Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响

目的 观察Ku80分子表达对肝癌细胞DNA双链损伤水平的影响.方法 Western blot检测40例肝癌和癌周组织中γ-H2AX和Ku80表达水平;将Ku80基因转染到SMMC7721细胞;免疫荧光和Western blot检测y-H2AX焦点分布和蛋白表达.结果 γ-H2AX在肝癌组织中的表达与癌周比较明显增高(31/40,77.5％),而Ku80表达明显减低(30/40,75％),γ-H2AX表达上调与Ku80表达下调相关(P＜0.05);筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞;免疫荧光结果显示,Ku80 高表达克隆γ-H2AX焦点数目与对照组比较明显减低(P＜0.01);Western blot显示,Ku80高表达克隆γ-H2AX表达与对照组比较明显减低.结论 Ku80表达下调与肝癌细胞的DNA双链损伤相关,Ku80分子表达可减低肝癌细胞DNA双链损伤水平.     

细胞增殖对DNA损伤敏感度的影响

目的 观察细胞增殖状态对DNA损伤敏感度的影响.方法 相同时间和强度的紫外线(uV)作用于过以及未经过植物m凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞(PBLs),荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DSBs)处的,y-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤,用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.结果 经PHA刺激PBLs细胞进人增殖状态,UV可引起DNA双链断裂,增殖期的PBLs细胞DNA损伤程度明显大于静止期PBLs细胞.结论 受到相同打击后,处于增殖期的淋巴细胞DNA损伤较静止期更为明显.     

协同刺激分子B7-H3与B7-H4联合效应对胃癌患者预后的影响

目的 探讨胃癌组织中协同刺激分子B7-H3和B7-H4的表达水平对胃癌患者预后的影响及其与临床病理特征的关系.方法 采用回顾性研究随访调查157例胃癌患者的相关临床资料;应用免疫组织化学染色法检测相关病理指标及胃癌患者手术标本中B7-H3、B7-H4的表达;胃癌患者不同临床特征与B7-H3、B7-H4表达水平的相关性采用x2检验,不同临床特征患者的无进展生存期(PFS)及总生存期(OS)的比较采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验,拟合多因素Cox模型,用风险比(HR)及95％可信区间(CI)估计不同临床指标与复发和死亡结局的联系强度.结果 B7-H3、B7-H4表达水平与不同临床特征之间无明显相关;单因素生存分析显示年龄较大(＞60岁)、分期较晚、肿瘤较大(＞5 cm)、浸润较深(侵及深肌层)、远处转移及协同刺激分子B7-H4高表达等显著减少PFS及OS(P ＜0.05);多因素Cox模型分析提示,与Ⅰ期[5.58(95％ CI:1.27 ～24.58)]比较,Ⅳ期胃癌患者复发和死亡的HR分别为6.20(95％ CI:1.31 ～29.34);与肿瘤直径≤5 cm的患者[1.95(95％ CI:1.20 ～3.18)]比较,肿瘤直径＞5 cm的患者其为1.97(95％CI:1.19 ～3.25);相对于其他表达组,B7-H3低表达且B7-H4高表达的胃癌患者复发和死亡的HR分别为1.92(95％ CI:1.20 ～ 3.10),1.93(95％CI:1.19 ～3.10).结论 B7-H3、B7-H4不同表达水平对胃癌患者PFS和OS有显著影响.     

DNA损伤修复相关因子在宫颈癌组织中表达的研究

目的探讨DNA损伤修复相关因子组蛋白H2AX和毛细血管扩张性共济失调突变因子(ataxia telangiectasia mutation,ATM)在宫颈癌组织中的表达水平及诊断意义。方法选取2016年1月~2017年7月我科宫颈癌30例(宫颈癌组),同时选取非宫颈癌18例为对照组,对宫颈癌组和对照组宫颈组织进行HE染色和免疫组化染色,在mRNA水平检测H2AX和ATM的表达情况,以磷酸化抗体检测磷酸化H2AX(γH2AX)与磷酸化ATM(phospho-ataxia telangiectasia mutation,p ATM)水平。结果荧光定量PCR分析宫颈癌组ATM mRNA为2.8546±0.8881,明显高于对照组1.0018±0.4980(t=9.256,P=0.000);宫颈癌组H2AX mRNA为2.4312±0.8224,显著高于对照组0.7896±0.4791(t=8.738,P=0.000)。γH2AX和p ATM主要在细胞核中表达,γH2AX阳性率80.0%(24/30),显著高于对照组11.1%(2/18)(Z=-3.381,P=0.000);宫颈癌组p ATM阳性率83.3%(25/30),显著高于对照组16.7%(3/18)(Z=-4.031,P=0.000)。结论γH2AX和p ATM在宫颈癌中高表达,作为DNA损伤修复因子对宫颈癌的早期诊断有一定的临床意义。     

青蒿琥酯诱导胃癌细胞发生胀亡及其机制研究

众多研究报道青蒿素及其衍生物具有抗多种肿瘤细胞的作用,并且还具有毒性低,不存在交叉耐药,可以逆转肿瘤细胞的多药耐药等优势[1].本研究为了阐明青蒿琥酯诱导胃癌细胞SGC-7901发生胀亡并且探讨其机制,为临床胃癌的治疗提供新的调控靶点. 材料与方法 一、材料 人胃腺癌细胞株SGC-7901由上海生命科学研究所提供;青蒿琥酯购自桂林南药股份有限公司,国药准字H10930195,批号LA100703;PrimeScript RT reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqTM购自日本Takara公司;兔抗人calpain2多克隆抗体购自美国abcam公司;兔抗人p-P38多克隆抗体购自美国CST公司.     

XPD基因多态性和肿瘤遗传易感性的研究进展

DNA修复系统参与修复内外环境因素所致的DNA损伤,以维持基因组的稳定[1].核苷酸切除修复(NER)是重要的DNA修复系统,主要修复嘧啶二聚体和结构大的致癌物-DNA加合物和各种引起DNA螺旋扭曲变形的损伤.人类着色性干皮病基因D(XPD)是NER途径的重要组成部分,XPD基因单核苷酸多态性(SNPs)可能通过改变DNA修复能力,影响肺、食管、肝脏等多个部位肿瘤的发病风险[2-4].     

细胞核内β-连环素表达水平在胃癌中的临床研究

目的:探讨细胞核内β-连环素表达水平与胃癌临床病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测77例胃癌组织及30例癌旁组织细胞核中β-连环素表达水平,分析其与肿瘤组织浸润深度、淋巴结转移、组织分化程度、临床分期的关系。以无病生存时间(DFS)和总生存时间(OS)为评价指标,探讨β-连环素与胃癌患者预后的关系;ROC曲线衡量β-连环素在评估胃癌患者预后中的价值。结果:胃癌肿瘤组织细胞核内β-连环素的表达水平与年龄、性别无关(P0.05),与肿瘤的浸润深度、淋巴结的转移、TNM分期以及肿瘤的分化程度有关。Kaplan-Meier生存曲线显示:肿瘤组织细胞核内β-连环素阴性表达者DFS(26月)和OS(38月)优于阳性表达者DFS(18月)和OS(24月)(P0.05);COX多因素分析:细胞核内β-连环素的表达可以作为胃癌患者OS独立预后因素(HR=0.87,95%CI:0.54~2.34,P=0.03);ROC曲线显示,β-连环素在评估胃癌患者预后中具有中等价值(曲线下面积为0.82)。结论:胃癌组织细胞核内β-连环素表达水平与胃癌的TNM分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关性,与肿瘤的分化程度呈负相关性,可能是胃癌患者预后较差的标志物。     

胃癌组织中nm23-H1、c-Met和survivin蛋白表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中nm23-H1、c-Met、survivin蛋白表达及其临床意义.方法 对50例胃癌蜡快标本,运用S-P免疫组化技术检测nm23-H1、c-Met、survivin蛋白表达情况.并分析各基因表达与胃癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及转移和复发之间的关系.结果 nm23-H1、Cmet、survivin蛋白表达率分别为46%、72%、80%,胃癌TNM分期、淋巴结转移与nm23-H1蛋白低表达有密切关系,c-Met蛋白的高表达与胃癌TNM分期、淋巴结转移有密切关系,survivin蛋白的高表达与胃癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移有密切关系,nm23-H1蛋白表达与survivin表达呈负相关,c-Met蛋白的表达与survivin表达旱正相关.结论 nm23-H1蛋白低表达和c-Met、survivin高表达对于早期诊断和预后分析有重要指导意义,据其表达开展有选择性地基因治疗应有一个良好的应用前景.     

共刺激分子B7-H3 mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究B7家族的新成员B7-H3mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用荧光实时定量逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测38例胃癌患者癌组织及其邻近正常组织B7-H3mRNA的表达；免疫组织化学Elivision法检测B7．H3蛋白在胃癌组织中的表达。结果B7-H3mRNA在胃癌组织及其邻近正常组织中均有表达，其在胃癌组织中的表达明显低于邻近正常组织。B7-H3mRNA的表达与胃癌患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级和浸润深度无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白在胃癌组织中表达的阳性率为39、5％，其与患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移和浸润深度也无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白表达随肿瘤临床分期的递增而降低，各组间差异有统计学意义（P=0.022）；病理分级各组间差异也有统计学意义（P=0.039）。Kaplan—Meier生存分析显示，B7-H3阳性表达组无病生存期明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.009），B7-H3阳性表达组总生存期亦明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.010）。结论B7-H3表达与胃癌预后有关，可以作为反映患者免疫状态和预后的一个新的指标．为制定临床治疗方案提供依据。     

血清滋养层细胞表面蛋白2抗体诊断非小细胞肺癌的临床价值

滋养层细胞表面蛋白2(TROP2)最早发现于人类正常的滋养层细胞中,是一种细胞表面糖蛋白,在人类肿瘤细胞中高表达,但在大部分正常组织中不表达或低表达[1-3].Nakashima等[4]研究结果显示,75例食管鳞状细胞癌患者的血清中TROP2抗体阳性率明显升高,而且其水平与肿瘤大小明显相关,说明TROP2抗体与肿瘤的发生发展密切相关,可作为一种新的肿瘤标志物.我们检测不同分期非小细胞肺癌患者血清中TROP2抗体水平变化,探讨其在非小细胞肺癌诊断中的价值.     

Lxn,bcl-2,c-myc在胰腺癌干细胞中的表达及意义

本研究通过免疫磁珠分选技术分选出胰腺癌细胞株Miapaca-2中的CD133+细胞,并检测lxn,bcl-2,c-myc在CD133+与CD133-细胞中表达,探讨其可能的生物学意义. 材料与方法 1.主要试剂:免疫磁珠分选设备及试剂(CD133Microbead Kit,human),流式抗体[CD133/2(293c3)-PE]均购自德国Miltenyi公司,兔抗人lxn多克隆抗体(ab103485),兔抗人bcl-2多克隆抗体(ab18210),鼠抗人c-myc单克隆抗体(ab32)均购自英国Abcam公司;鼠抗人β-actin单克隆抗体购自碧云天;Trizol试剂购自美国Invitrogen公司;逆转录试剂盒(RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit)购自美国的Fermentas(MBI)公司;荧光实时定量PCR试剂盒(SYBR(R)Premix Ex TaqTM)购自大连宝生物公司;PCR引物序列由上海基康生物公司设计合成.     

nm23—H1与胃癌的分化、浸润转移的关系

目的 分析nm23-H1在胃癌分化、浸润转移中的作用及其表达的临床意义。方法 应用ABC免疫组化方法，研究46例原发性胃癌组织及其转移淋巴结nm23-H1的表达。结果 45．6％(21/46)的胃癌nm23-H1表达下降。nm23-H1的高表达与Borrmann分型、组织学分型无关(P＞0．05)，而与肿瘤大小、胃癌浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移密切相关(P＜0．05)。另外54．4％的分化型胃癌nm23-H1的表达高于其淋巴结转移癌，而在低分化型胃癌中有53．8％。结论 nm23-H1可能对胃癌的浸润、淋巴结转移有抑制作用，但与胃癌的分化无关。     

促血管生成素2在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理的关系

促血管生成素 2 (Ang 2 )是新近发现的一种与肿瘤有关的蛋白分子[1] ,我们采用WesternBlot及免疫组化技术检测胃癌组织Ang 2蛋白的表达水平,探讨Ang 2在胃癌的发生、发展及肿瘤血管生成中的调节作用。一、材料与方法1.病理标本的收集:5 3例胃癌标本选自1995～1999年,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科手术切除并经病理检查确诊的组织。其中男3 7例,女16例,年龄3 5～76岁,平均62 .4岁。根据国际抗癌协会1988年公布的临床病理分期标准对患者进行分组。取10例正常胃黏膜(同济医学院法医学系提供)作正常对照。2 .免疫印迹 WesternBlo…     

P57蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

P57是一种候选的肿瘤抑制基因。我们通过检测P57蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌病理学各因素之间的关系及其临床意义。1.材料与方法:选用我院2002年1月至2003年1月胃癌根治标本30例。其中男18例、女12例,年龄24～74(平均52.8)岁。高、中分化胃癌11例,低分化胃癌19例。早期原发癌7例,进展期胃癌23例。选12例胃正常黏膜组织标本为对照组。组织标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,采用免疫组化SP法进行染色。一抗为鼠抗人P57单克隆抗体,二抗为生物素标记的羊抗鼠抗体。所用的抗体及SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物…     

组织因子在胆管癌中表达及临床意义

近来研究表明组织因子(tissue factor,TF)在肿瘤的血管生成、生长、转移中发挥重要的作用[1]。本文研究了TF与胆管肿瘤的相关性,以为临床诊断及治疗提供依据。1材料与方法1.1病例原发胆管癌39例,均经手术切除并经病理确诊。年龄38~76岁,男22例,女17例。高分化腺癌21例,低分化腺癌11例,乳头状腺癌2例,黏液腺癌5例。按国际抗癌联盟(UICC)临床分型,Ⅰ型2例,Ⅱ型Ⅰ型8例,Ⅲ型21例,Ⅳ型8例。有淋巴结转移25例。1.2试剂Trizol提取组织总RNA试剂盒购自上海华舜生物公司,反转录试剂盒购自FERMENTS公司,Tap酶和DNA Ladder Marker购自上海…     

p53在黑素细胞对抗紫外线或H2O2诱导的氧化应激中的作用

目的 通过紫外线照射(UVR)或过氧化氢(H2O2)对人黑素细胞p53的表达影响,并使用p53激活剂顺式咪唑啉衍生物-3(nutlin-3)和p53抑制剂(PFT-α)对人黑素细胞UVR或H2O2的氧化应激脱氧核糖核酸(DNA)损伤的影响,探讨p53在人黑素细胞对抗氧化应激中的作用.方法 Western印迹法测定UVR、不同浓度H2O2、nutlin-3和PFT-α处理后的人黑素细胞p53表达；单细胞电泳实验(彗星分析)测定nutlin-3或PFT-α对人黑素细胞UVR或H2O2氧化应激DNA损伤的影响；γ-H2AX免疫荧光实验测定nutlin-3对人黑素细胞UVR氧化应激DNA损伤的影响.结果 Western印迹结果显示UVR、H2O2可以增加人黑素细胞总p53的表达,并且是伴随着15丝氨酸磷酸化p53的增高而增高,nutlin-3和PFT- α分别增加和减少人黑素细胞内p53表达；彗星分析显示,预先使用nutlin-3可以明显减少UVR或H2O2造成的DNA损伤的尾素,PFT- α明显增加UVR或H2O2造成的DNA损伤的尾素,差异具有统计学意义(P＜0.05)；流式细胞仪分析显示预先使用nutlin-3可以减少UVR造成的γ-H2AX表达.结论 p53在人黑素细胞对抗UV或H2O2诱导的氧化应激中起着重要的作用.     

胃癌患者血清IL-6及自身抗体的研究

肿瘤患者体内可存在多种自身抗体[1].近几年,白细胞介素6(IL-6)被发现在肿瘤患者血清中增高[2].本实验通过检测胃癌患者血清中的自身抗体[(类风湿因子(Rf)和抗核抗体(ANA)]及IL-6的水平,探索二者问的关系.     

B7-H3在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 本研究旨在探讨B7-H3在肾透明细胞癌发生发展中的作用,为临床诊断、治疗肾癌提供新的靶标.方法 应用免疫组织化学染色检测69例肾透明细胞癌患者手术标本中肾癌组织、瘤旁组织及远离肿瘤组织中B7-H3的表达并对其表达情况与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分期、淋巴结转移等进行相关分析.结果 B7-H3在肾透明细胞癌组织中弥漫性表达,定位在癌细胞胞膜以及血管内皮细胞胞浆中.①B7-H3在肾透明细胞癌组织血管内皮细胞、肾癌细胞、瘤旁肾组织以及远离肿瘤正常组织中阳性表达率分别为79.7%、75.4%、13.0%及0%;②B7-H3癌组织中的表达强度与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移无关;但表达强度高者病理分期较高(P<0.01).结论 B7-H3在肾透明细胞癌癌组织中确有高表达,而在瘤旁肾组织表达较低,远离肿瘤的正常肾组织无表达,并且其表达率与表达强度与肿瘤的病理分期密切相关,这表明B7-H3与肾透明细胞癌的发生发展有着重要的关系,有望成为进行肾癌免疫治疗和抗血管治疗的"共靶点".     

DEC1和STAT3在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨DECl和S1-AT3在胃癌组织中的表达及其在胃癌发病机制中的作用.方法:利用免疫组织匕学方法检测59例胃癌组织中DEC1、STAr3 2种蛋白的表达情况,以19例癌旁正常组织作为对照.结果:DECl蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为71.2%,高于癌旁正常组织的阳性表达率(26.3%.P<0.05).胃癌组织中的DECl表达与STAT3表达呈正相关,与肿瘤的分化程度有关,但与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、有无淋巴结转移及远处转移无关;STAT3蛋白的表达与肿瘤的TNM分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关,而与患者性别、年龄、肿瘤大小及远处转移无关.结论:DEC1蛋白在胃癌组织中高表达,且与STAT3蛋白的表达相关.DECl和STAT3均为转录调节因子,二者的相互调节很可能在胃癌的发生发展中具有重要作用.     

DAL-1/4.1B在大肠癌组织中的表达及其意义

本研究旨在检测DAL-1/4.1B在大肠癌组织中的表达,探讨其在大肠癌的发生发展中的机制. 一、材料和方法 1.一般资料:收集华中科技大学同济医学院附属协和医院2010年3月至2010年5月手术切除的大肠腺瘤标本10例,大肠癌标本30例,取30例距癌中心10cm处的正常组织作为正常组,大肠癌患者中男12例,女18例,年龄28～73岁;Dukes分期:A+B期8例,C+D期22例;高、中分化腺癌22例,低分化腺癌8例.试剂及方法:兔抗人多克隆抗体DAL-1/4.1B购自Abcam公司,SABC试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉公司.应用SABC法和Western blot检测DAL-1/4.1B的表达.