝81例(占42.0%),其中42例(21.8%)为高多倍体,39例(20.2%)为基因扩增.其发生与病理、分期、性别、吸烟等临床特征无明显相关,与患者的1-3年生存率无明显相关.结论 国人肺癌中EGFR基因拷贝数的分布情况与西方人类似,与临床特征及预后无明显相关.     

表皮生长因子对卵圆细胞p21ras蛋白表达的影响

卵圆细胞 (OVC)为肝脏的干细胞 ,与肝癌发生关系密切[1,2 ] 。我们应用Westernblot法通过对大鼠肝脏卵圆细胞在表皮生长因子 (EGF)干预下 p2 1ras表达的影响进行比较分析 ,同时运用四唑盐比色法 (MTT)法观察细胞活力 ,以揭示EGF对卵圆细胞活性及 p2 1ras蛋白表达变化的影响。一、材料与方法1.材料 :SD大鼠 6只 ,体质量 (12 0± 2 0 )g ,第一军医大学动物所提供。 3’ 甲基 4 二甲基偶氮苯 (日本东京化成工业株式会社 ) ,脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸 (美国Sigma公司 ) ,F12及DMEM /F12 (1∶1) (美国Gib co公司 ) …     

乳腺癌细胞中表皮生长因子对雌激素受体表达的影响及机制

目的研究表皮生长因子（EGF）在雌激素受体（ER）阳性及阴性乳腺癌细胞株中对ER表达的影响及其可能的机制。方法以逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术分别研究EGF途径以及抑制该途径的信号传导后，对乳腺癌细胞株中ERcxmRNA的影响。结果在ER阳性乳腺癌细胞株中，EGF能显著抑制ERα mRNA的表达（P〈0．05），而通过抑制表皮生长因子受体（EG-FR）、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）阻断EGF信号传导可减弱上述抑制作用（P〈0．05）；在ER阴性乳腺癌细胞株中，ERα mRNA无显著变化。结论EGF能够明显抑制ER阳性乳腺癌细胞株中ER的表达，这种抑制作用可能通过EGFR、蛋白激酶B（PKB，又称AKt）信号传导途径完成；这种作用在ER阴性乳腺癌细胞株中并不明显。     

表皮生长因子受体及其在肺癌组织中的表达

表皮生长因子受体及其在肺癌组织中的表达黄云超综述杨俊杰周清华审校１９５９年Ｃｏｈｅｎ等在研究神经生长因子时以小鼠颌下腺组织中发现一种能刺激表皮细胞增生、角化的物质，命名为表皮生长因子（ＥｉｐｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）［１］。进一步研...     

表皮生长因子受体基因突变非小细胞肺癌腹膜转移5例预后分析

目的分析表皮生长因子受体(EGFR)基因突变阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)腹膜转移患者的预后因素。 方法收集2014—2019年收治的EGFR突变阳性NSCLC腹膜转移患者的临床资料。主要观察和分析指标为中位生存期(mOS ),其中mOS1表示从确诊不可切除的中晚期肺癌开始或根治性切除术后发生复发和/或转移开始接受一线酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗至出现肿瘤耐药的时间,mOS2表示从确诊腹膜转移开始至死亡或随访终点的时间。 结果共收集5例患者,均为异时性转移,第一代TKI治疗耐药后出现腹膜转移。耐药后再次基因检测发现EGFR T790M突变阳性3例。mOS1：总体为14.4个月;EGFR 19外显子突变者为18.8个月,21外显子突变者为16.3个月,18外显子突变者为15.6个月。mOS2：总体为7.5个月;EGFR T790M突变阳性者为10.4个月,EGFR T790M突变阴性者为5.2个月;接受靶向治疗联合血管抑制剂治疗者为12.6个月,单纯靶向治疗者为9.3个月,血管抑制剂联合化学治疗者为6.2个月,单纯血管抑制剂治疗者为4.2个月。 结论EGFR突变阳性NSCLC患者腹膜转移后再次行基因检测非常必要,靶向治疗联合血管抑制剂治疗策略可能使患者获得更长的生存期。     

肺癌中表皮生长因子受体过表达与女性、非吸烟、腺癌和基因突变的关系

目的探讨女性和非吸烟的肺腺癌标本中表皮生长因子受体（EGFR）过表达与EGFR基因突变的关系。方法应用组织微阵列和免疫组织化学方法检测137例国人非小细胞肺癌标本（鳞癌71例、腺癌66例）中EGFR的表达，采用测序的方法检测EGFR基因突变。结果EGFR过表达率在肺鳞癌中为63．4％显著高于腺癌的43．9％（P〈0．05），其与性别、吸烟情况无关，也与基因突变无关。结论EGFR的过表达率在女性、非吸烟、腺癌及存在EGFR突变的标本中未见升高，提示这些人群中EGFR抑制剂效果较好的原因与蛋白过表达无关。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染人表皮细胞及其表达

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体(pEGFP-C3-bFGF)能否转染体外培养的人表皮细胞并表达.方法 采用脂质体(LipofectamineTM 2000)转染法,将pEGFP-C3-bFGF转染至人表皮细胞系(HEKa细胞)中,在荧光显微镜下观察其瞬时表达及细胞形态.以同期培养的表皮细胞作为阴性对照,免疫细胞化学染色和免疫荧光标记法检测实验组及对照组中β1整合素、CKl9、CK14及CK10在表皮细胞中表达的差异.结果 荧光显微镜下观察基因转染率为31.6%,转染的细胞体积小,呈圆形或圆梭形,核质比大.免疫细胞化学染色结果显示,实验组细胞中CK19、CK14表达增强,CK10表达减弱.免疫荧光染色结果显示,转染阳性细胞β1整合素弱表达分布在胞膜上,CK19、CK14在胞膜和胞质中表达,CK10表达为阴性.结论 pEGFP-C3-bFGF能够转染至人表皮细胞并表达,为探讨bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考.     

非小细胞肺癌Survivin和Skp2的表达及其临床意义

目的检测Survivin和Skp2蛋白在非小细胞肺癌中的表达,探讨其相互关系及临床意义。方法用实时定量PCR的方法检测30例非小细胞肺癌组织及其对应的癌旁组织中survivin mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测50例非小细胞肺癌组织中Survivin和Skp2的表达,统计Survivin与病理特征及Skp2的关系。结果 76.7%（23/30）肿瘤组织survivin mRNA表达量明显高于对应的癌旁组织。Survivin蛋白在癌组织的阳性表达率（74.0%）显著高于癌旁组织（16.7%）,χ2=25.9,P〈0.001。Skp2在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率（70.0%）也显著高于癌旁组织（20.0%）,χ2=18.8,P〈0.001）。Survivin表达与非小细胞肺癌的病理类型、分化程度、肿瘤分期以及是否有淋巴结转移无统计学意义的相关性（P〉0.05）。Survivin表达与Skp2表达呈正相关（χ2=8.32,P〈0.05）。结论 Survivin在肺癌组织中高表达,其阳性表达率与肿瘤病理类型、肿瘤分期、细胞分化程度和淋巴结转移无明显相关性,与Skp2表达呈正相关。     

RNA干扰靶向抑制表皮生长因子受体表达对大肠癌细胞增殖的影响

目的观察RNA干扰（RN加）技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体（EGFR）的表达以及对细胞增殖的影响。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2；脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144h实时荧光定量PCR（Real Time PCR）和Western blot检测EGFR表达，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，并绘制细胞生长曲线；分5组：A组：Lov0细胞组；B组：Lipofectamine2000组；C组：对照载体HK组；D组：pU6-EGFR-shRNA-1组；E组：pU6-EGFR-shRNA-2组。结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低，G0～G1期细胞增加，S期细胞减少，细胞凋亡率增加，对数生长期延迟，以48h效果最显著，和A组B组C组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；但随着时间的推移其干扰作用降低。结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达，阻滞更多的细胞位于Go～G1期，促进细胞凋亡而抑制细胞增殖。     

表皮生长因子受体在前列腺癌雄激素非依赖型细胞系中表达的意义

目的探讨转化生长因子(TGF)-α和表皮生长因子(EGF)对前列腺癌雄激素非依赖型细胞系中表皮生长因子受体(EGFR)表达的调控作用.方法采用逆转录-多聚酶链式反应和免疫印迹法分别对TGF-α和EGF刺激前列腺癌雄激素非依赖型细胞系PC3、ARCaP后EGFR mRNA表达及其蛋白水平进行定量分析.结果EGF引起PC3、ARCaP的EGFR mRNA升高,分别为5.01±0.45和2.41±0.26,差异无显著性(P＞0.05);TGF-α引起各细胞系EGFR mRNA升高,分别为9.05±0.63和3.54±0.33,差异无显著性(P＞0.05).各细胞系EGFR蛋白水平TGF-α组明显高于EGF组(P＜0.05).结论TGF/EGF-EGFR通路在发生发展中起重要作用;TGFα-EGFR自分泌环在非依赖型前列腺癌中的作用强于EGF-EGFR自分泌环.     

表皮生长因子受体相关蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 观察表皮生长因子受体相关蛋白(ERRP)的表达以及细胞增殖在胃癌分化和发展中的作用.方法 观察47例患者胃癌的手术标本中ERRP的表达和定位,并将其与良性胃黏膜比较,确定他们与细胞增殖和分化的关系.检测3种不同的胃癌细胞株中ERRP的表达,并用表皮生长因子(EGF)诱导EGFR磷酸化激活MKN-28胃癌细胞,检测ERRP对此效应的作用.结果 与良性胃黏膜(66％标本阳性)比较,胃癌(33％标本阳性)中ERRP的表达显著降低.正常胃黏膜的ERRP染色评分是2.9(0.3),高分化、中度分化和低分化癌的评分分别是2.6(0.6)、0.9(0.6)和1.0(0.5),ERRP表达的降低与恶性程度的组织学分级呈负相关(P＜0.05).ERRP阴性癌细胞[35.3(1.1)％;P＜0.01]中增殖程度是ERRP附性癌细胞[9.4(0.6)％]的3.5倍,ERRP在癌细胞中的表达与细胞增殖也呈负相关.与源于非转移性癌的细胞AGC比较,源于转移性胃癌细胞MKN-28和NCI-N87中ERRP的表达量分别是其的1.7倍和2倍.外源性的ERRP蛋白明显抑制了EGF诱导的胃癌细胞MKN-28中EGFR的磷酸化,抑制程度为45倍.结论 ERRP的下调可能在胃癌分化和发展中起重要的作用.ERRP对肿瘤细胞增殖具有负调控作用,其抑制作用可能部分是通过减弱EGFR的活化来实现的.     

表皮生长因子对肾小球上皮细胞骨架的影响

目的观察阿霉素作用下体外培养的大鼠肾小球上皮细胞(GEC)通透性和细胞骨架变化并研究表皮生长因子(EGF)对它们的作用及可能途径。方法在阿霉素作用GEC24h之前给予和不给予外源性EGF，利用Milllcell—PCF Inserts检测牛血清白蛋白(BSA)滤过量，同时评价GEC细胞活力。细胞免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察和测定细胞骨架分子F-肌动蛋白(actin)、α-辅肌动蛋白(actinin)的表达。结果阿霉素刺激GEC24h后，BSA滤过量明显增加，而F—actin重排率增加，排列紊乱，部分解聚，胞浆内应力纤维明显减少；α-actinin趋向核周聚集。阿霉素诱导前先给予EGF，则BSA滤过量明显减少，细胞骨架恢复正常组装状态,α—actinin在胞浆内均匀分布。但在EGF之前给予EGF受体(EGFR)抑制剂AG1478或磷脂酶C(PLC)1抑制剂U73122，则EGF对阿霉素诱导下GEC的改善效应减弱，而在无EGF的阿霉素诱导之前应用AG1478或U73122，均未产生改变。结论阿霉素诱导了GEC细胞骨架的重排和破坏．致使上皮通透性增高，而EGF可能通过EGF—EGFR—PLCγ这条信号转导途径阻止了阿霉素对GEC细胞骨架的影响，保护了GEC上皮屏障。     

表皮生长因子与人绒毛膜促性腺激素共同作用对大鼠卵巢颗粒细胞功能的影响

为阐明表皮生长因子（ＥＧＦ）对卵巢功能的调节作用，本实验用培养的大鼠卵巢颗粒细胞观察了ＥＧＦ与人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）共同作用对细胞增殖、甾体激素与ｃＡＭＰ生成的影响。结果：ＥＧＦ可明显抑制ｈＣＧ刺激的孕酮生成，并呈剂量依赖性，而对ｈＣＧ刺激的雌二醇生成无影响；ＥＧＦ对ｈＣＧ刺激的颗粒细胞ｃＡＭＰ生成具有增强作用，使ｃＡＭＰ生成增加；ＥＧＦ能刺激颗粒细胞增殖，使３Ｈ ＴｄＲ掺入增加，ｈＣＧ不影响ＥＧＦ的这种作用。提示ＥＧＦ与ｈＣＧ对卵巢功能的影响既有相互作用，又有各自的作用。     

肺腺癌患者表皮生长因子受体基因突变的临床意义

目的 检测肺腺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）基因第19和21外显子突变情况并探讨EGFR突变的临床意义。 方法 采用巢式PCR技术对161例肺腺癌患者手术标本的石蜡包埋癌组织EGFR基因第19和21外显子片段进行扩增并测序,分析EGFR突变与临床病理特征及预后的关系。 结果 161例肺腺癌组织中81例（50.3%）存在EGFR基因突变,其中第19外显子突变44例,第21外显子突变41例,4例第19和21外显子同时存在突变。年龄51～60岁和＞60岁的EGFR突变率均明显高于≤50岁的（P﹤0.05）,细支气管肺泡癌（69.7%）中的EGFR突变率明显高于腺癌（45.3%）（P=0.013）,存在EGFR突变的患者中位生存期较长（P=0.0177）,EGFR突变与性别、吸烟史和临床TNM分期无关。 结论 EGFR突变在年龄＞50岁肺腺癌患者中较多见,细支气管肺泡癌中的EGFR突变率明显高于腺癌,存在EGFR突变的患者预后较好。